缺氧誘導(dǎo)因子HIF-2α在前列腺癌中的表達(dá)及臨床意義

馬可為 云志中 喬建坤

缺氧誘導(dǎo)因子HIF-2α在前列腺癌中的表達(dá)及臨床意義

馬可為 云志中 喬建坤

目的 探討缺氧誘導(dǎo)因子HIF-2α在前列腺癌中的表達(dá)及臨床意義。方法 采用免疫組化法檢測(cè)HIF-2α在前列腺癌組織中的表達(dá)，并評(píng)價(jià)HIF-2α表達(dá)與臨床病理及臨床分期特征的關(guān)系以及HIF-2α與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的相關(guān)性。結(jié)果 HIF-2α在前列腺癌各病理分級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為高分化57.1%，中分化63.2%，低分化91.7%，高、中、低分化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；臨床分析方面，A＋B期60.7%，C＋D期82.4%，二者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。VEGF在前列腺癌各病理分級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為高分化42.9%，中分化68.4%，低分化75.0%，高、中、低分化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；臨床分析方面，A＋B期53.6%，C＋D期76.5%，二者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。HIF-2α與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)，r＝0.258，P＜0.05。結(jié)論 HIF-2α在前列腺腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，對(duì)于前列腺癌病情的診斷和治療具有重要臨床意義。

缺氧誘導(dǎo)因子；前列腺癌；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

前列腺癌是威脅男性健康的常見(jiàn)腫瘤之一，發(fā)病隱匿，在我國(guó)，前列腺癌的發(fā)病率低于西方國(guó)家，但是病死率卻高于西方國(guó)家，且發(fā)病率有上升趨勢(shì)，前列腺癌在不同種族間存在差異，同時(shí)受到不同文化、社會(huì)、心理因素的影響[1]。研究表明[2]，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是重要的淋巴管生成因子之一，其在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)，與腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。HIF-2α(Hypoxia-inducible factor-2α)是一種低氧轉(zhuǎn)錄反應(yīng)調(diào)節(jié)子，主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，與胚胎的形成與發(fā)育密切相關(guān)。研究顯示[3-4]，HIF-2α在乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌等多種類型中均表達(dá)上調(diào)，可能是肝瘤干細(xì)胞的一種標(biāo)志。為探討HIF-2α在前列腺癌中的表達(dá)及與VEGF表達(dá)的相關(guān)性，我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)前列腺癌腫瘤組織的HIF-2α進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2012—2015年手術(shù)切除的前列腺組織標(biāo)本45例，均經(jīng)術(shù)后病理確認(rèn)，年齡55～81歲，平均(71.5±3.8)歲，根據(jù)Gleason分級(jí)和臨床醫(yī)生分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為3級(jí)，高分化(2～5分)14例，中分化(6～8分)19例，低分化(9～10分)12例，Whtmore-Jewett臨床分期：A＋B期28例，C＋D期17例。

1.2 方法 采用免疫化S-P法，一抗為鼠抗人HIF-2α單克隆抗體(Abcam，美國(guó))，稀釋度：1∶1 000；二抗生物素標(biāo)記兔抗鼠IgG及S-P試劑盒(福州邁新公司)。石蠟包埋后，5 μm切片，常規(guī)免疫組織化學(xué)染色，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，抗原熱修復(fù)2 min，3%過(guò)氧化氫孵育，依次滴加一抗，4℃孵育過(guò)夜，加二抗及S-P復(fù)合物，室溫孵育，1 h，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，逐及脫水，透明封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.3 陽(yáng)性結(jié)果判定 按陽(yáng)性細(xì)胞百分比分4級(jí)：＜25%為1級(jí)；25%～49%為2級(jí)；50%～74%為3級(jí)；≥75%為4級(jí)。按染色強(qiáng)度分4級(jí)：沒(méi)有染色為0級(jí)；淺棕色為1級(jí)；棕色為2級(jí)；暗褐色為3級(jí)。評(píng)分公式：免疫組化評(píng)分＝百分比評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分。陰性：≤3分，陽(yáng)性：＞3分。

VEGF：細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有棕黃色顆粒記為染色陽(yáng)性細(xì)胞。陽(yáng)性：切片內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤50%。陰性：切片內(nèi)無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)分析描述HIF-2α與VEGF之間的關(guān)聯(lián)程度，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HIF-2α表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系 HIF-2α在前列腺癌各病理分級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為高分化57.1%，中分化63.2%，低分化91.7%，高、中、低分化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；臨床分析方面，A＋B期60.7%，C＋D期82.4%，二者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05(表1)。

表1 HIF-2α表達(dá)與前列腺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.2 VEGF表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 VEGF在前列腺癌各病理分級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為高分化42.9%，中分化68.4%，低分化75.0%，高、中、低分化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；臨床分析方面，A＋B期53.6%，C＋D期76.5%，二者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05(表2)。

表2 45例前列腺癌標(biāo)本VEGF表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 HIF-2α與VEGF表達(dá)的相關(guān)性分析 HIF-2α與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)，r＝0.258，P＜0.05(表3)。

表3 HIF-2α與VEGF表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

前列腺癌是泌尿男性生殖系腫瘤中生物學(xué)行為最復(fù)雜的惡性腫瘤，其發(fā)病隱匿，惡性程度低的部分前列腺癌患者可以長(zhǎng)期帶瘤生存，但部分具有惡性表型的患者卻進(jìn)展很快，多發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或激素抵抗甚至廣泛耐藥，是引起患者死亡的主要原因[5-6]。因此，揭示前列腺癌惡性表型獲得的機(jī)制，并尋找相應(yīng)的靶向性治療措施，是當(dāng)前泌尿外科迫切需要解決的重要問(wèn)題。前列腺癌作為一種實(shí)體腫瘤，缺氧的微環(huán)境在其生成及發(fā)展過(guò)程中起著非常重要的作用。在腫瘤對(duì)缺氧的適應(yīng)反應(yīng)中，HIFs是處于上游的調(diào)節(jié)因子，發(fā)揮關(guān)鍵作用。在缺氧環(huán)境下，HIFs通過(guò)影響其靶基因的表達(dá)從而使細(xì)胞的蛋白組成成分發(fā)生變化，生理活動(dòng)產(chǎn)生改變，對(duì)于腫瘤的代謝、凋亡增殖，血管生成及侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性具有明顯的影響，在這個(gè)過(guò)程中腫瘤可轉(zhuǎn)變?yōu)楦哂星忠u性的表型。

HIF-1α和HIF-2α是HIFs功能亞單位的兩種亞型，但二者在體內(nèi)的分布及生物學(xué)作用方面存在相當(dāng)大的差異。HIF-1α作為最早發(fā)現(xiàn)的HIF-α亞型，相關(guān)的研究已經(jīng)比較深入，對(duì)于其直接或間接地參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程的作用也為眾多研究所肯定[7-9]。然而目前對(duì)于HIF-2α以及兩個(gè)亞基之間相互關(guān)系的研究則所知較少。

本研究中，HIF-2α在前列腺癌各病理分級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為高分化57.1%，中分化63.2%，低分化91.7%，高、中、低分化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；臨床分析方面，A＋B期60.7%，C＋D期82.4%，二者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。研究結(jié)果提示，HIF-2α在前列腺癌組織中的表達(dá)是升高的，說(shuō)明HIF-2α可能與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。VEGF是同源二聚體糖蛋白，可以特異性的作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂和趨化，有助于微血管的通透性提升，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移以及腫瘤新生血管的形成，是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的先決條件[10]。研究顯示[11-12]，在乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌等多種惡性腫瘤組織中有HIF-2α和CEGF的mRNA和蛋白的高表達(dá)，在這些腫瘤組織中，HIF-2α促進(jìn)VEGF高表達(dá)，增加腫瘤新生血管的形成，有利于腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。本研究中，VEGF在前列腺癌各病理分級(jí)的陽(yáng)性表達(dá)率分別為高分化42.9%，中分化68.4%，低分化75.0%，高、中、低分化比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；臨床分析方面，A＋B期53.6%，C＋D期76.5%，二者間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。HIF-2α與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)，r＝0.258，P＜0.05。本研究結(jié)果支持上述觀點(diǎn)，前列腺癌組織有HIF-2α大片著色，這說(shuō)明癌變組織數(shù)量與HIF-2α表達(dá)密切相關(guān)，而同時(shí)這些區(qū)域的VEGF也都呈高表達(dá)，這說(shuō)明癌細(xì)胞缺血缺氧后可誘導(dǎo)HIF-2α的大量產(chǎn)生，并促進(jìn)VEGF高表達(dá)，通過(guò)與靶基因的低氧反應(yīng)元件(HREs)結(jié)合，誘導(dǎo)靶基因的轉(zhuǎn)錄激活，這些靶蛋白往往涉及低氧耐受或血管生成，在前列腺癌組織中，局部低氧環(huán)境可能誘導(dǎo)HIF-2α表達(dá)增加，而隨著HIF-2α表達(dá)的大量產(chǎn)生，進(jìn)一步通過(guò)誘導(dǎo)一系列相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)前列腺癌的發(fā)展，這也與一些研究表明的HIF-2α能過(guò)誘導(dǎo)VEGF表達(dá)促進(jìn)腫瘤發(fā)展的報(bào)道相一致[13]。

綜上所述，缺氧誘導(dǎo)因子HIF-2α在前列腺腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，對(duì)于前列腺癌病情的診斷和治療具有重要臨床意義。

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Objective To explore the expression and clinical significance of HIF-2αin prostate cancer.Methods The immunohistochemical method was applied to detect HIF-2αexpression in prostate cancer tissues，then the relationship between HIF-2αexpression and clinical pathology and clinical stage features was evaluated，and the correlation of HIF-2αexpression and vascular endothelial growth factor(VEGF)was also evaluated.Results The positive expression rates of HIF-2α in different pathological gradings of prostate cancer were respectively 57.1%in high differentiation，63.2%in moderate differentiation，and 91.7%in poor differentiation.There were differences of statistical significance between high，moderate and poor differentiation(P＜0.05).Clinical analysis showed 60.7%in stage A＋B，82.4%in stage C＋D，and the differences between them showed statistical significance(P＜0.05).The positive expression rates of VEGF in different pathological gradings of prostate cancer were respectively 42.9%in high differentiation，68.4%in moderate differentiation，and 75.0%in poor differentiation.There were differences of statistical significance between high，moderate and poor differentiation(P＜0.05).Clinical analysis showed 53.6%in stage A＋B，76.5%in stage C＋D，and the differences between them showed statistical significance(P＜0.05).The expression of HIF-2α and VEGF was positively related(r＝0.258，P＜0.05).Conclusion HIF-2α plays an important role in the occurrence and development of prostate cancer，which has great clinical significance in the diagnosis and treatment of prostate cancer.

Hypoxia-inducible factor；Prostate cancer；Vascular endothelial growth factor(VEGF)

2016-04-19)

1005-619X(2016)09-0907-03

10.13517/j.cnki.ccm.2016.09.004

010017 內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科

內(nèi)蒙古科技廳應(yīng)用技術(shù)研究基金(20120403)

云志中