納他霉素與6種不同殺菌劑混配對平菇木霉M23的毒力比較

劉仁奎　劉斌

摘要[目的]明確納他霉素與6種殺菌劑對木霉毒力的差異并比較納他霉素與6種殺菌劑混配對木霉M23的毒力。[方法]采用菌絲生長速率法測定納他霉素和6種不同殺菌劑以及納他霉素與6種殺菌劑混配對木霉M23的室內毒力。[結果]6種不同殺菌劑對木霉的毒力不同，其EC50分別為0.448 4、0.709 9、1.390 8、8.648 3、12.448 1和18.185 6 mg/L；與6種殺菌劑相比，納他霉素表現出較好的殺菌效果，其EC50為1.551 1 mg/L，與百菌清相近。混配試驗結果表明，納他霉素與百菌清以3∶1比例、與多菌靈以1∶6比例、與苯醚甲環唑以1∶6比例混配均具有最高的共毒系數，其值分別為250.020 0、373.990 3和189.194 4。[結論]納他霉素與百菌清（3∶1比例）、多菌靈（1∶6比例）、苯醚甲環唑（1∶6比例）混配均具有較好的增效作用，可進一步用于生產實踐。

關鍵詞 納他霉素；殺菌劑；農藥混配；木霉

中圖分類號 S482.2 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2016）05-018-03

Abstract[Objective]The aim was to determine the toxicity difference of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride， and compare toxicity of mixture of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride M23.[Method]By the method of mycelium growing， the indoor toxicity of natamycin and six fungicides against Trichoderma viride M23 was determined.[Result]The results showed that the 6 fungicides had different control efficiency， with their EC50 values of 0.448 4， 0.709 9， 1.390 8， 8.648 3， 12.448 1 and 18.185 6 mg/L； compared with the 6 fungicides， natamycin show good control effect with its value of 1.551 1 mg/L， similar to chlorothalonil. The mixprocess experiment showed obvious synergies， that the mixture of natamycin and chlorothalonil with ratio of 3∶1 had the highest cotoxicity coefficient of 250.020 0； natamycin and carbendazim with ratio of 1∶6 had the highest cotoxicity coefficient of 373.990 3； natamycin and difenoconazole with ratio of 1∶6 had the highest cotoxicity coefficient of 189.194 4.[Conclusion]The experimental results show that the three mixed proportions of the fungicides（natamycin：chlorothalonil=3∶1，natamycin：carbendazim=1∶6， natamycin：difenoconazole=1∶6） have good synergistic effect and could be used in further production.

Key words Natamycin； Fungicide； Mixed pesticides； Trichoderma viride

木霉（Trichoderma viride）屬于半知菌亞門絲孢綱絲孢目粘孢菌類，是一類普遍存在的真菌，其孢子梗從菌絲上長出，在瓶梗式的小梗頂部產生分生孢子，分生孢子圓形或橢圓形，單細胞，淡綠色[1-2]。木霉在自然界分布廣泛，常腐生于木材、種子及植物殘體上[2-3]。木霉是適應性很強的一種真菌，繁殖速度快，在食用菌栽培中能夠污染整個菇包，通過分泌毒素，抑制、破壞食用菌菌絲細胞質生長，阻礙食用菌菌絲生長，且能生長在生長勢較弱的菌絲體上，使組織細胞溶解死亡。木霉對蘑菇、香菇、平菇、銀耳、木耳等多種食用菌菌種和栽培菇床都能侵染危害，導致菌種成品率降低和產量大幅度減少。木霉主要通過侵染食用菌的菌種、菌筒、栽培料和子實體，如香菇受害后菌柄和菌蓋背面變褐腐爛，病部產生綠色霉層；銀耳早期染病的子實體萎縮不長，后期感染的子實體逐漸腐爛，產量損失巨大[4]。因此，開展木霉防治研究十分必要。

使用現代殺菌劑防治植物病害是保證農作物高產、穩產的重要措施之一，但單一藥劑的使用在病害防治方面不僅面臨著殺菌譜小的問題，更重要的是由于長期單一使用某種殺菌劑，必將導致病害抗藥性的產生[5]，而殺菌劑混配能夠解決這些農藥使用的不足[6]。多菌靈、百菌清已被廣泛應用于食用菌生產中的病害防治[7]，多菌靈為苯并咪唑類殺菌劑，能干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細胞分裂，起到殺菌作用，百菌清為取代苯類廣譜性殺真菌劑，能與真菌細胞中的三磷酸甘油酸醛脫氫酶發生作用與該酶中含有半胱氨酸的蛋白質相結合，從而破壞該酶活性，使真菌細胞的新陳代謝受破壞而失去活性；苯醚甲環唑是由先正達公司開發的具有保護、治療和內吸性的三唑類殺菌劑，屬甾醇合成抑制劑，可阻止真菌的生長，對子囊菌亞門、擔子菌亞門、半知菌亞門多個屬病原菌引起的作物病害均有良好的保護治療作用[8]；嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌農藥，高效、廣譜，對幾乎所有的真菌界（子囊菌亞門、擔子菌亞門、鞭毛菌亞門和半知菌亞門）病害如白粉病、銹病、穎枯病、網斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性；甲基硫菌靈是一種廣譜性內吸低毒殺菌劑，具有內吸、預防和治療作用，是由日本曹達株式會社研制開發出來，能夠有效防治多種作物病害。納他霉素是一種多烯大環內酯類抗真菌劑，能夠專性地抑制幾乎所有的霉菌和酵母菌等真菌，而對細菌和病毒無效。納他霉素作為抗生素極安全，不具有急性毒性，通常用于食品的表面防腐，也被醫學上用于治療真菌感染。為明確納他霉素與不同類型傳統殺菌劑對木霉的藥效差異，筆者研究了納他霉素與百菌清、苯醚甲環唑、嘧菌酯、甲基硫菌靈、多菌靈溴菌腈6種殺菌劑單劑及混配對木霉的室內毒力。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株。

木霉M23由廣西大學食用菌研究所分離獲得，為木霉的一個亞種，對食用菌產生的病害較嚴重。

1.1.2 供試培養基。

馬鈴薯葡萄糖培養基（PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18 g，水1 L。

1.1.3 供試殺菌劑。

98%納他霉素，新疆梅花氨基酸責任有限公司；98%多菌靈原藥，江蘇省江陰蘇利化學股份有限公司；97.2%百菌清原藥，江蘇省江陰蘇利化學股份有限公司；98%溴菌腈原藥，江蘇省鹽城經緯化工有限公司；95.5%苯醚甲環唑原藥，浙江禾本科技有限公司；98%嘧菌酯原藥，浙江省湖州南潯農惠達化工有限公司；98%甲基硫菌靈原藥，安徽廣信農化股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 室內毒力測定。

采用菌絲生長速率法[9]。根據預試驗結果確定藥劑試驗濃度并配制成適量的各供試藥劑母液，按量加入熔化并冷卻至50 ℃左右的PDA培養基中，配制成不同濃度的加藥培養基。納他霉素的濃度梯度設置為0.500、1.000、1.500、2.000、2.500 mg/L；嘧菌酯、溴菌腈、甲基硫菌靈的濃度梯度設置為1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 mg/L；百菌清的濃度梯度設置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；苯醚甲環唑的濃度梯度設置為0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg/L；多菌靈的濃度梯度設置為0.250、0.500、1.000、2.000、4.000 mg/L。將納他霉素與不同殺菌劑按A（6∶1）、B（3∶1）、C（1∶1）、D（1∶3）、E（1∶6）質量比進行混配，其中納他霉素與嘧菌酯混配的濃度梯度設置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；納他霉素與溴菌腈的混配濃度梯度設置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；納他霉素與多菌靈的混配濃度梯度設置為0.250、0.500、1.000、2.000、4.000 mg/L；納他霉素與百菌清的混配濃度梯度設置為0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 mg/L；納他霉素與苯醚甲環唑混配濃度梯度設置為0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg/L；納他霉素與甲基硫菌靈混配濃度梯度設置為1.000、2.000、4.000、8.000、16.000 mg/L，各處理3次重復，以蒸餾水為對照。將木霉M23置于無藥的PDA培養基上，25 ℃培養3 d后，從菌落邊緣打取直徑為0.5 cm的菌碟，菌絲朝下接種于系列含藥PDA平板中央，每處理設5次重復，以不含藥的平板為對照，3 d后采用十字交叉法測量各處理菌落直徑。

1.2.2 殺菌劑混配劑效果評價。

根據不同處理中木霉M23菌落直徑的平均凈增長直徑計算抑制率，利用 DPS 軟件，分別建立藥劑質量濃度自然對數值（x）和抑制率幾率值（y）之間的回歸關系，計算各供試藥劑的毒力回歸方程、EC50、相關系數及其95%置信區間[10-12]。

混配劑作用效果評價是依據共毒系數（CTC）。各藥劑毒力指數（TI）、復配劑實際毒力指數（ATI）、理論毒力指數（TTI）和共毒系數（CTC）計算參照Sun等[13]的方法進行。

TI=標準藥劑的EC50/供試藥劑的EC50×100

ATI=標準藥劑的EC50/復配劑藥劑的EC50×100

TTI=TI（A）×A在混劑中所占百分比+TI（B）×B在復配劑中所占百分比

CTC=[混劑實際毒力指數（ATI）/混劑理論毒力指數（TTI）]×100

CTC≥170為明顯增效；120≤CTC<170為略有增效；70≤CTC<120為相加作用；CTC<70為拮抗作用。

2 結果與分析

2.1 殺菌劑單劑對木霉M23的毒力

由表1可知，苯醚甲環唑對木霉M23的抑制作用最強，EC50是0.448 4 mg/L，其次是百菌清，EC50是1.390 8 mg/L，隨后依次為溴菌腈、嘧菌酯、甲基硫菌靈，它們的EC50分別為8.648 3、12.448 1、18.185 6 mg/L，抑菌效果較弱；納他霉素對木霉M23的EC50則為1.551 1 mg/L，抑菌效果明顯。

由于百菌清、多菌靈與苯醚甲環唑的殺菌效果較高，并且與納他霉素的殺菌機理皆不同，所以選擇納他霉素與百菌清、多菌靈與苯醚甲環唑進行后續混配試驗。

2.2 殺菌劑混配對木霉M23的毒力

由表2可知，混配組合B、C、D、E的EC50較低，有較好的抑菌效果；組合A的EC50較大，其抑菌效果較差。組合B、C的共毒系數分別為250.020 0、219.270 0，增效明顯；組合A、D略有增效，組合E有拮抗作用。

由表3可知，混配組合的EC50均較低，抑菌效果均較好；組合E增效明顯，組合D略有增效，組合A、B、C的共毒系數分別是60.826 7、62.680 9、138.236 8，都為拮抗作用。

由表4可知，混配組合的EC50均較低，抑菌效果較好；組合E的共毒系數為189.194 4，明顯增效，組合D略有增效，組合A、B、C都產生拮抗作用，共毒系數分別為51.821 1、90.475 5、87.644 2。

3 結論與討論

該研究采用菌絲生長速率法測定了納他霉素與不同殺菌劑對木霉M23的毒力。結果表明，納他霉素與6種殺菌劑對木霉M23均有一定的殺菌效果，且隨著濃度的升高效果增強，毒力最好的是苯醚甲環唑，其次是多菌靈、百菌清、納他霉素，而溴菌腈、甲基硫菌靈、嘧菌酯對木霉M23的毒力均較差，由于納他霉素對木霉具有較好的殺菌作用，且其本身為較安全的抑菌殺菌劑，所以做進一步的殺菌劑混配篩選試驗。不同殺菌劑室內毒力試驗結果中的斜率越大，表明病原菌對該藥劑反應的靈敏度越高，即殺菌劑的抑菌效果是隨著殺菌劑質量濃度的增加而提高的。結合各供試藥劑的EC50發現：與其他6種殺菌劑相比，木霉M23對納他霉素的敏感性最高，且相對防效也較好，具有很好的應用前景。混配試驗表明，納他霉素與百菌清在B（3∶1）、C（1∶1）混配比例下的增效作用明顯，可作為2種藥劑混配的依據；納他霉素與多菌靈以及納他霉素與苯醚甲環唑在E（1∶6）混配比例下的增效作用明顯，可作為殺菌劑混配的依據。

室內毒力試驗結果表明，與常規農用殺菌劑相比，納他霉素具有良好防效，且與幾種殺菌劑按一定比例混配也具有良好防效，為納他霉素的實際應用提供了借鑒。室內毒力測定是在相對均一的條件下進行的，生產上實際用藥會因環境因素而出現與室內試驗不同的結論，有研究表明多菌靈的室內毒力測定與田間藥效結果存在差別[14]，所以需要進一步試驗對結果室內毒力測定進行驗證。木霉為半知菌亞門真菌，與平菇及其他食用菌品種擔子菌亞門的生長特性有差異，也需進一步對包括平菇在內的其他食用菌品種做進一步的安全性評價。

參考文獻

[1]呂作舟.食用菌栽培學[M].北京：高等教育出版社2006：372.

[2]徐同，鐘靜萍，孟征.木霉在植病生防中的地位[C]//第三屆全國真菌地衣學術討論會學術報告及論文摘要匯編.北京：中國真菌學會，1990：57-61.

[3]徐同.木霉分子生物學研究進展[J].真菌學報，1996，15（2）：143-148.

[4]張紹升，羅佳，林時遲，等.食用菌病蟲害診治圖譜[M].福州：福建科學技術出版社，2004.

[5]祁之秋，王建新，陳長軍，等.現代殺菌劑抗性研究進展[J].農藥，2006（10）：655-659.

[6]劉國镕.研制殺菌劑混劑的基本原則[J].農藥科學與管理，1992（3）：5-10.

[7]PARK M S，BAE K S，YU S H.Molecular and morphological analysis of Trichoderma isolates associated with green mold epidemic of Oyster mushroom in Korea[J].Journal of Huazhong Agricultural University，2004，23（1）：157-164.

[8]劉長令.世界農藥大全：殺菌劑卷[M].北京：化學工業出版社，2005：122-126.

[9]慕立義.植物化學保護研究方法[M].北京：中國農業出版社，1994：76-81.

[10]葉佳，張傳清.葡萄炭疽病菌對甲基硫菌靈、戊唑醇和醚菌酯的敏感性檢測[J].農藥學學報，2012，14（23）：111-114.

[11]邢家華，朱冰春，袁靜，等.新型殺蟲劑氯氟氰蟲酰胺對不同鱗翅目害蟲的毒力和田間防效[J].農藥學學報，2013，15（2）：159-164.

[12]唐啟義，馮明光.實用統計分析及其DPS數據處理系統[M].北京：科學出版社，2007：418-449.

[13]SUN Y P，JOHNSON E R.Analysis of joint action of insecticides against house files[J].Journal of economic entomology，1960，53（5）：887-892.

[14]許文耀，兀旭輝，林成輝.香蕉枯萎病防治劑的篩選[J].福建農林大學學報，2005，34（4）：420-424.