特染硼酸亞甲藍法與13C-尿素呼氣試驗法對幽門螺桿菌檢測效果比較

楊小苗，申成香，潘成娜，曹 明，朱燕燕，蔣 艷，懷建國

蕪湖市第一人民醫院 病理科，安徽 蕪湖 241000

幽門螺桿菌(hclicobacter pylori，HP)是革蘭氏陰性菌，形態呈螺旋狀，主要生存于胃部及十二指腸，HP感染與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關淋巴瘤和胃癌等疾病密切相關。有研究報道，根除治療HP可以使胃癌發病風險降低至原來的53%，并同時降低了無癥狀感染者和胃癌切除術后患者的胃癌發生風險[1]。一般認為，胃癌(腸型胃癌為主)的經典病理進展過程為正常胃黏膜→淺表性胃炎→萎縮性胃炎→腸上皮化生→異常增生→胃癌[2]。HP感染是誘發萎縮、腸化生的主要原因。有研究報道，根除HP可部分逆轉萎縮，但難以逆轉腸化生[3]。在胃黏膜萎縮或腸化生前根除HP獲益最大，若已發生胃黏膜萎縮或腸化生者，根除HP可延緩胃黏膜萎縮和腸化生的進展，大大降低胃癌發生的風險[4]。本研究旨在探討應用13C-尿素呼氣試驗(urea breath test，UBT)法及特染硼酸亞甲藍法(以下簡稱特染法)檢測HP的效果。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2020年5—12月蕪湖市第一人民醫院收治的149例患者為研究對象，其中，男性78例，女性71例；年齡24～87歲，平均年齡67.5歲。納入標準：(1)有或無胃部不適等臨床癥狀；(2)行胃鏡檢查前均進行了13C-UBT法檢測HP，胃鏡活檢后標本均進行了特殊染色；(3)均具備良好的語言溝通能力及行為認知能力。排除標準：(1)1個月內使用過抗生素、鉍制劑、質子泵抑制劑等HP敏感藥物；(2)1周內出現過消化道出血癥狀。149例患者均有或無胃部不適等臨床癥狀，病理診斷結果均有不同類型的炎癥表現，其中，75例表現為黏膜慢性炎、活動性炎；23例表現為萎縮性炎及輕、中或重度腸化；15例表現為上皮內瘤變；4例表現為胃癌。本研究經醫院倫理委員會批準。所有患者均對本研究知情同意。

1.2 研究方法

1.2.113C-UBT法 患者空腹或禁食2 h以上，首先，吹滿帶有“服藥前”字樣的氣袋，擰緊蓋帽，即收集0 min呼氣袋；隨后，用50 ml左右的飲用水送服1片13C藥片，靜坐20 min，等待期間不可進食、飲水、抽煙及劇烈運動；然后，20 min后吹滿帶有“服藥后”字樣的氣袋，擰緊蓋帽，即收集20 min呼氣袋；最后，將0 min呼氣袋和20 min呼氣袋與13C呼氣分析儀連接進行檢測。尿素13C片呼氣試驗試劑盒購自北京海德潤醫藥集團有限公司，檢測儀器為北京華源康達13C呼氣分析儀(型號HY-50)，檢測軟件為北京華源康達13C呼氣軟件。

1.2.2 特染法 黏膜組織取樣后放入甲醛標本瓶中保存送至病理科，常規取材、脫水、包埋、切片(4 μm厚度)，脫蠟至水洗，滴加HP特染試劑100 μl硼酸亞甲藍于切片組織上，染色5～10 min(染色時間控制可在顯微鏡下觀察)，蒸餾水沖洗，切片烤干或風干，二甲苯透明，中性樹膠封固，鏡檢。HP特染試劑硼酸亞甲藍購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 診斷標準

1.3.113C-UBT法 C呼氣分析儀通過計算20 min分析值與0 min分析值的比值，即13C-UBT超基準值(delta over baseline，DOB)，DOB≥4‰判定為陽性，DOB<4‰判定為陰性。

1.3.2 特染法 根據顯微鏡(高倍40×)下觀察到有無HP以及量的多少，判斷是否存在HP感染及感染的嚴重程度。HP多散在或簇狀分布于胃黏膜黏液層、表面上皮、小凹上皮和腺管上皮內，藍色，彎曲狀或桿狀。根據我國慢性胃炎診斷標準和新悉尼系統判定HP感染細菌的密度[5-6]：無(-)，特殊染色切片上未見；輕度(+)，偶見或<標本全長1/3，有少量菌體；中度(++)，菌體分布于標本全長的1/3～2/3或連續性，稀疏分布在表面；重度(+++)，菌體成堆存在，基本分布標本全長。高倍(40×)顯微鏡下染色結果圖片見圖1、2。

圖1 HP陰性特染法染色結果(40倍) 圖2 HP陽性特染法染色結果(40倍)

1.3.3 結果判定 內鏡檢查由消化內科醫師進行，根據內鏡下觀察，并鉗取病變部位胃黏膜。病理診斷參照《慢性胃炎及上皮性腫瘤胃黏膜活檢病理診斷共識》[7]，由兩名診斷醫師采用雙盲法獨立判讀。

1.4 統計學方法 采用SPSS 21.0統計學軟件對數據進行處理。計數資料用例(百分率)表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

149例患者中，13C-UBT法檢測HP陽性且特染法檢測HP陰性7例，13C-UBT法檢測HP陰性且特染法檢測HP陽性68例。

2.1 兩種方法檢測HP感染陽性率比較 149例患者中，13C-UBT檢測HP陽性40例，陰性109例，陽性率為26.85%(40/149)；特染法檢測HP陽性101例，陰性48例，陽性率為67.79%(101/149)。特染法陽性檢出率明顯高于13C-UBT方法，組間比較，差異有統計學意義(χ2=48.462，P=0.000)。

2.2 兩種方法在診斷伴有腸化患者中檢測HP感染陽性率比較 在診斷伴有腸化生的64例患者中，13C-UBT檢測HP陽性20例，陰性44例，陽性率為31.25%(20/64)；特染法檢測HP陽性42例，陰性22例，陽性率為65.63%(42/64)。特染法陽性檢出率高于13C-UBT方法，組間比較，差異有統計學意義(χ2=13.795，P=0.000)。

3 討論

HP感染是一種感染性疾病，無論有無癥狀，伴有或無消化性潰瘍以及胃癌[8]，一經感染可能終生攜帶[9]；并且，HP可以在人與人之間傳播，主要是經口傳播[10]。因此，采用合理、有效、準確的HP檢測方法是預防和控制HP感染引起的消化道疾病的強有力的手段。目前，用于檢測HP的方法大致分為兩大類，一類為非侵入性檢測，如UBT(包括13C-UBT和14C-UBT)；另一類為侵入性檢測，如內鏡檢查、病理組織學檢查等。非侵入性檢測方法中臨床較為常用的是UBT，兩種方法中因13C-UBT使用藥劑不含放射性物質而受到廣泛使用；侵入性檢測方法較為常用的是內鏡檢查結合快速尿素酶試驗或病理組織學檢查。《中國慢性胃炎共識意見(2017年,上海)》指出，70%～90%的慢性胃炎患者患有HP感染[5]，慢性胃炎活動性的存在高度提示HP感染[11-12]。本研究結果發現，病理學方法(特染法)的HP陽性檢出率達67.79%，更接近于共識意見中指出的70%～90%的數據。

大多胃癌的發生是由于長期的HP感染，繼而觸發Correa級聯反應，最終發展為惡性腫瘤，HP感染是腸化生的首要致病因素[13]。有研究報道，HP感染者發生腸化生的危險系數較非HP感染者高4.7倍，因此，腸化生的發生可間接反映出感染HP[14]。本研究149例患者中，64例病理診斷伴有腸化生，對其HP感染檢測結果進行比較后發現，病理學方法檢出的陽性率為65.63%，13C-UBT方法檢出的陽性率僅為31.25%。由兩組數據比較可以看出，13C-UBT方法對HP感染陽性的檢出率過低，與“腸化生的發生可間接反映出感染HP”這一觀念并不相符，仍需后續研究進一步驗證。

胃黏膜活檢組織病理學方法檢測HP感染是一種侵入性檢查手段，進行胃黏膜活檢的主要目的是發現病變并明確病變性質，做出準確的病理診斷，從而指導臨床醫師做出精確而有效的治療方案[7]。組織學檢查曾被認為是HP檢查的“金標準”[15]。胃黏膜活檢組織通過病理特殊染色硼酸亞甲藍法染色后，顯微鏡下菌體呈藍色，彎曲或短桿狀分布于黏膜表面上皮或腺腔內，菌體形態清晰，較為直觀，易于觀察；此檢測方法敏感性高，結果準確可靠，切片可永久保存，便于回顧性調閱[16]；染色流程操作簡便、快捷，僅需5～10 min；因此，在HP檢測方面得到大力推廣，為臨床治療提供可靠的依據，可作為胃黏膜活檢判斷HP感染人群的首選方案之一。

13C-UBT方法利用HP的尿素酶活性分解患者服下含13C標記的尿素膠囊，通過特定儀器測出分解產物13C來判斷有無HP感染[17]。13C-UBT方法檢測HP感染是一種非入侵式手段，患者依從性好，具有無創、簡便、快捷等優點，特異性高，可實現較為準確的“全胃”式檢測，避免了HP“灶性”分布而造成的假陰性結果。但有研究報道，UBT試驗檢測值的大小與HP感染的密度有關[6]。本研究結果發現，兩種檢測方法的結果中病理檢查特殊染色方法陽性但13C-UBT方法陰性者68例，回顧查閱這些病歷資料發現，其中，47例病理診斷結果為陽性(+),提示HP輕度感染，此時可能由于細菌含量較少，密度較小，導致分解產物中13C含量不足或接近于臨界值附近，準確性下降，敏感性降低，繼而出現假陰性結果。

本研究結果發現，特染法HP陽性檢出率明顯高于13C-UBT方法，差異有統計學意義(P<0.05)。這提示，病理檢查方法更加直觀、準確，相比13C-UBT方法更勝一籌，具有更高的陽性檢出率；而且，還可以觀察到胃黏膜發生的病理變化，對于其他疾病診斷具有很大的價值[18]。13C-UBT方法作為一種無創的檢查方法，具有安全、快捷、無交叉感染等優點，更容易被患者接受。但此檢查方法也受很多因素的影響，導致出現假陰性或假陽性，如胃膽汁返流、質子泵抑制劑、消炎藥、上消化道出血或吹氣不當等問題造成假陰性結果，消化道中除HP外還存在其他細菌產生的尿素酶[19]，而影響檢測結果造成假陽性。因此，僅針對本研究的兩種檢測方法，可根據受檢者情況而定，采用分流策略[18]。一般常規人群HP感染篩查或根除治療后的復查，可采用無創傷的13C-UBT方法；日常有不適臨床癥狀者或胃惡性腫瘤高危人群，可采用胃鏡檢查結合胃黏膜活檢病理學檢查(常規病理+特殊染色)。HP的多種檢測方法結合使用獲取最可靠的結果是臨床操作中常用的最佳選擇[15，19-20]。

綜上所述， 特染法檢測幽門螺桿菌的效果更優于13C-UBT法。兩種方法同時應用能更加準確地進行幽門螺桿菌的檢測，更有效地指導臨床用藥治療。HP相關疾病應盡早發現，及時治療，定期復查，以控制相關疾病的進一步發展、惡化。