正交試驗法篩選芪術膠囊的提取工藝

崔翠翠　王瑛蘭　劉元昆

（威海市中醫院，山東 威海 264200）

正交試驗法篩選芪術膠囊的提取工藝

崔翠翠王瑛蘭劉元昆

（威海市中醫院，山東 威海 264200）

目的：篩選芪術膠囊的最佳提取工藝。方法：以提取次數、時間、加水量為考察因素，以出膏率、沒食子酸和馬錢苷含量為指標，采用正交設計，優選芪術膠囊的最佳提取工藝。結果：最佳提取工藝為：藥材加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。結論：優選出的提取工藝合理可行，為實際生產及其質量控制提供了依據。

芪術膠囊；提取工藝；出膏率；沒食子酸；馬錢苷；正交設計

芪術膠囊是本院專家的臨床經驗方，已經作為院內制劑在本院生產使用，并取得了良好的治療效果。該處方由山茱萸、山藥、白術、黃芪、丹參、甘草等11味中藥組成，功于補腎健脾、益氣通陽、活血化瘀。適用于脾腎陽虛，血脈瘀阻證的慢性萎縮性胃炎。癥見胃脘疼痛、食欲不振、疲乏無力、煩躁易怒、胃部發涼，舌質淡或有瘀斑、苔薄白，脈虛弱等。為了規范該制劑的提取工藝，本文以出膏率、沒食子酸和馬錢苷的含量為指標，采用正交設計對芪術膠囊的提取工藝進行研究，以期篩選該制劑提取的最佳工藝條件。

1　儀器和試藥

Agilent1220高效液相色譜儀（美國 Agilent公司）。

試驗所用藥材均購于山東菏澤泰山中藥飲片有限公司，符合2010年版《中國藥典》（一部）相關規定。所用樣品均由威海市中醫院制劑室生產。沒食子酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110831-200803）；馬錢苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：111640-201005）；高效液相用乙腈（色譜純）；其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1試驗設計

對該處方中有效成分為水溶性成分的5味中藥采用傳統水提取的制備方法。方中君藥山茱萸的主要有效成分為揮發油類、糖苷類和有機酸類［1］。馬錢苷為山茱萸的主要有效成分，具有明顯的免疫抑制活性和抗炎作用［2］，山茱萸抗家兔失血性休克和心源性休克的作用成分初步研究表明是馬錢苷等［1］，沒食子酸具有抗炎、抗氧化、抗突變、抗腫瘤等多種生物學活性［3］。本試驗以出膏率、沒食子酸和馬錢苷的含量作為指標，以提取次數、加水量和提取時間為考察因素，每個因素3個水平，見表1。

表1　因素水平

2.2樣品的制備

藥材投料量為處方的 1/10，共計 36 g，取 9份，按照正交試驗安排進行提取，濾過，合并濾液，濃縮至100 mL。

2.3出膏率的測定

取各樣品25 mL，濃縮，干燥，精密稱定，計算出膏率。

出膏率=干膏質量×4/原藥材質量×100%。

2.4沒食子酸和馬錢苷含量測定［4］

2.4.1供試品溶液制備取樣品1 mL用甲醇稀釋溶解至5 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4.2對照品溶液制備分別精密稱定沒食子酸和馬錢苷對照品適量，加75%甲醇溶解并定容得混合對照品，使沒食子酸和馬錢苷的濃度分別為5 mg/L和10 mg/L。

2.4.3陰性對照樣品溶液制備取除山茱萸外其他藥材處方量的 1/10，共計 30 g，加 8倍量水煎煮兩次，每次煎煮2小時，濾過，合并濾液，濃縮至100 mL。作為陰性對照溶液。

2.4.4色譜條件色譜柱：Agilent SB C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相：A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液，采用梯度洗脫法洗脫，具體洗脫程序見表2；檢測波長 0～ 7 min：270 nm，7～ 26 min：240 nm；柱溫30℃；流速：1 mL/min。圖譜見圖1。

表2　梯度洗脫程序

2.4.5樣品含量測定分別精密吸取混合對照品溶液10，20 μL，供試品溶液 20 μL，陰性對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計算，即得。

A對照品；B樣品；C陰性對照；1沒食子酸；2馬錢苷圖1　沒食子酸和馬錢苷HPLC圖

2.5數據處理與分析

有關試驗數據及其計算分析結果見表3～4。出膏率、沒食子酸和馬錢苷含量3個指標進行加權，分別為50，25，25分，對總分進行方差分析。可見空白列D項R值小，為誤差項，計算可知A、B因素對結果有顯著差異，C因素對結果影響不顯著。由表3的簡單比較可知，對于A，K2＞K3＞K1，故因素A選擇水平2，即提取2次；對于B，K3＞K2＞K1，因素B選擇水平3，即加水量10倍，對于C，K1＞K2＞K3，因素C選擇水平1，即提取時間1 h，從而確定最佳提取工藝為A2B3C1，即加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。

2.6驗證試驗

按照“2.5”項下優選出的芪術膠囊提取工藝條件制備3批樣品，分別測定指標成分的含量，并按“2.3”及“2.4”項下的方法計算出膏率、沒食子酸和馬錢苷的含量，結果見表5。

3小結和討論

3.1以提取次數、加水量和提取時間為考察因素，以出膏率、沒食子酸和馬錢苷的含量作為指標，采用正交試驗設計法，優選芪術膠囊的提取工藝，結果其最佳工藝為加10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h。加水量是影響煎出液質量的主要因素。驗證試驗說明優選的工藝條件穩定可行。

3.2在預試驗中曾選擇將5號樣品定溶于75%的乙醇和75%的甲醇溶液中，分別對其進行穩定性

表3　芪術膠囊正交試驗設計與結果

表4方差分析考察，發現75%的乙醇溶液穩定性差，2 h以后馬錢苷的含量明顯降低；75%的甲醇溶液穩定性好，分別放置0，2，4，8，12 h后進樣測定，結果計算得馬錢苷和沒食子酸峰面積的RSD分別為1.83% 和1.36%，表明定溶于75%甲醇溶液的樣品溶液在12 h內穩定性良好。

注：F0.05（2，2）=19.00；F0.01（2，2）=99.00

表5　驗證試驗樣品各指標成分含量測定結果

［1］劉洪，許惠琴.山茱萸及其主要成分的藥理學研究進展［J］.南京中醫藥大學學報，2003，19（4）：254-256.

［2］率曉東，楊勝，齊春會，等.山茱萸免疫活性部位F-1C的免疫抑制作用［J］.中國天然藥物，2004，2（1）：50-53.

［3］ 李肖玲，崔嵐，祝德秋.沒食子酸生物學作用的研究進展［J］.中國藥師，2004，7（10）：767-769.

［4］楊凌，朱昱，王曉華.HPLC檢測山茱萸中沒食子酸和馬錢苷的含量［J］.陜西中醫，2013，34（8）：1057-1059.

Optimization of Extraction Process of Qizhu Capsules by Orthogonal Experiment

Cui Cuicui，Wang Yinglan，Liu Yuankun（Weihai TCM Hospital，Shandong Weihai 264200，China）

Objective：To screening the optimal extraction process of qizhu capsules.Methods：The extraction process of qizhu capsules was optimized by orthogonal experiment using the extraction rate and the contents of gallic acid and loganin as indexes，while extraction times，time duration for extraction and water volume as factors. Results：The extraction process was optimized as extraction with 10 times of volume of water for 2 times，1 hour for each.Conclusion：The optimized extraction process is reasonable and feasible，which provides a basis for the actual production and quality control of the drug.

Qizhu Capsules；Extraction Process；Extraction Rate；Gallic Acid；Loganin；Orthogonal Experiment

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.06.007

崔翠翠，女，碩士，主管藥師。研究方向：中藥學。通訊作者E-mail：cuiatpingdu@163.com

2016-02-19）