扶芳藤醇提液對小鼠凝血四項的影響

蔣力群霍 宇楊 捷（ 中國人民解放軍第303醫院藥劑科，廣西 南寧 530000； 廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院，廣西 南寧 530；3 中國人民解放軍第303醫院藥劑科，廣西 南寧 530000）

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扶芳藤醇提液對小鼠凝血四項的影響

蔣力群1霍 宇2楊 捷3*
（1 中國人民解放軍第303醫院藥劑科，廣西 南寧 530000；2 廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院，廣西 南寧 530222；3 中國人民解放軍第303醫院藥劑科，廣西 南寧 530000）

【摘要】目的 研究中藥扶芳藤的凝血作用。方法 實驗動物隨機分為6組，即空白對照組、陽性對照組、扶芳藤醇提液高、中、低劑量組，測定扶芳藤醇提液對對小鼠凝血酶時間（TT）、凝血酶原時間（PT），活化部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原（FIB）的影響。結果 扶芳藤醇提液能明顯縮短小鼠TT、PT、APTT，增加FIB含量。結論 扶芳藤醇提液具有顯著的凝血作用。

【關鍵詞】扶芳藤；凝血時間；凝血四項

扶芳藤（Enonymus fortunei （Ture.）Hand-Mazz）系衛矛科衛矛屬植物，屬民間草藥。《中藥大辭典》記載“扶芳藤治腰肌勞損，關節酸痛、補腎強筋，安胎，止血消癖”［1-2］。本實驗在前期研究工作基礎上以云南白藥為陽性對照藥物，驗證中藥扶芳藤的凝血作用，探討其作用機制，為中藥扶芳藤下一步開發利用應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物及試劑：扶芳藤原藥材由廣西中醫學院制藥廠科研所提供，經廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院苑敏教授鑒定，藥材用12倍量60%乙醇，提取2次，每次1 h，3.8 g生藥/g；實驗時以蒸餾水配成所需濃度；云南白藥（批號：20080629），云南白藥集團股份有限公司；109 mmol/L枸櫞酸鈉溶液（批號：20060323），廣東達濠精細化學品公司；凝血酶原時間（PT）試劑盒（批號：105090），北京萊博生物實驗材料研究所；活化部分凝血活酶時間（APTT）試劑盒（批號：111021），北京萊博生物實驗材料研究所；凝血酶時間（TT）試劑盒（批號：111027），北京萊博生物實驗材料研究所；纖維蛋白原（FIB）試劑盒（批號：1110131），北京萊博生物實驗材料研究所。

1.1.2 實驗動物：昆明種小鼠，體質量18～22 g，雌雄兼用，購自廣西醫科大學實驗中心，合格證號：SCXK桂2009-0002，標準飼料喂養，自由攝食，自由飲水。醫學實驗動物環境設施合格證號（桂）醫動字第12006號，使用許可證號SYXK（桂）2003-0001。

1.1.3 實驗儀器：Sysn ECA-150型全自動血凝儀，日本東亞醫用電子儀器有限公司；TU-1901型紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司。

1.2 方法［3］：取健康昆明種小鼠60只，體質量（20±2）g，雌雄兼用，隨機分成5組，12只/組。即空白對照組（生理鹽水，NS）、陽性藥對照組、扶芳藤醇提液高、中、低三個劑量組。空白對照組給予等容積NS，陽性對照組給予云南白藥1 g/kg，用藥組高劑量組（18 g生藥/kg），中劑量組（9 g生藥/kg），低劑量組（4.5 g生藥/kg），灌胃給藥（ig），給藥容量為20 mL/kg。每天給1次，連續7 d。末次給藥后1 h，拔眼球取血1.5 mL，緩慢注入含0.5 mL 109 mmol/L枸櫞酸納溶液的塑料試管中，充分混勻。以3000 rpm離心15 min去除血小板，分離血漿，采用Sysn ECA-150型全自動血凝儀，測定凝血四項：凝血酶原時間（PT）、激活部分凝血酶原時間（APTT）、凝血酶時間（TT）、纖維蛋白原含量（FIB）。

1.3 統計學方法：采用統計學軟件SPSS17.0進行統計學處理，數據結果以均數±標準差表示，組間比較采用方差分析，以P＜0.05具有統計學意義。

2 結 果

云南白藥與扶芳藤醇提液高、中、低劑量組均能明顯縮短實驗小鼠PT、APTT和TT，提高血漿FIB，與空白對照組比較有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。結果見表1。

表1 扶芳藤醇提液對小鼠PT、APTT、TT、FIB的影響（±s）

表1 扶芳藤醇提液對小鼠PT、APTT、TT、FIB的影響（±s）

注：與空白對照組組比較*P＜0.05，**P＜0.01

組 別　　劑量（g/kg）　n　PT（sec）　APTT（sec）　TT（sec）　FIB（g/L）空白組　-　12　8.79±1.02　21.74±1.58　24.78±3.09　1.76±0.39云南白藥組　1　12　7.14±0.42**　17.24±1.23**　18.21±1.21**　2.94±0.63**高劑量組　18　12　7.26±0.48**　17.18±1.09**　18.56±2.09**　2.59±0.72**中劑量組　9　12　7.63±0.63*　17.46±1.35**　19.58±1.83**　2.51±0.54**低劑量組　4.5　12　7.26±0.66**　17.91±1.46**　16.69±1.72**　2.41±0.49*

3 討 論

止血過程是復雜的生理功能，包括血管收縮、血小板聚集和血液凝固三個因素。如外傷出血，則見局部血管收縮，血小板在血管破裂處凝集，破裂并釋放出血管收縮物質及“凝血因子”，而組織液及血漿中的一些凝血因子（因子Ⅴ，Ⅶ，Ⅷ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ等）也受到激活而參與血凝過程，于是血塊形成，出血停止［4］。

凝血酶原時間（PT）測定，屬于檢測外源性凝血途徑的篩選性試驗，主要用于篩選檢測外源凝血系統因子Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗［5-7］；活化部分凝血活酶時間（APTT）測定，反映Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等內源凝血途徑因子的活性，是內源性凝血系統較敏感和常用的篩選方法［8］；纖維蛋白原（FIB）由α、β、γ三對不同多肽鏈所組成，多肽鏈間以二硫鍵相連。在凝血酶作用下，α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽，生成纖維蛋白單體。在此過程中，由于釋放了酸性多肽，負電性降低，單體易于聚合成纖維蛋白多聚體。進一步在Ca2+與活化的Ⅷ因子作用下，單體之間以共價鍵相連，則變成穩定的不溶性纖維蛋白凝塊，完成凝血過程［9］；凝血酶（TT）時間測定是檢測凝血、抗凝及纖維蛋白溶解系統功能的一個關鍵試驗［10］。

本實驗結果顯示，扶芳藤醇提液各劑量組均可不同程度的縮短APPT及PT時間，表現為同時影響小鼠的內源性和外源性凝血系統起而到促凝作用；本品使凝血時間時間縮短FIB含量增高，提示本品的止血作用可能與影響小鼠纖維蛋白溶解系統有關。扶芳藤藥用歷史悠久，歷代本草對它的功效均有論述。本實驗通過初步的凝血研究，扶芳藤醇提液能明顯縮短小鼠血漿TT、PT、APTT，增加FIB含量，有較為顯著的凝血作用，但其成分復雜，要明確其凝血作用具體機制，尚待進一步深入研究。

參考文獻

［1］ 國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草［M］.上海:上海科學技術出版社，1999: 827.

［2］ 江蘇新醫學院.中藥大辭典［M］.上海:上海科學技術出版社出版，1986:108.

［3］ 徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.3版.北京:人民衛生出版社，2002:1271.

［4］ 姚泰.生理學［M］.5版.北京:人民衛生出版社，2002:63.

［5］ Smythe MA，Koberber JM，Nowak SN，et al.Correlation between activated clotting time and activated partial thromboplastin times［J］. Ann Pharmacother，2002，36（1）:7.

［6］ 費鮮明，陳艷，吳萬飛，等.仙鶴草水體物體外對血小板聚集、凝血功能及血液流變學的影響［J］.中國臨床藥理學與治療學，2013，18（1）:10.

［7］ Eikelboom JW，Weitz JI.Selective factor Xa inhibition for thromboprophylaxis ［J］.Lancet，2008，372（9632）:6.

［8］ 王珍，楊靖亞，宋書杰，等.三七素對凝血功能的影響及止血機制［J］.中國新藥雜志，2014，23（3）:356.

［9］ 蘇敏，梁慧超，孟江，等.姜炭對虛寒性出血證大鼠凝血功能，血栓素B2和6-酮-前列腺F1α的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（9）:190.

［10］ 王振義.止血與血栓基礎理論與臨床［M］.上海:上海科學技術出版社，1996:104.

中圖分類號：R284

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）10-0041-02

基金項目：2015年度廣西高校科學技術研究項目（KY2015YB513）

*通訊作者：E-mail：huoyu_10@163.com