改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基的應用效果

王洪亮，程艷宇，王夢曉（天津乳品食品監測中心，天津300381）

改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基的應用效果

王洪亮，程艷宇，王夢曉
（天津乳品食品監測中心，天津300381）

評估GB4789.11-2014《食品安全國家標準食品微生物檢驗β型溶血性鏈球菌檢驗》中改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基的質量。選取國內三家（標記為A、B、C）和國外一家（標記為D）培養基生產商的胰蛋白胨大豆肉湯培養基（商品化脫水合成培養基）和相應添加劑，使用目標菌（乙型溶血性鏈球菌FSCC225016）和非目標菌（大腸埃希氏菌ATCC25922），依據GB4789.28-2013《食品安全國家標準食品微生物檢驗培養基和試劑的質量要求》中選擇性增菌培養基的定性測試方法進行質量評估。同時不加添加劑進行試驗。國內A、B和C三家改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基中目標菌濁度值均為0，非目標菌濁度值為0；未加試劑的培養基目標菌濁度值均為0，非目標菌濁度值為0。國外D改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基中目標菌濁度值為2，非目標菌濁度值為0；未加試劑的培養基目標菌濁度值為2，非目標菌濁度值為1。國內A、B、C三家的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基質量評估證明是胰蛋白胨大豆肉湯培養基（不加添加劑）基礎成分的問題；國產胰蛋白胨大豆肉湯培養基質量有待提高。

改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基；選擇性增菌培養基；濁度值

食品安全監管及檢測是保障人民群眾“舌尖上的安全”的一項重點工作，為了使食品安全檢測工作更好的為食品安全監管服務，各項食品安全檢測標準都在不斷的清理和改進中。培養基和試劑作為微生物檢驗中的關鍵環節，所以培養基的質量尤為重要，我國的培養基生產廠家眾多，質量也參差不齊，本文對國內外培養基生產廠商的GB 4789.11-2014《食品安全國家標準食品微生物檢驗β型溶血性鏈球菌檢驗》中改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基的質量進行了評估，為今后β型溶血性鏈球菌的檢測工作提供一定參考。

1　材料

1.1培養基

腦心浸液肉湯（BHI）、改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基（國內三家A、B、C和國外一家D）。

1.2試驗標準菌株

乙型溶血性鏈球菌ATCC21059、大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923：購于廣州環凱微生物科技有限公司。

1.3儀器設備

高壓滅菌鍋：日本雅馬拓；隔水式恒溫培養箱：上海一恒科技有限公司。

2　方法

2.1培養基

將待評估培養基按說明書配制，高壓滅菌后分裝無菌試管，每管10 mL。

2.2工作菌懸液的制備

將標準菌株接種到腦心浸液肉湯（BHI）36℃培養過夜，進行10倍系列稀釋至10-3，作為工作菌懸液。

2.3接種

用1 μL接種環取一環工作菌懸液直接接種到用于性能測試的液體培養基中，36℃培養24 h。

2.4結果解釋

用目測的濁度值（如0～2）評估培養基：0表示無混濁；1表示很輕微的混濁；2表示嚴重的混濁。

目標菌的濁度值應為2，非目標菌的濁度值應為0 或1。有時可以觀察到微生物生長后聚集成細胞團，沉積在試管或瓶子底部，發生這種情況時，小心振蕩試管后再進行觀察。選擇性液體計數培養基目標菌應有產氣現象，非目標菌無產氣現象。

3　結果與討論

濁度值的實驗結果見表1。

表1　A、B、C、D四家生產的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基的濁度值Table 1　A，B，C，D modified tryptone soy broth four production medium turbidity value

國內三家生產的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基不能滿足檢驗工作的要求，由試驗結果顯示出，是基礎培養基中的成分不能滿足菌種的生長要求，而國外生產的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基能滿足檢驗工作的要求。因此，期待國內微生物培養基生產廠家要進一步加強培養基原料的質量控制，進而加強檢驗工作的可靠性和準確性。

4　小結

培養基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎，事關檢測工作的準確性、可靠性，在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環節的質量問題，導致偏離檢驗結果的科學性、客觀性。因此，認真地做好培養基的質控工作，不斷完善和提高培養基的質控水平，為微生物檢測實驗室提供高質量的培養基，至關重要。

根據對4家培養基生產商的改良胰蛋白胨大豆肉湯培養基進行質量評估，一方面顯示出國內3家的不能滿足檢驗要求，從試驗結果看出，是基礎培養基的問題；另一方面，也證明了對于檢驗工作，培養基質量評估的重要性。

［1］陸承平．獸醫微生物學［M］.4版.北京：中國農業出版社，2007：67-73

［2］葉應嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗操作規程［M］．3版.南京：東南大學出版社，2006：763-769

［3］紀鐵鵬．乳品微生物學［M］．北京：中國輕工業出版社，2006：1-12

［4］吳福平，邵景東，姚衛蓉，等．食品中β-溶血性鏈球菌檢驗技術的研究［J］．中國國境衛生檢疫雜志，2010，33（1）：47-49

［5］中華人民共和國衛生部．GB 4789.11-2014食品安全國家標準食品微生物學檢驗金β型溶血性鏈球菌檢驗［S］．北京：中國標準出版社，2014

［6］中華人民共和國衛生部．GB 4789.28-2013食品安全國家標準食品微生物學檢驗培養基和試劑的質量要求［S］．北京：中國標準出版社，2013

Effect of Modified Tryptone Soy Broth Medium

WANG Hong-liang，CHENG Yan-yu，WANG Meng-xiao
（Dairy and Food Monitoring Center，Tianjin 300381，China）

Evaluation of GB 4789.11-2014＜National food safety standard Food microbiological examination：β-hemolytic streptococcus test＞in modified tryptone soy broth medium quality.a total of three domestic（labeled A，B，C）and foreign（labeled D）a culture based manufacturer of tryptone soya broth culture base（commercial dehydration synthetic culture medium）and the corresponding additives，use target bacteria（βhemolytic streptococcus ATCC21059）and non target bacteria（Escherichia coli ATCC25922，Staphylococcus aureus ATCC25923），according to the GB4789.28-2013＜National food safety standards Food microbiological examination Quality requirements for media and reagents＞in selective enrichment culture based qualitative test method for quality evaluation.At the same time without additives test.The A，B and C three modified tryptone soy broth culture medium target bacteria turbidity values are 0 and non target bacteria turbidity value of 0；without reagent medium target bacteria turbidity values are 0，non target bacteria turbidity value of 0.Foreign D improvement of the pancreatic tryptone soya broth culture medium target bacteria turbidity value is 2，non target bacteria turbidity value of 0；without reagent culture based target bacteria turbidity value of 2，non target bacteria turbidity values for 1.Domestic A，B，C three modified tryptone soy broth medium quality assessment that is tryptone soya broth culture medium（without additives）based problem；domestic tryptone soya broth culture medium quality needs to be improved.

modified trypticase soy broth medium；selective enrichment medium；turbidity value鏈球菌歸屬于鏈球菌屬，在伯杰氏系統細菌學手冊列有30多個種。鏈球菌種類很多，在自然界分布很廣，水、塵埃、動物體表、消化道、泌尿生殖道黏膜、乳汁等都有存在，有些是非致病菌，有些構成人和動物的正常菌群。在鏈球菌屬中與食品衛生和安全有關的鏈球菌主要是β-溶血性鏈球菌，尤以A群鏈球菌（如化膿鏈球菌）和B群鏈球菌（如無乳鏈球菌）為主。β-溶血性鏈球菌對人的毒力較強，能夠引起各種化膿性疾病、肺炎、傷口感染和敗血癥等?；撴溓蚓鸀棣?溶血、對地衣桿菌素敏感、PYR陽性具有蘭氏A群抗原，可形成大菌落，是人體的重要致病菌之一。該菌有多種毒力因子（M蛋白、脂磷壁酸酶、毒素），可引起多種感染，包括咽炎、呼吸道感染皮膚感染（膿皰病、丹毒）、軟組織感染、心內膜炎、腦膜炎、產褥期膿毒病、關節炎，產毒素的菌株引起的感染可導致猩紅熱或更嚴重的中毒性休克綜合征。無乳鏈球菌是發生以產褥期膿毒癥和腦膜炎為特征的新生兒感染的一個重要原因。近年來，在北美洲和歐洲伴發中毒性休克綜合征的嚴重鏈球菌感染有增多的趨勢［1-4］。

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.10.035

王洪亮（1981—），男（漢），工程師，碩士研究生，從事食品微生物檢測。

2016-03-08