陰道病學婦女宮頸HPV感染及基因型分布特征

林雄輝，周長邵，陳麗麗

(解放軍第九五醫院 檢驗科，福建 莆田 351100)

陰道病學婦女宮頸HPV感染及基因型分布特征

林雄輝Δ，周長邵，陳麗麗

(解放軍第九五醫院 檢驗科，福建 莆田 351100)

目的 探討陰道病學婦女宮頸人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染及基因型分布特征。方法 采用PCR-反向點雜交法對解放軍第九五醫院816例宮頸病變婦女宮頸脫落細胞進行HPV檢測，并進行23種HPV基因分型鑒別。結果 本組816例接受HPV分型檢測中，HPV陽性532例(65.20%)，其中371例(69.74%)高危型HPV(HR-HPV)感染，161例(30.26%)低危型HPV(LR-HPV)感染。45歲以下人群HPV感染率較高；宮頸癌患者HPV感染率為97.10%高于CINⅡ-Ⅲ患者(80.54%)、CINⅠ患者(41.55%)、宮頸炎患者(17.20%)，差異具有統計學意義(P<0.05)；HPV感染亞型排列前5位分別為HPV16、58、18、11、56型。單一感染幾率為79.70%，重復感染率為20.30%；單一感染中以HR-HPV感染率為主，多重感染以雙重感染為主。結論 44歲以下女性HPV感染的高危人群，HPV感染以16、58、18、11、56為主，宮頸癌及癌前病變患者HPV感染率較高，重視HPV感染篩查對防治宮頸癌有積極意義。

人乳頭瘤病毒；宮頸病變；基因分型

人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一種DNA病毒，目前已鑒定出200多種HPV感染亞型，其中50多種與人類生殖道感染有關[1]。不同類型的HPV致病類型也存在差異，其中LR-HPV感染(HPV6、11、40等)可致宮頸良性病變，HR-HPV感染(HPV16、18、31等)會增加宮頸癌和癌前病變發生風險[2]。研究報道，HR-HPV持續感染是宮頸癌及癌前病變發生的重要影響因素轉移[3]。因此，重視對有性生活女性的HPV感染篩查尤為重要，便于對高危人群進行早期預防、早期治療。本研究通過收集宮頸脫落細胞并進行23種HPV感染亞型檢測，了解宮頸病變婦女HPV感染情況及亞型分布，對宮頸疾病和宮頸癌防治有重要指導意義，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例選取2014年12月～2015年8月解放軍第九五醫院門診及住院的816例宮頸疾病婦女作為研究對象，均有性生活，且自愿接受HPV檢測。年齡19～73歲，平均年齡(43.29±8.58)歲。宮頸病變類型：343例宮頸炎，219例CINⅠ期，185例CINⅡ-Ⅲ期，69例宮頸癌。由婦科醫師講解本次調查研究的目的、篩查流程等，告知研究期間可隨時退出該研究，本研究由醫院倫理委員會批準，研究對象均自愿本研究病簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 宮頸細胞采集：婦科醫生于研究對象非月經期采集宮頸脫落細胞，采集前禁性生活、盆浴、陰道檢查。充分暴露宮頸，取無菌棉球拭凈陰道及宮頸口分泌物，將專用取樣刷置入宮頸內口，毛刷基底面與宮頸外口齊平，順指針旋轉3～5圈收集宮頸口及頸管脫落上皮細胞，將刷頭放入洗脫管中，并旋轉管蓋，做好標記。

1.2.2 HPV分型檢測：主要儀器包括5415R小型高速離心機(德國Eppendorf)，9600型PCR儀(HEMA),FYY-3型分子雜交儀。取保存液1 mL放入試管中，13 000 r/min離心10 min，舍棄上清液保留沉淀物，如細胞沉淀為贅生物或疣體組織物，可用加樣槍頭將其刺破、搗碎。沉淀物中加入DNA提取液5 μL，充分混勻，100 ℃水浴環境下裂解10 min，13 000 r/min離心10 min，取上清液作PCR反應。利用HPV通用引物(由亞能生物技術公司合成)擴增，采用PCR-反向點雜交法檢測HPV亞型。本次檢測HPV基因亞型包括：17種高危型HPV(HR-HPV)感染：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83；6種低危型HPV(LR-HPV)感染：6、11、42、43、44、81。

1.3 統計學方法 采用統計學軟件SPSS 19.0中處理數據，計數資料采用(%)表示，比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV感染情況 本組816例接受HPV分型檢測中，HPV陽性532例，陽性率65.20%；其中371例高危型HPV(HR-HPV)感染，感染率為69.74%，161例低危型HPV(LR-HPV)感染，感染率為30.26%，HR-HPV感染率高于LR-HPV感染率。44歲以下人群HPV感染率較高。

2.2 不同年齡HPV感染分布 35≤年齡<40出現HPV感染率最高，占86.60%，其次為40≤年齡<45，占71.96%，HPV感染年齡分布差異有顯著性(P<0.05)。見表1。

表1 不同年齡HPV感染分布Tab.1 Distribution of HPV infection in different ages

2.3 不同宮頸疾病HPV感染情況 宮頸癌患者HPV感染率明顯最高，占97.10%，其次為CINⅡ-Ⅲ患者，占80.54%，宮頸炎最低，為17.20%，差異顯著，具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同宮頸疾病HPV感染情況Tab.2 HPV infection in different cervical diseases

2.4 532例HPV感染亞型分布 本組研究中，HPV感染亞型排列前五位分別為HPV16(12.22%)、HPV58(11.65%)、HPV18(11.09%)、HPV11(10.34%)、HPV56(7.89%)。見表3。

表3 532例HPV感染亞型分布Tab.3 Distribution of 532 HPV subtypes

2.5 HPV感染亞型組合分布 單一感染幾率為79.70%，重復感染率20.30%；單一感染中，HR-HPV感染率為61.84%，LR-HPV感染率為17.86%；多重感染中，雙重感染率為15.23%，三重感染3.95%、四重感染0.75%及其他0.38%。見表4。

表4 HPV感染亞型組合分布Tab.4 HPV infection subtype combination distribution

3 討論

宮頸癌是常見的女性惡性腫瘤之一，發病率僅次于乳腺癌。近年來，隨著宮頸癌篩查的工作普遍開展，宮頸癌早期診斷準確人數明顯增加，有利于臨床早期干預治療，降低疾病致死率。然而，對各國宮頸癌發病資料進行分析，發現發展中國家宮頸癌發病率仍高于發達國家。目前，宮頸癌的發生機制尚不明確。研究認為，持續HR-HPV是宮頸癌和癌前病變的重要原因之一[3]。賈政軍等[4]研究發現，幾乎所有的宮頸癌患者均伴隨HPV感染。

HPV感染屬于一種傳播性疾病，70%～80%左右有性生活的婦女會伴隨HPV感染[5]。本組研究中，44歲以下人群出現HPV感染的幾率相對較高，與張艷瓊等[6]報道研究結果相符，與該年齡段女性性生活活躍有關。隨著年齡的增長，女性HPV感染率有所下降，但該年齡段卵巢功能下降，機體免疫力下降，對HPV的清除能力會隨之減弱，可能增加宮頸癌及癌前病變的發生風險。因此，臨床積極開展宮頸癌相關知識宣傳，定期進行HPV感染篩查，尤其是44歲以下人群，預防宮頸病變。

目前，已鑒定出的200多種HPV亞型中，約20種由生殖道分泌的HPV與腫瘤發生有關。根據其致病能力可分為HR-HPV、LR-HPV，其中HR-HPV持續感染會增加宮頸癌及癌前病變發生風險，LR-HPV感染可引起生殖道良性病變。本組研究中，宮頸癌患者HPV感染率明顯最高，占97.10%，其次為CINⅡ-Ⅲ患者，占80.54%。因此，臨床重視對HPV的篩查對預防宮頸癌及癌前病變中具有積極意義。本組研究中，HPV感染占前5位的分別為HPV16、58、18、11、56型，與Clifford等[7]報道HPV16、HPV18感染較為常見，其次為45、31、33的研究結果部分一致，可能與地區、研究對象的年齡有關。趙蘇萍等[8]分析黔南州水族宮頸疾病婦女人HPV亞型分布，發現最為常見的類型為HPV16，其次為HPV33、58、52、38型。季月霞等[9]報道中，HR-HPV感染以HPV18作為常見，其次為HPV16；LR-HPV感染以HPV6、11型較為常見。總結既往文獻，發現HPV16、HPV18是HR-HPV感染較為常見的類型[10]。目前，臨床針對HPV16型和18型的二價疫苗和針對HPV16、18、11、6型的四價疫苗已經上市，在預防宮頸癌病變有積極作用[11]，但還用加大對HPV33、58、52型等疫苗的研究。

本組研究中，單一感染幾率為79.70%，重復感染率為20.30%，單一感染常見；單一感染中以HR-HPV較為常見，多重感染中以雙重感染感染較為常見，與智艷芳等[12]研究結果一致。目前關于多重HPV感染是否會增加宮頸病變的風險尚存在爭議，Stenmark等[3]認為，對多重HPV感染不會增加宮頸癌發生風險；但嚴粉琴等[13]研究報道，多種HPV感染會增加病毒致病程度。因此，臨床需擴大研究對象，了解多重HPV感染對宮頸癌及癌前病變發生風險的影響，為臨床防治宮頸癌提供客觀資料。

綜上所述，宮頸癌屬于一種可預防性疾病，HR-HPV持續感染是宮頸癌發生的高危影響因素。HPV感染亞型分布具有地域性的特點，各地區應對女性HPV感染狀況和亞型分布進行分析，為臨床防治宮頸癌及癌前病變提供流行病學資料，降低宮頸癌發生率。

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(編校：席大力 王儼儼)

Cervical HPV infection and genotype distribution characteristics in women with vaginal disease

LIN Xiong-huiΔ, ZHOU Chang-shao, CHEN Li-li

(Department of Inspection, PLA No.95 Hospital, Putian 351100, China)

ObjectiveTo study cervical human papillomavirus (HPV) infection and genotype distribution characteristics in patients with vaginal disease.MethodsThe PCR dot blot was used to carry out HPV detection of cervical exfoliated cells in 816 women with cervical lesions in the hospital, and 23 kinds of HPV genotypes were identified.ResultsAmong the 816 cases receiving HPV type detection, HPV of 532 cases (65.20%) was positive, including 371 cases (69.74%) with low-risk HPV (HR-HPV) infection, 161 cases (30.26%) with low-risk HPV infection (LR-HPV) (P< 0.05). The HPV infection rate below 45 years old was relatively higher. The HPV infection rate in patients with cervical cancer (97.10%) was higher than that in patients with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) II - III (80.54%), patients with CIN Ⅰ(41.55%) and patients with cervicitis (17.20%) (P< 0.05). The top five types of HPV infection were HPV16, 58, 18, 11 and 56 type, respectively. The single infection rate (79.70%) was higher than multiple infection rate (20.30%) (P< 0.05); HR-HPV infection was the main infection in single infection, and double infection was the main infection in multiple infection.ConclusionBelow 45 years old women are the high-risk groups of HPV infection. 16, 58, 18, 11 and 56 are the main types of HPV infection. The infection rates of patients with cervical cancer and precancerous lesions are relatively higher. Paying attention to the screening of HPV infection has positive significance in the prevention and treatment of cervical cancer.

human papillomavirus; cervical lesions; genotyping

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.11.055

林雄輝，通信作者，男，本科，檢驗師，研究方向：醫學檢驗，E-mail：605990696@qq.com。

R737.33

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