全自動免疫組化儀應用的探討

劉衛蘭，呂會茹，牛小艷（洛陽職業技術學院，河南 洛陽 471000）

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全自動免疫組化儀應用的探討

劉衛蘭，呂會茹，牛小艷
（洛陽職業技術學院，河南 洛陽 471000）

摘 要：文章總結全自動免疫組化儀的使用步驟和維護保養，并且利用全自動免疫組化染色儀對比人工操作，選取臨床工作中淋巴瘤和乳腺癌組織標本各20例進行檢測。檢測結果：全自動免疫組化儀染色強度高，著色均勻，陽性定位準確，背景清晰，基本無邊緣效應。因此得出結論：全自動免疫組化儀具有較成熟和完善的操作步驟，易操作、易掌握；自動免疫組化染色儀可以避免人工操作的錯誤和誤差，免疫組化操作和試劑的標準化強、重復性好、便于玻片歸檔、安全環保，實驗結果更加客觀、更加科學。

關鍵詞：全自動免疫組化儀；人工操作；維護和保養

1 材料與方法

1.1材料

本院使用的是德國Leica Bond-Max全自動免疫組化儀，包含檢測試劑組塊、染色組塊、散裝液體組塊及廢液收集組塊等。每個Bond-Max有3個玻片盤，同時最多可容納30張玻片，而每個玻片盤可獨立執行不同程序；Bond-Max由電腦控制儀器的程序，完全可以滿足工作量超大實驗室的需求。選用本院淋巴瘤和乳腺癌組織標本各20例，分別進行手工及全自動免疫組化儀染色的對比實驗。

2 方法

全自動免疫組化儀的工作方法包括：烤片、脫蠟、抗原修復、阻斷、標記一炕、標記二抗、顯色直到復染，這些都可以由Bond-Max自動完成，真正實現全自動操作。

2.1步驟一

先確認清空有毒廢液容器，實驗試劑放置正確并充足；再啟動 Bond 系統，并進行儀器初始自檢。

2.2步驟二

3.4 腸道菌群與更年期綜合征 更年期綜合征指部分婦女由于卵巢功能衰退或喪失，因性激素波動或急劇減少，引起機體內分泌失調、免疫力低下和植物神經紊亂的癥候群，可導致全身多個系統的病理變化[28]。近年來越來越多研究證明，腸道菌群的改變會引起體內代謝紊亂，且與高級神經精神活動存在密切關系，說明腸道菌群改變可能與更年期的一系列癥候群存在一定關系。郭在清[29]研究結果顯示，更年期綜合征人群腸道雙歧桿菌數量顯著減少，腸桿菌科及腸球菌細菌數量顯著增加，益生菌群與腸桿菌科結構發生改變，可能更年期綜合征人群由于神經內分泌失調等健康狀態的下降，引起腸道有益菌群與腐敗菌比例發生變化，從而引起腸道微生態失調。

選用本院淋巴瘤和乳腺癌組織標本各20例，分別進行手工及全自動免疫組化儀染色的對比，對病例的蠟塊進行切片、裱片，并在烤片箱里進行烤1-2h為宜，抗體滲透組織要求徹底清除石蠟，如果未充分清除，石蠟層將會干擾甚至抑制抗體與抗原的結合［2］；手工染色方法采用Envison兩步法，自動染色方法使用計算機操作程序，將日常使用的指標進行染色流程的編輯設置。［3］

2.3步驟三

在免疫組化染色過程中，抗原性保存完整、不彌散或丟失是實驗成功的重要保證。［4］常用一抗的配制，并且掃描包括二抗、DAB顯色等的試劑盒；將試劑脫蠟液、氯化鈉檸檬酸鈉、CC1細胞預處理液、CC2細胞預處理液等按比例進行調配。

2.4步驟四

在Bond軟件上輸入病例玻片上的詳細信息，主要包括免疫指標、病理號、免疫號等病人信息，再將貼好標簽的玻片放置在玻片架上。

2.5步驟五

先將本次裝有一抗試劑容器的試劑架和二抗組合試劑架，一同安裝在主機操作儀的平臺上，然后設置染色切片數和開始或結束時間，再點擊計算機操作軟件中的“啟動”命令，此后所有染色工作均由機器自動完成。

2.6步驟六

操作完成后，按下“結束”按鈕，取出切片后先用洗潔精清洗，再進行常規脫水、透明、封片等操作。

3 結果

下圖1和2顯示針對乳腺癌的全自動免疫組化儀與人工染色的結果；表1中列出針對淋巴瘤全自動免疫組化儀與人工染色的結果比較（部分值）。

4 討論

4.1檢測手段更加科學

全自動免疫組化染色儀對抗體都設定了科學的染色流程，并具有激光掃描條碼功能，計算機程序自動控制能夠自動識別抗體滴加，使得反應條件都更加準確。這樣就避免了人工操作而可能產生的失誤，如，切片和試劑碼擺放順序的錯誤、抗體滴加錯誤，［5］以及因操作不當而帶來的假陽性、假陰性出現等。

4.2檢測結果更加精確

免疫組化結果的判斷至關重要，一般是先要看陽性內對照的情況，其次要分析陽性染色的部位是否正確，再次要結合HE染色切片確定免疫染色陽性的組織或細胞是否為腫瘤或有意義的組織和細胞。［6］

圖1 乳腺癌ER自動免疫組化儀染色圖

圖2 乳腺癌ER人工染色圖

表1 全自動免疫組化儀與人工染色的鏡下對比結果

上圖和表中顯示了全自動免疫組化儀和人工染色的差別，全自動免疫組化儀有效避免了人工出現的誤差和錯誤，保證了染色結果的均一性和可重復性，染色結果強度高，著色均勻，陽性定位準確，背景清晰，基本無邊緣效應，實驗結果更加客觀、更加科學。

4.3 檢測過程效率高

通過對全自動免疫組化儀的染色時間進行合理設置，可以解決切片數量少的問題、并且節約人力、大大提高了工作效率。例如，使用一種抗體實驗時，為了節省標簽，可以直接指定抗體放置的位置，無須通過機器掃描，節省實驗的時間和步驟。

4.4 檢測過程有記錄

全自動免疫組化儀有完整的操作記錄。每張玻片都有詳細的實驗信息，包含實驗時間，試劑的批次和有效期等。［7］儀器會提醒用戶已經過期的試劑，避免造成的實驗誤差。［8］此外，全自動免疫組化染色儀還可以特殊染色、進行不同的免疫組化方法操作，同時還具有沖洗過程徹底，減少有毒物質對人體損害，可以配套使用打印機，可將廢液集中回收，安全環保等優勢。

5 維護與保養

全自動免疫組化儀的精密性、科學性是其發揮作用的重要保證，日常保養與維護就顯得非常重要。實驗儀器一般需要進行短時日常保養和長時定期維護。

5.1短時日常保養

每天工作結束時后，利用全自動免疫組化的“清洗/清理”程序開啟清洗功能對儀器進行常規清洗。同時用稀釋后的消毒滅菌溶液對各種AFM試劑瓶進行清潔，并在空氣中風干；使用稀釋后的84消毒液對CovertileTM進行消毒，并在下次開始工作前用蒸餾水清洗干凈后風干；使用前，用無絨棉布和醫用酒精清潔玻片染色裝置；可用消毒滅菌液清洗切片托盤，并輕輕擦拭電熱板，［8］使滅菌液存留約15 min后洗去。

5.2長時定期維護

每個月定時用強效清洗劑清洗各種大容器，然后用去離子水漂凈，待容器干燥后重新裝新鮮試劑并將容器放回儀器；此外，全自動免疫組化儀具有每3個月進行全面消毒滅菌的提示，同時要求每6個月（ 或當制片達到一定數量時），需要專業人員進行一次全面維護。

6 總結

近些年來，全自動免疫組化儀在病理診斷中發揮越來越重要的作用。全自動免疫組化儀具有較成熟和完善的操作步驟，易操作、易掌握；對比人工操作，全自動免疫組化儀具有工作效率高，免疫組化操作和免疫組化試劑的標準化強，重復性好、便于玻片歸檔、安全環保，實驗結果的背景清晰、著色均勻、染色結果可靠、基本無邊緣效應、陽性定位準確等優點。

［參考文獻］

［1］ 姜 冰，楊 軍，彭長纓，等.全自動免疫組化染色儀在臨床病理的應用［J］.中國現代醫學雜志，2008，9（18）：2744-2746.

［2］ 林 蓁，田 甜.提高全自動免疫組化儀制片質量的相關細節［J］.臨床與實驗病理學雜志，2012，6（28）：700-702.

［3］ 虞 杰，石偉強.全自動免疫組化儀的應用及影響其染色質量

的因素探討［J］.泰州職業技術學院學報，2011，12（6）：69-71.

［4］ 馬恒輝，周曉軍.提高免疫組化染色質量的相關處理和操作［J］.臨床與實驗病理學雜志，2011，27（7）：760-762.

［5］ 羅小平，胡維維，伍尚金.全自動免疫組化染色儀與人工操作的比較［J］.醫療衛生裝備，2011，28（4）：59-60.

［6］ 王文勇，黃曉峰，王映梅，等.免疫組化技術標準化的探討［J］.細胞與分子免疫學雜志，2011，27（8）：927-929.

［7］ 劉 爽.全自動免疫組化儀的應用體會［J］.中國醫藥指南，2014，12（3）：34-35.

［8］ 禹 樂，郭以河，林明珠，等.Leica Bond-Max全自動免疫組化儀的應用與維護［J］.醫療裝備，2014，27（1）：82-83.

ADiscussio n of Application for Automatic Immunohistoche-mistry Instrument

Liu Weilan， Lv Huiru， Niu Xiaoyan
（Luoyang Vocational&Technical College， Luoyang， 471000，China）

Abstract:Is reviewed in this paper automatic immunohistochemistry instrument using the steps and maintenance， and the use of automatic immune staining instrument compared to the artificial operation， select clinical lymphoma and breast cancer tissues， 20 cases in each were detected. Test results: the whole automatic immunohistochemistry staining intensity is high， the color is even， the positive position is accurate， the background is clear， the basic no edge effect. So we can draw the conclusion: full automatic immunohistochemistry instrument with the maturity and perfect operation procedure， easy to operate， easy to grasp； Auto Immune Histochemistry instrument can avoid artificial operation error， standardization of immunohistochemical operation and reagent， good repeatability， easy to slide archive，safety and environmental protection， experimental results are more objective， more scientific.

key words:automatic immunohistochemistry instrument； manual operation； care and maintenance

作者簡介：劉衛蘭（1979-），女，河南洛陽人，助理實驗師；研究方向：生物與生理教學研究。