特應性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究*

蔣有讓，刁慶春，史丙俊，王櫻霖，徐可佳，馮　林

(重慶市中醫院/重慶市第一人民醫院皮膚科　400011)

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特應性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究*

蔣有讓，刁慶春△，史丙俊▲，王櫻霖，徐可佳，馮林

(重慶市中醫院/重慶市第一人民醫院皮膚科400011)

[摘要]目的探討特應性皮炎(AD)外周血清Th1/Th2/Th17平衡的變化規律及相關細胞因子的變化規律，以進一步探討AD發病的免疫機制。方法采用流式熒光技術測定47例AD患者(AD組)和40例健康自愿者(對照組)外周血清中的γ-干擾素(IFN-γ)、白細胞介素(IL)-4、IL-17、IL-21、IL-23水平并進行統計分析，從而分析Th1/Th2/Th17/Treg平衡在AD中變化規律。結果在AD患者血清中，IL-4水平較對照組升高(P<0.05)，IL-17、IL-23的水平顯著高于對照組(P<0.05)；IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-17較對照組明顯降低(P<0.01)；IL-17與AD嚴重程度(SCORAD)評分呈正相關(P<0.05)。結論在AD病程中Th1/Th2、Th1/Th17降低，Th1/Th2/Th17平衡的漂移可能是AD發病的重要機制。

[關鍵詞]特應性皮炎；細胞因子類；Th1細胞；Th2細胞；Th17細胞；流式熒光技術

特應性皮炎(Atopic dermatitis，AD)被認為是一種復發性、瘙癢性、慢性炎癥性皮膚疾病，其發病機制目前尚不完全清楚，特別是如何活化、維持活化功能紊亂的反應性T細胞的機制尚不明確。當抗原刺激的信號刺激初始CD4+T淋巴細胞后，相繼發現并且認知了Th1、Th2、Th17等不同的CD4+T細胞亞群，不同的細胞亞群在體內主要功能是在通過分泌不同的細胞因子來相互促進、相互制約，進而形成了一個CD4+T細胞為主的免疫調節網絡，在各種炎癥性及自身免疫性疾病中扮演了重要作用。本課題使用流式熒光技術檢測AD外周血清中Th1、Th2、Th17特異性細胞因子來探索它們在AD的變化規律，以進一步探討AD發病的免疫機制。

1資料與方法

1.1一般資料選擇本院2012年10月至2013年3月在皮膚科門診就診并診斷為AD的患者47例(AD組)，其中男25例，女22例；年齡4～20歲，平均(9.09±4.53)歲，AD嚴重程度(SCORAD)評分24.1～91.1分，平均(54.61±16.32)分。選擇同期本院健康自愿者40例作為對照組，其中男21例，女19例；平均年齡(10.25±4.67)歲。兩組對象性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要試劑Human Th17 Magnetic Kit由美國Luminex公司生產。

1.2.2檢測方法(1)血清標本的收集：兩組對象均抽取外周靜脈血5 mL留取血清，分裝凍存(凍存時間不超過6個月)，統一檢測；(2)操作步驟：按試劑說明書操作步驟在流式熒光儀上進行細胞因子的檢測。

2結果

2.1兩組對象血清IL-4、IL-17、IL-23等水平比較AD組患者血清中IL-4水平較對照組升高(P<0.05)，IL-17、IL-23水平明顯高于對照組(P<0.01)，AD組IL-21、IFN-γ的水平較對照組無明顯差異(P>0.05)，AD組IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-17水平明顯低于對照組(P<0.01)，見表1。

2.2AD組患者T細胞亞群相關細胞因子與SCORAD評分嚴重程度的相關性IL-17與AD呈正相關(P<0.01 )，IFN-γ、IL-4、IL-21、IL-23與SCORAD評分嚴重程度無明顯相關性(P>0.05)，見表2。

表1　　兩組對象各細胞因子水平比較

表2　　AD組患者各細胞因子與SCORAD評分的相關性

3討論

IFN-γ、IL-4分別是Th1、Th2細胞的特征性細胞因子[1]，Th17最主要的效應分子為IL-17A(即IL-17)，其次有IL-21和IL-23[2]。本實驗檢測出IFN-γ無明顯變化，IL-4升高，且IFN-γ/IL-4明顯變化，提示Th1/Th2平衡的改變參與AD的病程。有學者在1986年首次提出了CD4+T細胞可分為Th1細胞、Th2細胞兩種獨立的各具有不同的特殊的細胞因子譜和生物學功能的細胞亞群，并且用之解釋獲得性免疫相關現象[3]。而AD就被認為是經典的Th1/Th2失衡類型的皮膚疾病，Th1、Th2細胞參與免疫主要是通過分泌不同的細胞因子，細胞因子間相互交叉調節、相互抑制，從而形成動態平衡。一旦此動態平衡被打破，機體便會因為Th1占優勢或Th2占優勢形成Th1/Th2“漂移”狀態而發病。

Th17細胞是近年來新發現的CD4+T細胞亞群，其在免疫應答、自身免疫中均有重要的意義[4]。Th17細胞以分泌在IL-17和IL-21、IL-23等因子為主要特征， IL-17的生理作用主要表現在炎癥反應的介導，中性粒細胞的動員、募集和活化，以及參與自身免疫性、感染性疾病的病程等[5-6]。本研究得出IL-17、IL-23在AD中明顯升高，且IL-17的升高與AD嚴重程度(SCORAD評分)明顯相關，提示AD患者的發病免疫學機制不但有Th1/Th2細胞失衡的因素，同時有Th17細胞失衡的因素。馬蕾等[7]通過檢測外周血中Th17細胞，也發現并推測其高表達可能是AD發病中異常免疫反應重要原因。在AD病程中，慢性期至急性期發展過程中Th1/Th2平衡的“漂移”可能與Th17細胞增多有關。IL-23也主要是Th17細胞所分泌，它的主要作用在于調節促進Th17細胞的生長、促進分泌IL-17等[8]。本研究檢測到IL-23明顯升高，從而使Th1/Th2/Th17平衡向Th17細胞方向，即炎癥加重方向“漂移”，促進了AD的病程。IFN -γ、IL-4和IL-21是Th17細胞的負性調節因子[9]；在本研究中IFN-γ、IL-21無明顯變化，但IFN-γ/IL-17明顯降低，可見機體無法產生足夠的Th17細胞抑制因子，在整個免疫調節機制中也使Th1/Th2/Th17平衡向炎癥加重方向“漂移”，免疫反饋調節已經受到一定的破壞，無法改變機體過度免疫的狀態，炎癥的產生與加重在所難免。

本研究所采用新型生物學檢測方法-流式熒光技術，符合科學技術發展的需要。被國內外學者應用于檢測血漿、淚液、痰等不同標本中不同的細胞因子，其檢測結果與ELISA法比較，兩者相關性好，流式熒光技術動力學線性范圍也比ELISA寬、靈敏度更高[10-13]。

綜上所述，AD患者外周血清細胞因子中，無論Th1/Th2、Th1/Th17均存在相應的平衡的“漂移”，提示平衡的打破在AD的病程中起了相應的重要的作用，其相應的細胞因子相互作用、相互抑制，構成了一個復雜的細胞因子網絡。由此得出，Th1/Th2/Th17失平衡可能是AD發病的重要免疫學機制。而本試驗不足在于沒有同時使用流式熒光技術檢測AD外周血中的Th1、Th2、Th17細胞的具體數量的變化，有待于進一步檢測和擴大樣本檢測。

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Study on Th1/Th2/Th17 balance in atopic dermatitis*

JiangYourang,DiaoQingchun△,ShiBingjun▲,WangYinglin,XuKejia,FengLin

(DepartmentofDermatology,ChongqingMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine/ChongqingMunicipalFirstPeople′sHospital,Chongqing400011,China)

[Abstract]ObjectiveTo research the change rule of peripheral serum Th1/Th2/Th17 balance and relevant cytokines in atopic dermatitis(AD) and to further study its immunologic mechanism.MethodsThe levels of peripheral serum IFN-γ,IL-4,IL-17,IL-21 and IL-23 in the patients with AD were detected by the flow immunofluorescence technology and the detection results were performed the statistical analysis,thus the change rule of Th1/Th2/Th17 balance in AD was analyzed.ResultsThe IL-4 level in peripheral serum of the patients with AD was increased compared with the healthy control group (P<0.05);the IFN-γ/IL-4 and IFN-γ/IL-17 in the AD group were significantly decreased compared with the control group(P<0.01);IL-17 was positively correlation with SCORAD scores of AD severity(P<0.05).ConclusionTh1/Th2 and Th1/Th17 are decreased in the AD course.Th1/Th2/Th17 balance drift may be the important mechanism of AD pathogenesis.

[Key words]atopic dermatitis;cytokines;Th1 cells;Th2 cells;Th17 cells;flow immunofluorescence technology

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.18.010

基金項目：重慶市衛生局中醫科研計劃立項目錄(2011-2-102，2012-2-182)；重慶市自然科學基金資助項目(cstc 2012jjA 10141)。

作者簡介：蔣有讓(1987-)，住院醫師，碩士研究生，主要從事免疫性皮膚病、性病方向研究。△通訊作者，E-mail：qchdiao@vip.sina.com；▲通訊作者，E-mail：www.1806740182.qq.com。

[中圖分類號]R751.1

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)18-2482-02

(收稿日期：2015-11-29修回日期：2016-03-13)