黃芪粗提物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用

王　瑩，　劉馨宇，　王沙沙，　郭　澤，　張雪梅

(延邊大學農學院動物醫學系，吉林 延吉 133002)

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黃芪粗提物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用

王瑩，劉馨宇，王沙沙，郭澤，張雪梅*

(延邊大學農學院動物醫學系，吉林 延吉 133002)

摘要：通過連續灌胃酒精建立小鼠急性酒精性肝損傷模型，研究黃芪粗提物對小鼠肝臟的保護作用。設空白組、模型組、陽性組和黃芪粗提物高、中、低劑量組(8、4、2 g/kg)，分別檢測肝臟指數，血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)以及肝臟中總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量，采用HE染色觀察肝臟損傷和脂肪變性情況。結果表明:黃芪粗提物下調肝臟指數，減少血清中ALT、AST以及肝臟中TC、TG的分泌，抑制肝臟損傷和脂肪變性形成，與模型組比較，黃芪粗提物高劑量組具有極顯著差異(P<0.01)，黃芪粗提物中、低劑量組具有顯著差異(P<0.05)。黃芪粗提物對小鼠急性酒精性肝損傷有保護作用，可為黃芪粗提物在臨床上的應用提供理論指導。

關鍵詞：急性酒精性肝損傷；黃芪粗提物；小鼠；脂肪變性

酒精性肝病(ALD)是由于長期大量飲酒而引起的肝臟損傷性疾病，也是我國常見的肝臟疾病之一[1]。根據病理組織學觀察，酒精性肝損傷分為4個階段：酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化[2]，其機制尚未完全闡明。目前研究表明，酒精在肝臟的代謝過程中干擾營養物質代謝并通過炎癥和免疫反應產生肝臟損傷，同時局部缺氧和病毒疊加加重了肝臟損傷的進程[3]。黃芪(Astragalusmembranaceus)是最古老中草藥之一，味甘、微溫，歸肺、脾經，咀嚼有微豆腥味[4]，具有升陽補氣，固表止汗，脫毒排膿等功效[5]。現代藥理學研究表明，黃芪具有保護心肌，降壓舒張血管，改善代謝功能，能增強免疫細胞活性，止汗、利尿等多種作用[6]，但對酒精性肝病治療方面的研究較少。本試驗通過研究黃芪粗提物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用，為黃芪在臨床上的開發與應用提供可靠的理論依據。

1材料與方法

1.1供試動物

昆明種小鼠，雄性，(18±2) g(購自延邊大學實驗動物中心)。

1.2藥品與試劑

黃芪(購于吉林省延吉市延西大藥房)；56°紅星二鍋頭(購于北京紅星釀酒總廠)；聯苯雙酯滴丸[購于吉林省延吉市延西大藥房(批號：A02141208)]；谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)、總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)試劑盒(均購于南京建成生物工程研究所)。

1.3黃芪粗提物的制備

黃芪飲片400 g, 浸泡過夜，加熱回流，過濾，重復3次后，合并濾液，濃縮至1.8 g/L。

1.4試驗分組、造模與給藥

將30只小鼠隨機分為空白組、模型組、陽性組和黃芪粗提物高、中、低劑量組，每組5只。除空白組外其余各組均灌胃56°紅星二鍋頭20 mL/kg, 連續15 d。自造模第1天起，黃芪粗提物高、中、低劑量組及陽性組灌胃給藥1次/d，藥物組給予黃芪粗提物分別為8、4、2 g/kg，陽性組給予聯苯雙酯1.8 mg/kg，連續15 d，空白組和模型組灌胃等體積生理鹽水。

1.5各指標檢測

末次給藥12 h后稱重，眼球取血，制備血清，測定血清中AST和ALT的含量；剝離肝臟，稱濕肝重，計算肝臟指數；用生理鹽水制備10% 肝勻漿，測定肝勻漿中的TC和TG含量；部分肝臟固定，采用HE染色，觀察肝臟損傷和脂肪變性等情況。

1.6統計學分析

2結果與分析

2.1黃芪粗提物對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟指數的影響

由表1可知,模型組與空白組比較，差異極顯著(P<0.01)。黃芪粗提物高、中劑量組與模型組比較差異極顯著(P<0.01)，低劑量組與模型組比較差異顯著(P<0.05)。結果表明：黃芪粗提物能夠顯著下調肝臟指數，且高、中、低劑量組呈一定的量效關系。

表1　黃芪粗提物對小鼠肝臟指數的影響

注：與空白組比較，##表示P<0.01；與模型組比較，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

2.2黃芪粗提物對急性酒精性肝損傷小鼠血清中ALT、AST及肝臟中TC、TG的影響

由表2可知,各因子模型組與空白組比較，差異極顯著(P<0.01)。黃芪粗提物高、中劑量組與模型組比較差異極顯著(P<0.01)，低劑量組與模型組比較差異顯著(P<0.05)。結果表明：黃芪粗提物能夠抑制血清中ALT、AST以及肝臟中TC、TG的分泌，且黃芪粗提物高、中、低劑量組呈一定量效關系。

表2　黃芪粗提物對血清中ALT和AST以及肝臟中TC和TG的影響

注：與空白組比較，##表示P<0.01；與模型組比較，*表示P<0.05，**表示P<0.01。

2.3黃芪粗提物對急性酒精性肝損傷小鼠病理組織學的影響

肝組織HE染色結果見圖1。空白組肝細胞基本完整，肝小葉清晰，肝索以中央靜脈為中心呈放射狀排列(圖1a)。模型組肝細胞排列紊亂，肝小葉結構模糊，核碎裂、溶解，可見顆粒變性、炎性細胞浸潤和點、片狀壞死，胞漿、胞核淡染，且有細小脂滴蓄積(圖1b)。陽性組肝細胞結構接近于完整(圖1c)。黃芪粗提物高、中、低劑量組依次減輕肝細胞壞死程度，顆粒變性、炎細胞浸潤和點狀壞死明顯減少，肝細胞脂肪變性程度依次減輕(圖1d～f)。結果表明，黃芪粗提物高、中、低劑量組可不同程度抑制肝細胞壞死和脂肪變性形成。

圖1　黃芪粗提物對小鼠脂肪變性的影響(100×)

2.4黃芪粗提物對急性酒精性肝損傷小鼠脂肪變性分級的影響

根據變性程度分為5級,0級：肝細胞正常，肝小葉結構清晰，肝索排列整齊；1級：肝細胞少部分溶解，略見細小脂滴，病變占體積1/3；2級：部分肝組織內見細小脂滴，病變占體積1/2；3級：肝組織內見較大脂滴，部分肝細胞壞死，病變占體積3/4；4級：肝組織內見大小不等脂滴交替出現，大量肝細胞壞死。平均級數=(各級分值×本級動物總合)/本組動物總數。由表3可知，模型組脂肪變性平均級數為3.2，空白組脂肪變性平均級數為0，黃芪粗提物高、中、低劑量組平均級數分別為1.2、1.4和2.6，表明黃芪粗提物高、中、低劑量組肝細胞壞死程度和脂肪變性程度依次減輕。

表3　黃芪粗提物小鼠脂肪變性分級的影響

3討論與結論

機體攝入酒精后，90%以上在肝臟中代謝，肝損傷也是酒精的主要毒性作用之一[7]。低劑量攝入會有減少緊張、產生興奮、精力無法集中、反應延長、協調能力下降等效果，高劑量攝入會造成眩暈、嘔吐、呼吸困難甚至休克等情況[8]。本試驗中發現，小鼠攝入酒精后出現攝食量減少、被毛無光澤、共濟失調、翻正反射消失等情況。

黃芪味甘、性微溫，歸肺、脾、肝、腎經，益氣固表，補氣養血，降血壓，還能治療心臟疾病，消除腎炎患者的蛋白尿[9]。杜宇瓊等的研究表明，黃芪能夠明顯抑制大鼠肝纖維化模型中TIMP-1及MMP-1，提示黃芪具有抗肝纖維化的作用[10]。佟宇等研究也表明，黃芪可以保護脂多糖誘導的肝細胞損傷，提示黃芪具有修復肝細胞的能力[11]。本試驗以急性酒精性肝損傷為模型，通過觀察肝臟指數、肝臟脂肪變性和對ALT、AST、TC、TC因子含量的測定，研究黃芪粗提物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用。

肝臟是酒精代謝的重要場所，肝臟指數可在一定程度上反映出酒精肝損傷時肝臟增重的情況[12]，本試驗中，模型組小鼠肝臟指數高于正常組，黃芪粗提物高、中、低劑量組對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟指數起到不同程度的抑制作用。ALT主要分布于肝臟、骨骼、心肌和腎臟等組織器官中，是早期診斷肝損傷的重要指標，在急慢性肝炎以及肝硬化中，ALT均可升高[13]。在診斷肝損傷方面，AST升高的意義與ALT相似，當肝細胞受損時，此酶可釋放進入血液，使血液中酶濃度增高，同時可反映出肝細胞受損程度[14]。TC和TG對維持正常細胞結構、細胞內信號傳導以及能量代謝等都起到非常重要的作用，二者密切聯系[15]。血漿膽固醇主要來自肝臟的合成，肝組織中脂肪變性不僅血漿TC和TG含量上升，肝細胞中TC和TG含量也上升，因此，膽固醇代謝紊亂與肝脂肪變性密切相關[16]。在本試驗中，黃芪粗提物高、中劑量組對ALT、AST、TC和TG均能起到極顯著抑制作用，低劑量組均能起到顯著抑制作用，說明黃芪粗提物對急性酒精性肝損傷小鼠起到保護作用。病理組織學檢查結果顯示，模型組肝小葉結構模糊，核碎裂、溶解，顆粒變性，炎性細胞浸潤和點、片狀壞死，胞漿、胞核淡染，且有細小脂滴蓄積，黃芪粗提物高、中、低劑量組小鼠肝細胞壞死程度和脂肪變性程度依次減輕，表明黃芪粗提物對酒精誘導的小鼠急性肝損傷具有一定的保護作用，與肝臟ALT、AST、TC和TG含量變化所反映的結果基本一致。

總之，黃芪粗提物通過下調肝臟指數，抑制血清中ALT、AST以及肝臟中TC、TG的分泌，減輕肝細胞壞死和脂肪變性程度，從而對急性酒精性肝損傷小鼠起到保護作用，且黃芪粗提物高、中、低劑量組呈一定量效關系。

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收稿日期：2016-03-06基金項目：國家自然科學基金項目(31260622)；國家自然科學基金項目(31060349)

作者簡介：王瑩(1992—)，女，吉林長春人，在讀碩士，研究方向為動物醫學研究。張雪梅為通信作者， E-mail:zhangxm@ybu.edu.cn

文章編號：1004-7999(2016)02-0105-04

DOI:10.13478/j.cnki.jasyu.2016.02.003

中圖分類號：R258

文獻標識碼：A

Treatment effect of Astragalus extract on acute alcoholic liver injury in mice

WANG Ying,LIU Xinyu,WANG Shasha,GUO Ze,ZHANG Xuemei*

(DepartmentofAnimalMedicine,AgriculturalCollegeofYanbianUniversity,YanjiJilin133002，China)

Abstract：The model of acute alcoholic liver injury in mice was established by giving alcohol continuously, the protective effect of Astragalus extract on the liver of mice was investigated.The mice were divided into blank group, model group, positive group and Astragalus extract high, medium and low dose groups (8, 4, 2 g/kg). The liver index was determined, the content of ALT and AST in serum was investigated, the content of TC and AST in liver was determined.The degree of hepatic steatosis was determined using HE staining. The result showed that Astragalus extract could treat acute alcoholic liver injury by abating liver index, reducing the secretion of AST and AST in serum and the secretion of TC and TG in liver of mice, inhibiting the injury of liver and the form of hepatic steatosis. Compared with model group,Astragalus extract high dose group had very significant difference(P<0.01), medium and low dose groups had significant difference(P<0.05). It suggests that Astragalus extract has certain protective effect on acute alcoholic liver injury of mice and provides a theoretical guidance.

Key words:acute alcoholic liver injury; Astragalus extract; mice; hepatic steatosis