外周血CD64、CD11b/ CD18指數(shù)對急性胰腺炎并感染的早期診斷價(jià)值

方歡歡，熊姿，王文娟，胡志堅(jiān)，毛衛(wèi)未，冷耀明

(九江學(xué)院附屬醫(yī)院，江西　九江332000)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

外周血CD64、CD11b/ CD18指數(shù)對急性胰腺炎并感染的早期診斷價(jià)值

方歡歡，熊姿，王文娟，胡志堅(jiān)，毛衛(wèi)未，冷耀明

(九江學(xué)院附屬醫(yī)院，江西九江332000)

摘要：目的探討外周血CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平對急性胰腺炎并細(xì)菌感染的早期診斷價(jià)值。方法選取急性胰腺炎患者158例，根據(jù)病情程度分為重癥胰腺炎組（SAP組）60例，輕癥胰腺炎組（MAP組）98例，并將是否合并細(xì)菌感染分為敗血癥組45例、局部感染組63例和單純急性胰腺炎組60例；另選擇健康體檢者30例為對照組。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD64、CD11b/CD18指數(shù)，采用羅氏電化學(xué)發(fā)光法測定血清PCT水平，并比較各指標(biāo)對急性胰腺炎合并感染的早期診斷的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度，評價(jià)它們對該病的診斷價(jià)值。結(jié)果SAP組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT均顯著高于MAP組和對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）；敗血癥組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT表達(dá)水平顯著高于局部感染組和單純AP組（P均<0.01）。Pearson相關(guān)分析顯示外周血CD64指數(shù)與CD11/CD18及血清PCT水平成正相關(guān)（r=0.762，0.68；P<0. 01）。以CD64指數(shù)>2.25，CD11b/CD18>33，PCT>1.85為陽性臨界值標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，其診斷細(xì)菌感染的敏感性分別為98%、94%和78%，特異性為95%、93%和76%。結(jié)論外周血CD64、CD11b/CD18指數(shù)升高對急性胰腺炎合并細(xì)菌感染具有早期診斷價(jià)值，其診斷效能優(yōu)于PCT，并可作為病情評估和指導(dǎo)臨床合理使用抗生素的生物學(xué)新指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：急性胰腺炎；細(xì)菌感染；CD64；CD11b/CD18；流式細(xì)胞術(shù)

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是消化系統(tǒng)的常見急癥之一，包括輕癥急性胰腺炎（MAP）和重癥急性胰腺炎（SAP），其中SAP繼發(fā)性感染患者易出現(xiàn)感染性休克以及器官功能障礙等癥狀，病死率高達(dá)36%~50%。因此，細(xì)菌感染是影響AP病程及預(yù)后的重要因素，其發(fā)生率與胰腺的壞死程度呈正比[1]。CD64指數(shù)即中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞表面CD64表達(dá)之比值；是近年來發(fā)現(xiàn)的預(yù)測細(xì)菌性感染的一種簡單而有效的檢測參數(shù)[2-4]。CDllb/ CD18作為中性粒細(xì)胞表面含量最多的白細(xì)胞整合素黏附分子，直接和間接介導(dǎo)中性粒細(xì)胞的吞噬和殺菌作用，文獻(xiàn)已證實(shí)CD1lb/CD18表達(dá)增加可以作為PMN活化時(shí)的特征性標(biāo)志物[5]。PCT是一種無激素活性的降鈣素前肽物質(zhì)，可作為細(xì)菌感染和敗血癥的早期診斷指標(biāo)[6]。本研究使用流式細(xì)胞術(shù)對急性胰腺炎患者外周血CD64、CD11b/ CD18指數(shù)進(jìn)行檢測，并與血清PCT進(jìn)行比較分析，以期為急性胰腺炎并細(xì)菌感染患者提供準(zhǔn)確、快速的早期診斷及病情評估的新指標(biāo)。

1　對象與方法

1.1研究對象選取本院2010年8月至2014年12月收治的158例急性胰腺炎患者作為研究對象，所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)胰腺疾病學(xué)組關(guān)于急性胰腺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。依據(jù)急性胰腺炎患者的病情程度分為重癥胰腺炎組（SAP組）60例，其中男36例，女24例，平均年齡（51.1± 18.1）歲；輕癥胰腺炎組（MAP組）98例，其中男50例，女48例，平均年齡（48.9±17.4）歲。又根據(jù)是否合并細(xì)菌感染分為敗血癥組36例，其中男性20例，女性16例，平均年齡（52.4±19.5）歲；局部感染組45例，其中男性28例，女性17例，平均年齡（45.4±16.7）歲；單純AP組77例，其中男45例，女32例；平均年齡(49.1±13.1)歲。細(xì)菌感染診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)血培養(yǎng)操作指南留取其雙臂雙瓶血培養(yǎng)或在CT、B超引導(dǎo)下細(xì)針穿刺（FNA）抽吸物經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)檢查為病原菌陽性者。另設(shè)對照組30例，其中男16例，女14例，平均年齡（47.5±16.8）歲。所有入組者均排除患有腫瘤、消化系統(tǒng)以外其他感染性疾病、血液系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、呼吸系統(tǒng)疾病和風(fēng)濕免疫性疾病的患者。兩組間性別構(gòu)成、平均年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（性別P=0.224，年齡P= 0.318）。本項(xiàng)研究已經(jīng)九江學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并同意執(zhí)行。入選者相關(guān)的書面知情同意書已經(jīng)獲得患者（或家屬）簽字授權(quán)并同意執(zhí)行。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集所有入選者均在入院后立即采集外周靜脈血2.0ml，置乙二胺四乙酸二鉀（EDTAK2）抗凝管中混勻，采集后2h內(nèi)于流式細(xì)胞儀測定CD64、CD11b/CD18指數(shù)，同時(shí)采血檢測血清PCT水平。

1.2.2CD64和CD11b/CD18檢測運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對外周血中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞表面進(jìn)行CD64、CD11b/CD18標(biāo)記，以CD45 APC/SSC設(shè)門，圈出目標(biāo)細(xì)胞群，分析各群細(xì)胞表面CD64、CD11b/CD18表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度（MFI）。所用流式細(xì)胞儀FACSCantoⅡ及實(shí)驗(yàn)試劑均購于美國Becton-Dickinson公司，實(shí)驗(yàn)試劑包括BD FACSTM 7-Color setup Beads（七色校準(zhǔn)微球）、CD45 APC（別藻青蛋白）、CD64 PE（藻紅蛋白)、CD11b PerCP（多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質(zhì)復(fù)合物）/CD18 FITC（異硫氰酸熒光素）應(yīng)用FACSDive Software軟件獲取目標(biāo)細(xì)胞群細(xì)胞10000個(gè)并進(jìn)行分析，分別計(jì)算中性粒細(xì)胞上CD64和CD11b/CD18的平均熒光強(qiáng)度與淋巴細(xì)胞上CD64和CD11b/CD18的平均熒光強(qiáng)度之比，即CD64、CD11b/CD18指數(shù)。

1.2.3血清PCT測定采用德國羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫測定法（ECLIA）測定血清PCT，嚴(yán)格按說明書操作。血清中PCT含量正常參考范圍≤0.5ng/L。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組之間差異采用t檢驗(yàn)處理，多組間比較采用F檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)分析應(yīng)用Pearson相關(guān)系數(shù)法，診斷效能的評價(jià)采用受試者操作特征曲線（ROC）。

2　結(jié)果

2.1不同程度AP患者外周血CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT比較MAP組外周血CD64、CD11b/ CD18指數(shù)及PCT水平顯著高于對照組，SAP組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平也顯著高于MAP組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均< 0.01），見表1。

表1　SAP組、MAP組和對照組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平比較（±s）

表1　SAP組、MAP組和對照組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平比較（±s）

注：與對照組比較，aP<0.01；與MAP組比較，bP<0.01。

組別SAP組MAP組對照組例數(shù)60 98 30 CD64　CD11b/CD18　PCT（μg/L）3.36±1.05ab1.85±0.57a1.03±0.32 55.26±6.07ab27.26±5.55a12.26±2.35 4.35±1.02ab1.59±0.13a0.34±0.08

2.2敗血癥組、局部感染組和單純AP組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平變化局部感染組外周血CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平顯著高于單純AP組，敗血癥組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平也顯著高于局部感染組（P均<0.01），見表2。

表2　敗血癥組、局部感染組和單純AP組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平比較（±s）

表2　敗血癥組、局部感染組和單純AP組CD64、CD11b/CD18指數(shù)及PCT水平比較（±s）

注：與單純AP組比較，aP<0.01；與局部感染組比較，bP<0.01。

組別敗血癥組（SEP）局部感染組（LOC）單純AP組（SIM）例數(shù)36 45 77 CD64　CD11b/CD18 PCT（μg/L）4.17±1.35ab3.15±0.78a2.26±0.56 71.26±9.14ab43.26±6.47a32.45±3.25 5.35±1.82ab2.60±0.52a1.83±0.32

2.4各項(xiàng)指標(biāo)對急性胰腺炎合并細(xì)菌感染的診斷性能比較以細(xì)菌培養(yǎng)陽性為金標(biāo)準(zhǔn)，ROC模型分析顯示，外周血CD64、CD11b/CD18指數(shù)的曲線下面積（AUC）、最佳診斷臨界值（cutoff值）、靈敏度（Sen）、特異度（Spe）和準(zhǔn)確度（Acc）均較PCT具有更大的價(jià)值，見表3。

表3　各項(xiàng)指標(biāo)對AP患者合并細(xì)菌感染的診斷性能

3　討論

急性胰腺炎是一種常見的急腹癥，發(fā)病率呈逐年增高趨勢，其中有25%發(fā)展為重癥急性胰腺炎（SAP），死亡率高達(dá)30%～50%，死亡的主要原因是感染[8，9]。細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果及藥物敏感性試驗(yàn)是診斷細(xì)菌感染和指導(dǎo)抗生素治療的金標(biāo)準(zhǔn)，但其陽性率低，病原菌分離時(shí)間較長，不能及時(shí)地提供早期診斷依據(jù)。因此，尋找一種快速準(zhǔn)確判斷細(xì)菌感染的方法顯得尤為重要。近年來應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中性粒細(xì)胞表面CD64分子的表達(dá)在診斷細(xì)菌感染中的作用受到廣泛關(guān)注。CD64是IgG的Fc受體之一，即FcyRI，其分子質(zhì)量為kDa，為跨膜糖蛋白，是高親和力的IgG受體，其表達(dá)受細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，起到連接體液免疫和細(xì)胞免疫的橋梁作用。CD64主要分布在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹突細(xì)胞表面，在中性粒細(xì)胞表達(dá)水平很低，但細(xì)菌感染時(shí)外周血中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)量顯著增加，并對中性粒細(xì)胞吞噬和殺菌起重要作用。Pauksens等[10]研究發(fā)現(xiàn)，CD64在細(xì)菌性感染中具有較高的特異性，有助于早期診斷細(xì)菌感染和判斷感染的程度。邱蓮女等[11]對不同病情程度急性胰腺炎患者外周血CD64檢測分析發(fā)現(xiàn)，SAP組、MAP組CD64指數(shù)均明顯高于對照組（P<0.01），且AP患者CD64指數(shù)與炎性指標(biāo)Nec%、CRP呈明顯正相關(guān)，提示AP患者處于炎癥狀態(tài)。但目前國人關(guān)于AP合并細(xì)菌感染時(shí)外周血CD64指數(shù)變化方面的研究鮮見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，MAP組外周血CD64指數(shù)顯著高于對照組，SAP組CD64指數(shù)也顯著高于MAP組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明AP患者存在明顯的炎性反應(yīng)，外周血CD64指數(shù)的升高與病情進(jìn)展有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)敗血癥組、局部感染組和單純AP組CD64指數(shù)依次降低，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示CD64指數(shù)與感染程度密切相關(guān)。當(dāng)以CD64指數(shù)>2.25為陽性臨界值標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，其診斷細(xì)菌感染的靈敏度為98%、特異度為95%、準(zhǔn)確度為96%。雖然目前CD64指數(shù)在診斷細(xì)菌感染方面仍有爭議，但是絕大多數(shù)研究表明[12，13]，當(dāng)機(jī)體感染或內(nèi)毒素人侵時(shí)中性粒細(xì)胞CD64在刺激后4～6h即可升高，在敗血癥發(fā)生后0～24h可明顯升高。本研究通過細(xì)菌培養(yǎng)證實(shí)，AP患者在并發(fā)細(xì)菌感染24h內(nèi)外周血CD64指數(shù)即可顯著升高，其有望成為早期診斷敗血癥新的生物標(biāo)志物。

CD1lb/CD18是黏附分子（NK細(xì)胞），正常情況下，CD1lb/CD18除少量分布于細(xì)胞膜的表面外，大部分儲(chǔ)存在細(xì)胞內(nèi)的儲(chǔ)存池。近年來的細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究表明，細(xì)胞膜上的黏附分子是介導(dǎo)細(xì)胞間黏附的主要因素，并參與炎癥過程的發(fā)生和發(fā)展。Sun等[14]的研究發(fā)現(xiàn)，SAP時(shí)白細(xì)胞黏附，包括中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附是由于白細(xì)胞表面的CD11/CD18與內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附分子相互作用導(dǎo)致的。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CD1lb/CD18是革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁成分LPS的高親和力受體，細(xì)菌菌體和內(nèi)毒素均能直接刺激CD11b/CD18表達(dá)增加[15]。本研究結(jié)果顯示，SAP組CD11b/CD18指數(shù)顯著高于MAP組和對照組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明AP患者外周血CD11b/CD18指數(shù)升高參與急性胰腺炎的病理機(jī)制，其中性粒細(xì)胞（PMN）膜上CD11b/ CD18表達(dá)水平的變化可能與病情進(jìn)展密切相關(guān)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)局部感染組外周血CD11b/CD18指數(shù)顯著高于和單純AP組，敗血癥組CD11b/CD18指數(shù)也顯著高于局部感染組，提示AP患者并發(fā)細(xì)菌感染所產(chǎn)生的內(nèi)毒素可迅速上調(diào)CD1lb/CD18，使內(nèi)皮細(xì)胞、白細(xì)胞進(jìn)入活化狀態(tài)。本研究中CD11b/ CD18指數(shù)對診斷AP患者并發(fā)細(xì)菌感染的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為93%和94%。因此，檢測外周血CD1lb/CD18指數(shù)，對判斷AP患者病情及是否并發(fā)細(xì)菌感染具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

降鈣素原（PCT）是降鈣素的前體物質(zhì)，20世紀(jì)90年代首先在膿毒血癥病人血清中檢測到的蛋白，分子量為13kDa。血漿中PCT濃度低于0.1~ 0.5μg/L為正常，0.5~2μg/L為輕度升高，10μg/L以上為明顯升高。研究發(fā)現(xiàn)，膿毒癥或全身細(xì)菌感染患者在膿毒癥起始時(shí)或感染早期血漿PCT迅速升高，以后一直保持高水平，血漿PCT水平與感染的嚴(yán)重程度有關(guān)[16]。本研究中AP合并敗血癥組入院檢查PCT水平明顯高于局部感染組和單純AP組，SAP組又高于MAP組及對照組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示AP患者早期PCT水平的高低與感染、AP嚴(yán)重程度一致。但其血漿PCT水平對診斷AP患者并發(fā)細(xì)菌感染的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度僅為78%和76和77%，僅具中等診斷能力[17]，其診斷效能次于CD64、CD1lb/CD18指數(shù)。

綜上所述，外周血CD64、CD11b/CD18指數(shù)升高對急性胰腺炎合并細(xì)菌感染具有早期診斷價(jià)值，其診斷效能優(yōu)于PCT，故在AP患者早期運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD64、CD11b/CD18指數(shù)可作為AP患者病情評估、判斷是否合并細(xì)菌感染和指導(dǎo)臨床合理使用抗生素的生物學(xué)新指標(biāo)。

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中圖分類號(hào)：R657.5+1，R576，R446.62

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674-1129(2016)03-0304-04

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.014

作者簡介：方歡歡，女，1987年3月出生，本科，中級(jí)職稱，研究方向：臨床免疫學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)。郵箱：578297860@qq.com。

(收稿日期2015-11-11；修回日期2016-04-29)

value of CD64 and CD11b / CD18 index in early diagnosis of acute pancreatitis with bacterial infection

FANG Huanhuan，XIONG Zi，WANG Wenjuan，HU Zhijian，MAO Weiwei，LENG Yaoming. Department of Clinical Laboratory，Affiliated Hospital of Jiujiang University，Jiujiang Jiangxi，332000，China.

Abstract：Objective To evaluate the value of CD64 and CD11b/CD18 Index in the early diagnosis of acute pancreatitis with bacterial infection. Methods A total of 158 acute pancreatitis patients were divided into severe acute pancreatitis group (SAP，60 cases) and mild pancreatitis group (MAP，98 cases) according to the degree of the disease，or divided into sepsis group (SEP，45 cases)，local infection group(LOC，63 cases) and simple acute pancreatitis group(SIM，60 cases) according to whether were simultaneously infected by bacteria；30 healthy individuals were served as normal control. Levels of CD64，CD11b/CD18 were detected by flow cytometry，and those of serum PCT were tested by Roche electrochemiluminescence immunoassay. The sensitivity，specificity and accuracy of each index for early diagnosis of acute pancreatitis with bacterial infection were evaluated and compared with each other. Results levels of CD64，CD11b/CD18 and PCT in SAP group were significantly higher than those in MAP group and control group (P<0.01)；levels of CD64，CD11b/CD18 and PCT in sepsis group were significantly higher than those in local infection group and simple AP group(P<0.01). Pearson correlation analysis showed that the peripheral CD64，CD11/CD18 were positively correlated with serum PCT levels (r=0.762，0.762；P<0.01). Taking CD64 index >2.25，the CD11b/CD18 index >33，PCT>1.85 as positive cutoff value，sensitivities of diagnosis of bacterial infection were 98%，94% and 78%，specificities of that were 95%，93% and 76%. Conclusion CD64 index，CD11b/CD18 index in peripheral blood were more efficient than PCT in early diagnosis of acute pancreatitis with bacterial infection，and could be used as new candidate biomarkers to guide clinical rational use of antibiotics.

Key words:Acute pancreatitis；Bacterial infections；CD64；CD11b/CD18；Flow cytometry，