HPLC法測定?；切苋パ跄懰崮z囊的有關物質

劉小雙蒲旭峰歐世榮楊 蕊（ 成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 637， 成都欣捷高新技術開發有限公司，四川 成都 6004）

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HPLC法測定?；切苋パ跄懰崮z囊的有關物質

劉小雙1蒲旭峰1歐世榮2楊 蕊2
（1 成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137，2 成都欣捷高新技術開發有限公司，四川 成都 610041）

【摘要】目的 建立測定?；切苋パ跄懰崮z囊有關物質的方法。方法 采用KromasilC18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（磷酸調pH至3.0），梯度洗脫，檢測波長205 nm，柱溫30 ℃，流速1.0 mL/min，進樣量50 μL。結果 ?；切苋パ跄懰?、?；蛆Z去氧膽酸、熊去氧膽酸分別在0.048～9.52 μg/mL（r=0.9992）、0.051～101.00 μg/mL（r=0.9998）、2.51～50.28 μg/mL （r=0.9998）范圍內與峰面積呈良好的線性關系，其定量限分別為2.489、3.671、126.597 ng；檢測限分別為0.702、1.018、38.219 ng。?；蛆Z去氧膽酸和熊去氧膽酸平均回收率分別為102.12%、99.71%，RSD分別為0.96%、0.62%（n=9）。結論 該方法簡便準確、精密度和重復性良好，結果準確可靠。

【關鍵詞】牛磺熊去氧膽酸膠囊；有關物質；高效液相色譜法

?；切苋パ跄懰幔╰auroursodeoxycholicacid，TUDCA）化學名是2-[[（3，5，7）-3α，7β-二羥基-24-氧代膽甾烷-24-基]氨基]乙烷磺酸二水合物[1]，其具有溶解膽固醇結石和保護肝細胞等生理功能。牛磺熊去氧膽酸膠囊（商品名滔羅特）由BruschettiniS..r.I.（意大利貝司迪大藥廠）研制，臨床主要用于治療膽囊膽固醇結石、原發硬化性膽管炎、原發膽汁性肝硬化等[2-5]。?；切苋パ跄懰崮z囊在國內外的藥典中尚未見收載，現采用HPLC測定?；切苋パ跄懰崮z囊中的已知雜質?；蛆Z去氧膽酸（taurochenodeoxycholicacid，TCDCA）和熊去氧膽酸（ursodeoxycholicacid，UDCA）及其他有關物質，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Agilent1200高效液相色譜儀（G1315A型DAD檢測器）。

1.2 試藥：?；切苋パ跄懰徕c對照品（購自美國TRC公司，批號T009200，含量99.7%），?；蛆Z去氧膽酸對照品（購自中國食品藥品檢定研究院，批號110846-200506，含量99.2%），熊去氧膽酸對照品（購自中國食品藥品檢定研究院，批號110755-9003，含量97.6%），甲醇、乙腈均為色譜純（Sigma公司），水為超純水；其他試劑試藥均為分析純；市售滔羅特?；切苋パ跄懰崮z囊（批號0907、1165）均由成都欣捷高新技術開發有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液制備精密稱取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的?；切苋パ跄懰徕c對照品10.51 mg、?；蛆Z去氧膽酸對照品15.18 mg、熊去氧膽酸對照品15.40 mg置于10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液1.0 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為混合對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備取牛磺熊去氧膽酸膠囊內容物，混勻，研細，精密稱取適量（約相當于?；切苋パ跄懰?00 mg），置于20 mL量瓶中，加入甲醇適量，超聲提取5 min，放冷至室溫，再加甲醇定容至刻度，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液即得。

2.2 色譜條件與系統適用性：試驗采用KromasilC18色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm），流動相為乙腈（A）-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（磷酸調pH至3.0），梯度洗脫（0 min，20%A；15 min，35%A；30 min，20%A）；柱溫：30 ℃；檢測波長：205 nm，流速1.0 mL/min，進樣量50 μL。在上述色譜條件下，取混合對照溶液進樣測定，記錄色譜圖（圖1）。結果顯示各雜質峰及雜質與主成分峰之間分離度均＞1.5，符合要求。

圖1 牛磺熊去氧膽酸有關物質系統適應性分離圖

2.3 專屬性考察：將經酸、堿、氧化、高溫、高濕及光照破壞的供試品溶液按2.2項下色譜條件測定，記錄色譜圖（圖2）。結果表明：供試品溶液在各破壞試驗條件下均有不同程度的降解，各降解雜質基本能被檢出，且各雜質峰間及雜質峰與主峰間均能達到基線分離，表明本方法專屬性較好。

圖2 ?；切苋パ跄懰崮z囊專屬性試驗色譜圖

2.4 線性關系：精密稱取牛磺熊去氧膽酸、牛磺鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸對照品適量，分別用甲醇溶解成一系列濃度標準溶液（牛磺熊去氧膽酸：0.048、0.48、2.38、4.76、5.71、9.52 μg/mL；?；蛆Z去氧膽酸：0.051、5.05、25.25、50.50、60.60、101.00 μg/mL；熊去氧膽酸：2.51、12.57、25.14、30.17、50.28 μg/mL），精密量取上述溶液各50 μL，分別注入色譜儀。以對照品濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），所得線性回歸方程（n=6）及線性范圍見表1。

2.5 定量檢測：限取2.4項下的對照品溶液，加甲醇逐級稀釋，進樣測定，測得各化合物的定量限及檢測限見表1。

2.6 重復性：精密量取2.1項下方法制得供試品溶液和對照品溶液，平行操作6份，進樣測定，記錄峰面積計算RSD值，?；切苋パ跄懰?、?；蛆Z去氧膽酸、熊去氧膽酸含量RSD分別為1.44%、1.62%、1.98%，其他最大單雜含量RSD=1.67%，總雜含量RSD=1.03%。

2.7 穩定性：取對照品溶液和批號為1165的供試品溶液，分別于配制后的0、2、4、8、24、48 h進樣測定，在48 h內供試品溶液中雜質峰面積未有明顯增加，供試品溶液中牛磺熊去氧膽酸、?；蛆Z去氧膽酸、熊去氧膽酸含量RSD分別為1.39%、0.07%、3.82%，其他最大單雜含量RSD=1.22%，總雜含量RSD=0.88%（n=6）結果表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.8 加樣回收率：取2.7項下供試品溶液和對照品溶液進樣測定，計算?；蛆Z去氧膽酸和熊去氧膽酸的含量。另加2.1.1項下混合對照品貯備液適量于供試品溶液中，制得含?；蛆Z去氧膽酸和熊去氧膽酸7.5、15、22.5 μg/mL的溶液，每個濃度平行3份，?；蛆Z去氧膽酸和熊去氧膽酸平均回收率分別為102.12%、99.71%，RSD=0.96%、0.62%（n=9）。

2.9 樣品測定：分別精密量取50 μL?；切苋パ跄懰釋φ掌啡芤汉凸┰嚻啡芤?，按照2.2項色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，結果見表2。

表2 牛磺熊去氧膽酸膠囊有關物質測定結果

3 討 論

?；撬岷托苋パ跄懰釣榕；切苋パ跄懰岷铣傻钠鹗荚希酁槠渲饕に囯s質與降解雜質，為控制膠囊質量需對?；撬岷托苋パ跄懰徇M行檢查。牛磺酸僅有末端的紫外吸收，參考文獻[6]采用TLC來檢查。采用本文的HPLC色譜條件與文獻[7]收錄薄層色譜法相比，更能有效的控制熊去氧膽酸的量。參考張曉艷[5]等的研究，將205 nm作為有關物質的檢測波長。

參考文獻

[1] 王海龍,吳成龍,鄧勇等.牛磺熊去氧膽酸的合成[J].中國醫藥工業雜質,2009,40(2):88-89

[2] 沈俊,周聃,張若丹,等.HPLC測定風熱清膠囊中的綠原酸和牛磺熊去氧膽酸[J].華西藥學雜志,2008,23(3):346-348.

[3] 駱助林,陳理國,苗建國,等.保膽取石術后口服?；切苋パ跄懰犷A防結石復發的臨床觀察[J].中國循證醫學雜志,2011,11(6): 644-646.

[4] 張曉艷,崔蕊,賈建靜,等.HPLC測定?；切苋パ跄懰崮z囊中的有關物質[J].華西藥學雜質,2012,27(5):585-587.

[5] JX20080085,牛磺熊去氧膽酸膠囊(滔羅特)進口標準[S].

[6] 中華人民共和國藥典委員會.中國藥典[S].二部,北京:化學工業出版社,2010:1105-1106.

中圖分類號：R282.710.5

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）09-0028-02