血管生成素-2及其受體在子宮內膜異位癥中的表達及臨床意義

高靜

(遼寧中醫(yī)藥大學附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽　110101)

血管生成素-2及其受體在子宮內膜異位癥中的表達及臨床意義

高靜

(遼寧中醫(yī)藥大學附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽110101)

【摘要】目的觀察血管生成素-2(Ang-2)與酪氨酸激酶受體-2(Tie-2)在子宮內膜異位癥(EMs)患者子宮內膜中的表達，探討其在EMs的發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用。方法選取本院2012年1月至2013年12月收治的70例EMs患者為研究組，選取同期70例非EMs患者為對照組，分別取材兩組的內膜組織，應用免疫組織化學染色法測定Ang-2、Tie-2的表達狀況。結果(1) Ang-2主要定位在細胞質中，主要表達于腺上皮細胞與血管內皮細胞，間質細胞中可見少量表達。Tie-2主要定位在腺上皮細胞胞漿中，少數(shù)定位在間質細胞與血管內皮細胞中。(2)研究組患者中Ang-2、Tie-2陽性表達率分別為75.7%和72.9%，顯著高于對照組(分別為42.9%和38.6%)(P<0.05)。Ang-2在EMs患者增殖期的陽性表達率(67.5%)顯著低于分泌期(86.7%)(P<0.05)；Tie-2在EMs患者增殖期的陽性表達率(87.5%)顯著高于分泌期(53.3%)(P<0.05)。結論Ang-2、Tie-2在EMs患者內膜組織中均有較高表達，提示其參與EMs的發(fā)生發(fā)展。

【關鍵詞】子宮內膜異位癥；血管生成素-2；酪氨酸激酶受體-2；表達

Methods： Seventy patients with endometriosis (study group) and 70 patients without endometriosis (control group) were selected in our hospital from Jan 2012 to Dec. 2013. The endometrial tissues were collected for detecting the expression of Ang-2 and Tie-2 by immunohistochemical method.

Results： Ang-2 was mainly localized in the cytoplasm and expressed mainly in epithelial cells and vascular endothelial cells，and slightly expressed in stromal cells. Tie-2 is mainly located in the cytoplasm of epithelial cells，and a few located in the interstitial cells and vascular endothelial cells. The expression rate of Ang-2 and Tie-2 in the study group (75.7% and 72.9% respectively) were significantly higher than those in control group (42.9%，38.6%，respectively) (P<0.05). In the patients with endometriosis，Ang-2 expression rate in proliferative phase (67.5%) was significantly lower than that in secretory phase (86.7%)(P<0.05)，but Tie-2 expression rate in proliferative phase (87.5%) was significantly higher than that in the secretory phase (53.3%)(P<0.05).

Conclusions： Ang-2 and Tie-2 are highly expressed in endometrial tissues of the patients with endometriosis，which suggests that Ang-2 and Tie-2 may be involved in the development of endometriosis.

(JReprodMed2016，25(6)：545-549)

子宮內膜異位癥(EMs)是臨床中常見的婦科疾病，具有較高的發(fā)病率，臨床表現(xiàn)主要為盆腔疼痛、不孕以及月經(jīng)異常等，嚴重影響患者的健康和生活。EMs的發(fā)病機制目前尚不明確，但有研究證實EMs的發(fā)生發(fā)展與血管生成密切相關，異位內膜病灶中的微血管密度明顯高于在位子宮內膜[1]。血管生成素-2(Ang-2)參與血管生成的過程，其通過與內皮細胞特異性酪氨酸激酶受體-2(Tie-2)的結合，促進血管的發(fā)生與生長[2]。本研究重點分析Ang-2與Tie-2在EMs患者異位內膜與在位內膜中的表達，并與非EMs患者正常子宮內膜中的表達情況進行比較，進一步了解二者在EMs發(fā)生發(fā)展過程中作用，以期為該病的診斷與治療提供一定參考。

資料與方法

一、研究對象

選取本院2012年1月至2013年12月收治的70例EMs患者為研究組，選取同期因不孕不育、卵巢囊腫、子宮肌瘤等來我院就診的70例非EMs患者為對照組。

研究組納入標準：符合美國生殖學會制定的EMs診斷標準[3]，且經(jīng)病理檢查證實。排除標準：合并有基礎內分泌疾病、生殖道炎癥和婦科惡性腫瘤以及放置宮內節(jié)育器的患者，手術治療前半年服用過甾體類激素藥物的患者，不同意參與本研究的患者。

本次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，且患者均知情同意，簽署知情同意書。

二、研究方法

研究組患者腹腔鏡手術或開腹手術后經(jīng)病理檢查確診，術中選取子宮異位內膜病灶組織進行取材，并刮宮取材部分在位內膜新鮮組織。對照組患者則是在子宮肌瘤切除術、不孕及卵巢囊腫等手術探查或治療過程中取材正常子宮內膜組織。兩組患者子宮內膜組織取材后，浸泡在10.0%的中性緩沖福爾馬林液中進行固定，固定24 h后進行常規(guī)石蠟包埋和切片處理，制成4.0 μm的石蠟切片，行HE染色。由兩名病理科醫(yī)師在顯微下觀察組織染色情況，依據(jù)美國生殖學會分期標準[3]進行EMs內膜分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期)，并對子宮內膜形態(tài)進行分期[4]：(1)增殖期：月經(jīng)周期第5～14天，卵泡發(fā)育成熟階段，卵泡刺激素作用下子宮內膜及間質細胞呈增生狀態(tài)；(2)分泌期：月經(jīng)周期第15～28天，黃體形成后，在孕激素作用下子宮內膜呈分泌 反應，血管管腔擴張、內膜增厚，分泌糖原。

確定分期后的蠟塊重新切片、貼片，行免疫組織化學染色。Ang-2和Tie-2的免疫組化染色均采用北京中杉金橋生物技術有限公司生產(chǎn)的試劑盒，嚴格按照試劑盒說明書進行操作[5]，并做好詳細的記錄。

三、結果判斷

由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師進行雙盲閱片。免疫組化染色陽性信號為：光學顯微鏡下觀察到黃色或者棕色染色。并依據(jù)陽性細胞所占的百分比和染色情況進行分級。

依據(jù)內膜組織顯色程度進行評分：0分：無任何顯色；1分：顯示為淺黃色或者黃色；2分：顯示為棕黃色；3分：顯示為棕褐色。依據(jù)內膜組織顯色面積比例評分：0分：陽性細胞染色面積在細胞總面積中所占比例<10.0%；1分：陽性細胞面積所占比例為10.1%～25.0%；2分：陽性細胞面積25.1%～50.0%；3分：陽性細胞面積50.1%～75.0%；4分：陽性細胞面積>75.0%。將兩者的乘積作為最終評分[6]，評價其陽性強度：陰性(-)：評分為0分；弱陽性(+)：評分在1～4分之間；陽性(++)：評分為5～8分；強陽性(+++)：評分為9～12分。

各組患者中的陽性表達率=弱陽性+陽性+強陽性患者數(shù)/各組例數(shù)。

四、統(tǒng)計學處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析與處理，計數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

結果

一、兩組患者一般資料比較

研究組患者年齡21～44歲，平均年齡(34.3±4.2)歲；內膜臨床分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例；增殖期40例，分泌期30例；孕次1～4次，平均(1.5±0.2)次。對照組患者年齡20～42歲，平均年齡(33.9±4.7)歲；增殖期38例，分泌期32例；孕次1～5次，平均(1.4±0.2)次。兩組患者的一般資料比較無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。

二、Ang-2和Tie-2在內膜組織中的表達

Ang-2主要定位在細胞質中，主要表達于腺上皮細胞與血管內皮細胞，少數(shù)表達在間質細胞(圖1、2)。Tie-2主要定位在腺上皮細胞胞漿中，少數(shù)定位在間質細胞與血管內皮細胞中(圖3、4)。

研究組患者中Ang-2、Tie-2陽性表達率分別為75.7%、72.9%，顯著高于對照組(分別為42.9%、38.6%)(P<0.05)(表1)。

A：異位內膜；B：在位內膜圖1　Ang-2在EMs患者內膜組織中的陽性表達 (免疫組化 ×400)

圖2　Ang-2在對照組內膜組織中的陽性表達 (免疫組化 ×200)

A：異位內膜；B：在位內膜圖3　Tie-2在EMs患者內膜組織中的陽性表達 (免疫組化 ×400)

圖4　Tie-2在對照組內膜組織中的陽性表達 (免疫組化 ×200)

組 別例數(shù)陰性弱陽性陽性強陽性陽性表達率研究組70 Ang-21718251053(75.7)* Tie-2191923951(72.9)*對照組70 Ang-2401911030(42.9) Tie-2431710027(38.6)

注：與對照組比較，*P<0.05

三、Ang-2和Tie-2在兩組患者內膜增殖期與分泌期的表達

Ang-2在研究組患者增殖期的陽性表達率(67.5%)顯著低于其在分泌期的陽性表達率(86.7%)(P<0.05)；Tie-2在研究組患者增殖期的陽性表達率(87.5%)則顯著高于其在分泌期的陽性表達率(53.3%)(P<0.05)。Ang-2在對照組患者增殖期的陽性表達率(60.5%)顯著高于分泌期(15.6%)(P<0.05)；Tie-2在對照組患者增殖期的陽性表達率(57.9%)亦顯著高于分泌期(18.8%)(P<0.05)(表2)。

表2　Ang-2和Tie-2在兩組患者內膜增殖期

注：與同組分泌期比較，*P<0.05

討論

EMs一般發(fā)生在育齡女性中，且發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增長的趨勢。其病因學說認為異位內膜本身和周圍組織新血管的建立與維持，是子宮內膜異位種植成活和EMs發(fā)生的重要條件，其中，新生血管的形成是EMs發(fā)生的重要環(huán)節(jié)[7-8]。因此，在EMs發(fā)病機制的探討中，血管生成的多種促進因子引起了高度關注。

Ang-2及其受體Tie-2均在血管生成中起到關鍵性的作用，Ang-2在一定的病理環(huán)境下刺激毛細血管增生，并提高其血管通透性，為異位生長的腺上皮細胞提供更好的物質生存基礎，導致血管生成[9-10]。Tie-2主要是維持成熟血管的穩(wěn)定性，并且在整個內皮細胞新生血管化過程中起到重要作用，有研究證實Tie-2的缺乏很容易導致血管生成受阻[11-14]。

本研究結果顯示，Ang-2和Tie-2在EMs患者的子宮內膜組織中異常表達，顯著高于其在非EMs婦女內膜組織中的表達量，提示Ang-2、Tie-2參與了EMs的發(fā)生發(fā)展。由于體內多種因素的影響，Ang-2、Tie-2的表達明顯增加，促進了血管生成的不穩(wěn)定性，使得患者更容易受到其他促血管生成因子的影響，進一步引起病灶組織中的血管生成[15-16]。本研究還對EMs患者內膜增殖期與分泌期Ang-2、Tie-2的陽性表達率進行分析，結果顯示增殖期的Ang-2陽性表達率顯著低于分泌期，而增殖期的Tie-2陽性表達率顯著高于分泌期；對照組患者內膜組織中Ang-2、Tie-2的陽性表達率均是增殖期顯著高于分泌期，提示Ang-2在EMs患者中主要表達于分泌期，Tie-2則主要表達于增殖期，而在非EMs患者女性中Ang-2、Tie-2均主要表達于增殖期。Ang-2主要表達在腺上皮細胞與血管內皮細胞，隨著分泌期子宮內膜明顯增厚，其表達呈現(xiàn)增加的趨勢；Tie-2作為Ang-2的受體，主要表達在腺上皮細胞胞漿中，血管內皮細胞中有少量表達，增殖期子宮內膜組織的血管生成較分泌期更為活躍，因此Tie-2在增殖期表達相對增加。二者可能在體內多種因素的刺激下，Ang-2在分泌期內膜組織中異常高表達，Tie-2則在增殖期異常高表達，從而減少了血管的穩(wěn)定性，導致血管重構，引起EMs的發(fā)生[17-18]。

綜上所述，Ang-2、Tie-2在EMs患者子宮內膜中均有較高表達，提示二者參與EMs的發(fā)生發(fā)展，并可能起到重要作用。但其具體的作用機制和表達通路，尚需要后續(xù)進一步研究探討。

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[編輯：肖曉輝]

Expression of angiopoietin-2 and its receptor in endometriosis

GAO Jing

DepartmentofObstetrics&Gynecology，theFourthAffiliatedHospitalofLiaoningUniversityofTCM，Shenyang110101

【Abstract】Objective： To investigate the expression of angiopoietin-2 (Ang-2) and tyrosine kinase receptor-2 (Tie-2) in endometriosis，and explore its specific role in development of endometriosis.

Key words：Endometriosis；Angiopoiethin-2；Tyrosine kinase receptor-2；Expression

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.06.011

【收稿日期】2015-10-08；【修回日期】2015-11-19

【作者簡介】高靜，女，遼寧人，本科，副主任醫(yī)師，婦科內分泌專業(yè).