贛產南丹參藥材含量測定研究*

任正宇　王小青　李晶#（燕京理工學院0級化工與制藥　河北三河0650；江西省中醫藥研究院　南昌330046）

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贛產南丹參藥材含量測定研究*

任正宇1王小青2李晶2#
（1燕京理工學院2012級化工與制藥河北三河065201；2江西省中醫藥研究院南昌330046）

摘要：目的：建立南丹參藥材的含量測定方法。方法：色譜條件：色譜柱：Dikma Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸（18∶82）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：225 nm；柱溫：30℃。結果：丹參素鈉在6.2～775 μg/ml范圍內線性關系良好；加樣回收率為101.82%；RSD分別為1.97%。結論：高效液相色譜法（HPLC）操作簡單，重現性好，可用于南丹參藥材的質量控制。

關鍵詞：南丹參；丹參素鈉；丹酚酸B；高效液相色譜法

南丹參為唇形科植物南丹參Salvia bowleyana Dunn.的干燥根及根莖，收載于江西省中藥材標準1996年版和2014年版，歷代本草中少見記載，本品為地方性習慣用藥；南丹參廣泛分布于江西、福建、浙江、湖南等省，均為野生品種，江西為主要分布產區之一[1]。南丹參主要含有總丹參酮、丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、咖啡酸等化學成分[2～5]。其主要水溶性成分丹參素具有多種藥理作用，包括抗炎、抗腫瘤、神經保護、心肌保護、提高免疫力等[6～7]。前期我院僅對該植物中所含丹酚酸B進行了報道[8]，本實驗對其所含丹參素進行含量測定研究，并同時進行了丹酚酸B的測定。現報道如下：

1　儀器與試藥

Waters-1525高效液相色譜儀（美國Waters公司），SimplicityTM個人型超純水系統（Millipore公司），CQ-250超聲波清洗儀（上海船舶電子設備研究所），AG-135電子天平（梅特勒-托利多），AL-204電子天平（梅特勒-托利多）。南丹參藥材：分別來源于江西南昌（2013051301、2013051302、2013061401、2013061402、2013081501）；江西德安（2013051303、2013052201）；江西婺源（2013051401、2013051402）；江西于都（2013060201）。丹參素鈉對照品（含量測定用，批號：110855-200405，中國藥品生物制品檢定所），丹酚酸B對照品（批號：110562-200807，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），其它試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1丹參素鈉的含量測定

2.1.1色譜條件及專屬性的選擇色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：甲醇-0.1%磷酸（18∶82），流速：1 ml/min；經光譜測定，丹參素鈉在225 nm處有最大吸收峰，故測定波長設為225 nm，柱溫：30℃。在此條件下，對照品、供試品在約7min的相同時間有一色譜峰。見圖1。

圖1　丹參素鈉測定光譜圖及色譜圖

2.1.2線性關系的考察精密稱取丹參素鈉對照品7.75 mg，置10 ml容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻（每1 ml含丹參素鈉775 mg）。分別稀釋成以下濃度：775、387.5、155、77.5、46.5、31、12.4、6.2 mg/ml按上述色譜條件測定，將峰面積對濃度進行回歸處理，得回歸方程為：Y=8 173 609X+54 568.5，r=0.999 8（n=6），丹參素鈉對照品在6.2～775 mg/ml范圍內峰面積與進樣量呈良好的線性關系。

2.1.3精密度試驗精密吸取丹參素鈉對照品溶液10 μl，按照精密度試驗要求，連續進樣6次，測定丹參素鈉峰面積值，并經統計學處理，RSD為1.13%。

2.1.4穩定性試驗按照上述測定條件，分別在0、1、2、5、8、12 h，精密吸取南丹參供試品溶液10 μl，注入高效液相色譜儀測定每次進樣的與丹參素鈉相同保留時間的色譜峰峰面積值，經統計學處理，RSD 為1.61%，結果表明：在12 h內供試品溶液中與丹參素鈉相同保留時間的色譜峰峰面積值基本保持不變。

2.1.5重現性試驗取6份南丹參藥材粗粉約2.0 g，精密稱定，分別置具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱重，加熱回流1 h，取出，放冷，再次稱重，以50%甲醇補足減失的重量，混勻，濾過，取續濾液過微孔濾膜（0.45 μm），即得供試品溶液。經測定、計算和統計學處理，6份從樣品的RSD為0.73%，符合重現性試驗要求。

2.1.6加樣回收率試驗取6份已知含量的南丹參藥材粗粉約1.0 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入含丹參素鈉對照品溶液（0.020 318 4 mg/ml）50 ml，稱重，加熱回流1 h，余后同重現性操作，制備各供試品溶液。同法測定并計算回收率，結果見表1，6份回收率測定數據經統計學處理，平均回收率101.82%，RSD=1.97%。

表1　回收率測定結果

2.1.7樣品測定取不同產地的南丹參藥材粗粉約2.0 g，精密稱定，按上述供試品溶液制備方法操作，分別制備各供試品溶液；同上法測定、計算，結果見表2。

表2　不同產地藥材中丹參素鈉的測定結果（n=2）

2.2丹酚酸B的含量測定[8]

2.2.1色譜條件色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相∶甲醇∶乙腈∶1.5%甲酸（17∶15∶68），流速：1 ml/min，檢測波長286 nm，柱溫：30℃。在此條件下，對照品、供試品在約14 min的相同時間有一色譜峰。

2.2.2對照品溶液制備取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 ml含0.14 mg的溶液，即得。

2.2.3樣品測定取不同產地的南丹參藥材粗粉，稱取約0.2 g，精密稱定，分別置50 ml量瓶中，加入50%甲醇至近刻度，超聲提取30 min，取出，放冷，以50%甲醇補足減失的重量，混勻，濾過，取續濾液過微孔濾膜（0.45 μm），即得供試品溶液。同上法測定、計算，結果見表3。

表3　不同產地藥材中丹酚酸B的測定結果（n=2）

3　討論

在丹參素的測定研究中，分別比較了超聲與回流，50%乙醇、乙醇、50%甲醇和甲醇為溶劑，25、50、75 ml不同溶劑用量以及提取1、2、3 h，結果表明，南丹參中丹參素的提取以50%甲醇50 ml回流提取1 h效果最佳。

根據不同產地南丹參藥材中丹參素鈉和丹酚酸B的含量測定結果分析發現，該二種成分均以南昌產地為最高，婺源產地次之，于都產地最低。此外，我們分別比較了同一產地不同采收季節南丹參中兩成分的含量，結果顯示6月采集樣本該兩種成分含量明顯高于5、8月采集樣本的含量，并且5、8月樣本含量無顯著差異，分析可能由于4～5月南丹參處于花期，植株營養趨于地上部分，6～7月其地上部分開始進入枯萎期，此時相應的營養進入地下根部，因而成分集中且較高，而到8月份地上又開始萌發新芽，地下根部的養分再次轉移到地上，從而使相應成分的含量有所下降；這個結論與根莖類藥材采收期“多為秋季采挖”（地上部分枯萎前）相符。但是，由于采樣的局限性，此兩種含量與采收季節相關性還有待進一步研究。

參考文獻

[1]江西省食品藥品監督管理局.江西省中藥材標準(2014年版)[M].上海:上海科技出版社,2014.230

[2]中國醫學科學院藥物研究所.中藥志(第一冊)[M].北京:人民衛生出版社,1959.339

[3]國家中醫藥管理局.中華本草(上冊)[M].上海:上海科學技術出版社,1999.1652

[4]李靜,黎蓮娘,宋萬志.南丹參化學成分研究[J].中草藥,1994,25(7): 347-349

[5]沈建芳,王強,汪紅.南丹參化學成分研究[J].中國野生植物資源, 2006,25(2):55-58

[6]周茂金,蘇美英,劉昌孝.丹參素研究進展[J].中草藥,2003,34(10): 24-25

[7]袁恒杰.丹參素藥理作用研究新進展[J].中國醫院藥學雜志,2006,26 (5):604-606

[8]劉丹,余良忠,文萍.HPLC法測定南丹參中丹酚酸B的含量[J].遼寧中醫雜志,2011,38(9):1872-1873

●綜述與進展●

中圖分類號：R284

文獻標識碼：B

doi:10.13638/j.issn.1671-4040.2016.02.045

*基金項目：江西省青年基金資助項目（編號：20142BAB215065）

#通訊作者：李晶，E-mail：savon@sina.com

收稿日期：（2016-01-09）