1日齡五指山豬胸腺的解剖及組織形態學觀察

黃媛琴，　于　晶,　崔長艷，　張　睿，　尹熙俊，　崔成都

(延邊大學 吉林省轉基因動物與胚胎工程重點實驗室，吉林 延吉 133002)

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1日齡五指山豬胸腺的解剖及組織形態學觀察

黃媛琴，于晶,崔長艷，張睿，尹熙俊，崔成都*

(延邊大學 吉林省轉基因動物與胚胎工程重點實驗室，吉林 延吉 133002)

摘要：五指山豬是我國特有的微型豬種，是人類醫學實驗動物理想模型。本研究為進一步提供五指山豬胸腺免疫功能的形態學資料，以1日齡五指山豬為試驗動物，采用常規的解剖學和組織學技術，觀察了1日齡五指山豬胸腺的解剖學及組織學特點。結果表明：1日齡五指山豬胸腺特別發達，呈Y字型，由胸葉、中葉和頸葉3個部分構成，其中，頸葉特別發達,向前延伸達頜下腺背側；胸腺指數0.856 9%，平均長度9.64 cm；光鏡下，1日齡五指山豬由表面的被膜和深層的實質構成，被摸和小葉間結締組織不發達，實質分為外周的皮質和內部的髓質，皮髓分界清晰，實質主要由淋巴細胞、上皮細胞和嗜酸性粒細胞等構成，髓質內胸腺小體主要是小型胸腺小體和少量的幼稚胸腺小體，未觀察到衰老的胸腺小體。

關鍵詞：五指山豬； 胸腺；解剖學；組織學

動物的胸腺(thymus)屬于重要的中樞免疫器官。它是T淋巴細胞分化、發育的場所，其髓質中含成熟的T細胞和巨噬細胞，皮質中富含不成熟T細胞，在胸腺微環境中,未成熟T細胞經歷復雜的選擇過程而發育為成熟的T細胞。胸腺是隨機體增齡變化最為敏感的中樞免疫器官，這種變化表現在形態、組織結構及功能等生理性退化[1]。目前，對動物、人胸腺進行形態學研究的資料表明，機體出生后隨著增齡，胸腺組織結構的生理性退化也在緩慢進行，其顯著特征以胸腺實質內淋巴細胞減少，脂肪和結締組織逐漸侵潤為特征[2]。

胸腺是實質性器官，光學顯微鏡下，胸腺表面被覆結締組織被膜,被膜伸入實質形成小葉間隔將其分成許多小葉。每小葉的周邊部淋巴細胞聚集形成染色深的皮質(cortex)，而小葉的中央部染色淡稱為髓質(medulla)。皮質主要由胸腺上皮細胞(又稱上皮性網狀細胞)和淋巴細胞構成，此外還有少量巨噬細胞，而通常胸腺內的淋巴細胞又稱胸腺細胞(thymocyte)；髓質主要是由上皮細胞和少量淋巴細胞構成，其內常可見由數層扁平上皮細胞圍成的橢圓形或不規則形胸腺小體(thymus corpuscle)，同時小體內常可見巨噬細胞和嗜酸性粒細胞[3-5]。

五指山豬(wuzhishan pig，WZSP)又稱五腳豬或“老鼠豬”，是原產于海南島中南部山區，具有早熟、耐熱、耐粗飼、抗逆性強等特點的我國特有的微型豬種，它被廣泛地應用于生物醫學的各個研究領域[6,7]。因此，五指山豬受到人們的重視，特別是各種科研機構，不僅是實驗動物的理想選擇，更是人類醫學實驗動物理想模型,是一種具有良好應用前景的實驗動物。關于五指山豬的胸腺，僅見到靳二輝等[8]關于2、4和12月齡五指山豬的組織學觀察結果，而關于初生五指山豬胸腺的形態學方面的研究未見報道。因此，該試驗以1日齡五指山豬為試驗動物，采用常規的解剖學和組織學技術，系統地觀察1日齡五指山豬胸腺的解剖學及組織學特點，以期進一步為探討五指山豬胸腺免疫功能提供形態學資料。

1材料與方法

1.1試驗動物

由延邊大學轉基因動物胚胎研究所提供約10只新出生的1日齡五指山仔豬,平均體重0.482 2 kg。

1.2主要儀器及藥品

YL3回轉式切片機、熱恒溫培養 、KD-P攤片機、KD-H烘片機 、OLMPUS多功能顯微鏡、電子天平；無水乙醇、蘇木素、伊紅、二甲苯、硫酸鋁鉀、氧化汞、冰醋酸、濃鹽酸、氨水及中性樹膠等。

1.3方法

1.3.1解剖學方法

1日齡活五指山仔豬，稱重，氯胺酮麻醉，剖開胸腔，破心放血致死，借助手術刀、剪等解剖器械解剖，暴露胸腺，觀察其形態結構特點的同時測量其重量、長度及器官指數，其后取出胸腺組織，中性福爾馬林固定24 h后，用于常規石蠟切片的制作。胸腺指數計算公式為：胸腺器官指數=(胸腺重量/體重)×100%。

1.3.2組織學方法

1) 胸腺組織石蠟組織切片制作將固定24 h的五指山豬胰腺組織取出，修成3～5 mm厚的組織塊，經水洗、梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片機切片等過程，制作成5 μm的石蠟組織切片。

2) 胸腺組織石蠟組織切片的HE染色石蠟組織切片入二甲苯脫蠟、梯度酒精入水、蘇木精染核、伊紅復染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、蓋玻片蓋片等過程染色，在光學顯微鏡下觀察并照相。

2結果與分析

2.11日齡五指山豬胸腺解剖學觀察結果

2.1.11日齡五指山豬胸腺形態特點

由圖1可知，1日齡五指山豬胸腺呈淡粉紅色或黃白色，呈“Y”字形，表面被覆被膜，腺體被結締組織分成很多小葉。1日齡五指山豬的胸腺很發達，由胸腺頸葉、胸腺中葉和胸腺胸葉構成，胸腺頸葉自甲狀腺處分左右2葉，自胸前口沿氣管、食管向前延伸至頜下腺背后側、腮腺腹側彎曲折疊成球狀；胸腺中葉較窄，位于胸前口處，連接頸葉和胸葉；胸腺胸葉位于前縱隔內的心包和大血管的上方。

圖1　1日齡五指山豬胸腺外觀形態

2.1.21日齡五指山豬胸腺器官指數及各部分長度

由表1可知，1日齡五指山豬平均體重為0.482 2 kg，胸腺平均質量為4.093 g，胸腺平均指數為0.856 9%。1日齡五指山豬胸腺的平均總長度為9.64 cm，其中,胸腺頸葉平均長度為5.81 cm,胸葉平均長度為2.52 cm,中葉平均長度為1.31 cm(表2)。

表1　1日齡五指山豬體重、胸腺重量及胸腺指數檢測結果

表2　1日齡五指山豬胸腺長度測定結果

2.21日齡五指山豬胸腺組織學觀察結果

1日齡五指山豬胸腺表面被覆薄層結締組織，胸腺實質主要由外圍淋巴細胞密集、染色較深的皮質和內部含有胸腺小體、染色較淺的髓質構成。胸腺皮質主要由大量淋巴細胞及少量上皮細胞和散在的嗜酸性粒細胞等構成，而胸腺髓質含有較多量的上皮性網狀細胞、少量淋巴細胞和嗜酸性粒細胞。1日齡五指山豬胸腺皮質和髓質界限清晰，小葉間結締組織非常薄，髓質內可觀察到大量單獨存在的、圓形的小型胸腺小體，同時可看到少量大型幼稚胸腺小體(大量卵圓形或不規則上皮細胞組成,沒有顯著的嗜酸性,無壞死或細胞碎片的胸腺小體)，而未見成熟胸腺小體(不含任何上皮細胞，只有鈣化的、壞死的細胞碎片或顯著的囊狀變性的胸腺小體)。此外，部分胸腺小體周圍分布很多嗜酸性粒細胞(圖2-A、B、C)。

圖2　1日齡五指山豬胸腺 HE染色

3討論與結論

3.11日齡五指山豬胸腺解剖學特點

胸腺作為首要的中樞免疫器官，它是T細胞分化、發育、成熟的場所，在免疫系統中發揮著重要作用[1]。解剖學上，動物的胸腺通常可分為胸葉、中葉和頸葉，但不同動物的胸腺具有不同的形態結構，如人的胸腺分2葉呈三角形[9]；雞的胸腺2葉呈長條形[2,10]；小鼠的胸腺分2葉成半圓形[11-13]；牛的呈Y形[14-16]等。而豬的胸腺通常認為呈Y形[8]，張倩[13]等認為牦牛胸腺呈黃白色，長扁條狀，分為中葉、胸葉和頸葉3部分。該試驗結果表明：1日齡五指山豬胸腺呈淡粉紅色或黃白色，外形呈“Y”字形，表面有被膜，腺體由結締組織被分成很多小葉；由胸葉、中葉和頸葉3個部分構成，而這一分葉的特點，在胎兒出生之后就已經形成；平均體重為0.482 2 kg，平均重量為4.093 g，平均長度為9.64 cm，平均胸腺指數為0.856 9%，尤其頸葉特別發達，向前一直延伸至頜下腺背側，并在其后方彎曲折疊形成球狀形態，這一特點對1日齡五指山豬胸腺結構描述有了新的定義。1日齡五指山豬胸腺發達程度與五指山豬抗逆性強是否有關，還需進一步檢測其他發育階段胸腺的形態學特點、胸腺指數等，并進行進一步探討。

3.21日齡五指山豬胸腺組織學特點

靳二輝等[8]研究認為，五指山豬被膜外有厚厚的脂肪組織，4月齡前胸腺內胸腺細胞和胸腺小體的數量均隨年齡的增長逐漸增多，而12月齡時，胸腺細胞數量有所減少，排列比較疏松,胸腺小體的數量和體積基本沒有變化，2月齡時胸腺小體周圍可見許多大小不同的空泡狀細胞和細胞碎片，此外觀察到胸腺小體的外周常有嗜酸性粒細胞等。該試驗結果與靳二輝等觀察結果基本一致，但1日齡五指山豬被膜和小葉間結締組織不發達，未觀察到脂肪組織，嗜酸性粒細胞不僅存在于髓質內，而且也可在皮質觀察到，僅僅相對于皮質，髓質內分布數量多少而異。此外，1日齡五指山豬胸腺內可以觀察到大量單獨存在的小型胸腺小體，這些胸腺小體呈圓形，而幼稚胸腺小體僅有少量，未見到成熟胸腺小體(不含任何上皮細胞，只有鈣化的、壞死的細胞碎片或顯著的囊狀變性的胸腺小體)，此結果與1日齡牦牛[14]胸腺的觀察結果相似。

參考文獻：

[1]張符光,劉佃辛.胸腺和胸腺素研究進展[J].國外醫學(免疫學分冊),1996(04):181-191.

[2]王云,彭克美.雞胸腺發育形態學研究[D].武漢：華中農業大學,2010.

[3]董常生.家畜解剖學(第三版)[M].北京：中國農業出版社,2001:149-297.

[4]沈霞芬.家畜組織學與胚胎學[M].北京：中國農業出版社,2000:201-210.

[5]李子義，欒維民，岳占碰.動物組織學與胚胎學[M].北京：科學出版社，2014:163-164.

[6]荀文娟,周漢林,王定發,等.五指山豬健康養殖技術研究與示范[J].熱帶農業科學,2013,33(02):71-73.

[7]閆雷,袁林家,棟袁許,等.五指山豬分子遺傳學特異性研究[J].湖北農業科學,2010,49(06):1471-1475.

[8]靳二輝,李逵,彭克美,等.不同月齡近交系五指山小型豬免疫器官的組織形態學[J].中國比較醫學雜志,2008,18(12):1-4.

[9]Von Gaudecker B.Functional histology of the human thymus[J].Anat Embryo, 1991,183(01):1-15.

[10][16]徐之勇,余燕,崔恒敏.高銅對雛雞中樞免疫器官的病理學影響[J].河南科技學院學報(自然科學版), 2011,39(04):54-57.

[11]劉仰斌,李啟華.小鼠胸腺形態結構增齡性變化[J].中國組織工程與臨床康復,2010,14(31):5805-5808.

[12]魏嵐,劉麗,徐玉東,等.小鼠胸腺結構的增齡性變化[J].中國老年學雜志, 2007,27(09):832-835.

[13]鄭國強，劉安軍，滕安國，等．雌雄小鼠胸腺和脾臟的免疫比較[J]．安徽農業科學，2011，39(16)：9743-9745．

[14]張倩,崔燕.不同年齡段牦牛胸腺的組織結構特征[D].蘭州：甘肅農業大學, 2013.

[15]莫重存,俞紅賢,朱安國,等．青海大通牦牛犢胸腺的形態學觀測[J].中國牛業科學，2006，32(06)：50-51.

[16]Lubis I,Ladds P,Reilly L.Age associated morphological changes in the lymphoid system of tropical cattle[J].Res Vet Sci,1982,32(3):270.

收稿日期：2016-03-13基金項目：吉林省教育廳科技基礎條件平臺建設專項(20150622005005JC)；延邊大學大學生創新創業訓練計劃項目(ydbksky2016376)

作者簡介：黃媛琴(1994—)，女，江西撫州人，在讀學士，主要從事動物醫學研究。崔成都為通信作者， E-mail:cdcui@ybu.edu.cn

文章編號：1004-7999(2016)02-0161-05

DOI:10.13478/j.cnki.jasyu.2016.02.012

中圖分類號：S828

文獻標識碼：A

An atomy and histology observation of the thymus in one-day-old Wuzhishan pigs

HUANG Yuanqin,YU Jing,CUI Changyan,ZHANG Rui,YIN Xijun,CUI Chengdu*

(YanbianUniversity，JilinProvincialKeyLaboratoryofTransgenicAnimalandEmbryoEngineering,YanjiJilin133000，China)

Abstract：Wuzhishan pig is a mini pig which is unique to China, and it is also an ideal animal model for human medical experiments.In order to further provide the morphological data of thymus immune function in Wuzhishan pig, Wuzhishan pig was taken as a experimental animal, and the anatomical and histological features of one-day-old Wuzhishan pig's thymus were observed by the conventional anatomy and histology technology.The result shows that the Wuzhishan pig's thymus are Y-shaped and well-developed, which includes three parts: the chest lobe, the middle lobe, and the neck lobe. The neck lobe is most developed that extending forward of the back side of the submandibular gland. Thymus index is 0.856 9%, and the average length is 9.64 cm. It is consist of the exterior films and the interior essences under light microscope. The connective tissue of films and interlobulars is not well-developed. The interior essences are devided into the outer cortex and internal medulla. The medulla has a clear boundary and the cortex is mainly composed of large number of cortical lymphocytes and a small amount of epithelial cells and eosinophils cells. However, the thymic corpuscle in medulla is mainly made by a large number of small size thymus corpuscle and a small amount of navie thymic corpuscle，there is no aging thymus corpuscle.

Key words:Wuzhishan pig；thymus；anatomy；morphology