ＨＣＶ核心抗原在丙肝檢測中的應用分析

何淑霞

【摘要】 目的 探討HCV核心抗原在丙肝檢測中的應用。方法 收集2005年10月至2008年10月本院門診和住院HCV感染患者血清標本98份。本組病例均經HCVRNA檢測為陽性，再進行抗-HCV、HCV-cAg檢測了解檢測結果及符合率。結果 HCV核心抗原陽性91例，符合率92.85%；抗-HCV陽性79例，符合率80.61%；HCV核心抗原與抗-HCV的HCVRNA符合率比較P<0.05有統計學意義。結論 通過本組數據觀察分析HCV核心抗原檢測與HCVRNA符合率92.85%，說明了HCV核心抗原檢測技術反映了HCV復制的間接指標,預防窗口期感染，本方法簡便、快捷、價廉,所需設備簡單,可進行批量檢測等優點。

【關鍵詞】丙型肝炎;HCV;核心抗原;HCV RNA;抗-HCV;臨床應用

丙型肝炎病毒(HCV)感染人體后,有將近一半的人會變為慢性肝炎^[1]，早期診斷仍是防止HCV 傳播的有效手段。2001 年Ortho 公司推出了檢測HCV 核心抗原(HCV-cAg)ELISA 試劑,通過大量臨床考核評價,在抗-HCV陰性樣本中,仍檢出少量HCV-cAg 陽性病例,證明HCV-cAg 檢出可比抗體早^[2]。為了進一步對HCV 核心抗原檢測進行探討，筆者對此進行了綜合的檢測比較，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2005年10月至2008年10月本院門診和住院HCV 感染患者血清標本98 份。本組患者均經HCV RNA檢測為陽性；98例患者男性50例，女性48例；急性丙型肝炎42例，慢性丙型肝炎56例。

1.2 試劑和儀器 抗-HCV試劑由廈門新創公司提供；HCV-cA g ELISA 試劑由湖南景達基因公司提供；HCV RT2PCR熒光定量試劑由上海科華公司提供。洗板機(ST236W)和酶標儀(ST2360)為上海科華實業有限公司生產PCR擴增儀(L igh t Cycler)。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 HCV核心抗原測定：先加樣品處理液對樣品進行預處理30 min,將抗原抗體復合物中的結合抗原游離,采用ELISA技術,利用包被在酶標板固相載體上的單克隆抗體捕獲,待測樣本中的HCV抗原,然后加入與包被抗體識別不同抗原表位的酶標記的不同株單克隆抗體檢測。利用Bio-TekELX800酶標儀,在450 nm 波長進行比色,測定各孔的OD值。臨界值(CO)=陰性對照平均值+0.06,低于臨界值為陰性,高于臨界值為陽性抗-HCV抗體檢測:采用間接ELI SA方法檢測血清或血漿中丙型肝炎病毒的抗體。在微孔中預包被基因表達HCV抗原,與樣品中的抗-HCV抗體反應,再加入HRP標記的羊抗人-IgG酶標抗體與之結合,然后加入底物TMB作用顯色。利用Bio-Tek ELX800于450 nm波長下進行比色,測各孔OD值,臨界值(CO)=陰性對照均值×2.8,樣品OD值/CO≥1為陽性,樣品OD值/CO<1為陰性。

1.3.2 觀察內容 本組病例均經HCV RNA檢測為陽性，再進行抗-HCV、HCV-cA g檢測了解檢測結果及符合率:(指相同項目不同方法均為異常或均為正常的樣本比率之和。)

1.3.3 統計學方法 采用χ²檢驗。組間采用t檢驗。

2 結果

3 討論

丙肝可以通過輸血、靜脈吸毒、密切接觸等途徑傳播,而輸血和注射是我國丙型肝炎重要的傳播途徑，目前的常用的檢測方法，抗-HCV 抗體檢測進行篩查和疾病的診斷,使輸血后丙型肝炎的發生率大大降低^[3]，應用抗-HCV ELISA法還存在的一大缺陷是“窗口期”長,約為50 d左右,仍有漏檢現象,抗-HCV 檢測試劑盒無法檢出^[4]還不能完全預防輸血后HCV 感染的發生。

HCV RNA,被視為HCV 病毒復制的直接標志,可以縮短感染后血清陽轉前的檢測窗口期,以實現HCV 感染的早期診斷。PCR 法檢測的影響因素較多,在樣本收集、儲存和檢測方面都有嚴格的要求。而且要求昂貴精密的儀器、較高的實驗技藝,試劑也比較昂貴,又容易出現交叉污染導致假陽性結果,使得PCR 技術的推廣受到了極大的限制。

2001 年Ortho 公司推出了檢測HCV 核心抗原(HCV-cAg)ELISA試劑臨床考核證明HCV-cA g檢出可比抗-HCV平均約早23~46 d^[5],通過本組數據觀察分析HCV核心抗原檢測與HCV RNA符合率92.85%，說明了HCV核心抗原檢測技術反映了HCV復制的間接指標,預防窗口期感染，本方法簡便、快捷、價廉,所需設備簡單,可進行批量檢測等優點。

參 考 文 獻

［1］ 朱忠政,叢文銘.乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒在肝癌發生中的作用研究進展.中華肝臟病雜志,2003,11(9):5741.

［2］ Widell A,Molnegren V,Pieksma F,et al.Detection of hepatitis C coreantigen in serumor plasma as a marker of hepatitis C viraemia in the sero-logical window2phase.Transfusion Med,2002,12(2)107.

［3］ 潘衛,方芳.抗-HCV陰性獻血員中丙型肝炎病毒RNA檢測及序列分析.中國病毒學,1997,12(1):39-42.

［4］ 陳鋒,江訓良,鄧蘭軍.1 203例泌尿生殖道衣原體和支原體感染檢測及藥敏分析.實用預防醫學,2006,14(1):194-1961.

［5］ W idellA,Mo lnegren V,P iek sma F,et al.Detection of hepatitisC co re antigen in serum o r p lasma as a marker of hepatitis Cviraem ia in the sero logical w indow phase.T ransfusion M ed,2002,12(2):107-113.