影響神經(jīng)元特異性烯醇化酶測(cè)定因素的分析及驗(yàn)證

盧志芳，楊先凱*

（1．徐州民政醫(yī)院，江蘇 徐州 221003；2．徐州市云龍區(qū)天橋社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，江蘇 徐州 221009）

?基礎(chǔ)研究?

影響神經(jīng)元特異性烯醇化酶測(cè)定因素的分析及驗(yàn)證

盧志芳1，楊先凱2*

（1．徐州民政醫(yī)院，江蘇 徐州 221003；2．徐州市云龍區(qū)天橋社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，江蘇 徐州 221009）

目的本文旨在探討影響神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE） 測(cè)定結(jié)果的因素。方法根據(jù)受試者樣本放置時(shí)間，溶血程度，黃疸程度的不同，采用化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定各組NSE水平，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果正常人和3例小細(xì)胞肺癌患者血液標(biāo)本分別放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h，NSE檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；溶血對(duì)NSE的測(cè)定影響很大，且溶血的標(biāo)本中每增加1 g血紅蛋白（Hb）就可測(cè)定出32.45 ng/mL的的NSE；不同濃度的黃疸樣本檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論NSE的測(cè)定受外界因素影響，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，并影響到臨床診療。在實(shí)際工作中，應(yīng)避免溶血，且及時(shí)送檢并分離血清從而提高結(jié)果的準(zhǔn)確性。

神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）；化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)；標(biāo)本；影響因素；

作為烯醇化酶的同工酶，神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）被公認(rèn)是監(jiān)測(cè)小細(xì)胞肺癌的首選標(biāo)志物。另一方面NSE同神經(jīng)損傷所致的許多神經(jīng)性疾病關(guān)系密切[1-2]。由于紅細(xì)胞和血小板中同時(shí)存在著NSE，血細(xì)胞的異常代謝活動(dòng)， 會(huì)導(dǎo)致血清中NSE的成分發(fā)生變化。因此在測(cè)定中，應(yīng)避免外界因素干擾血清中NSE的原有水平，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果[3]。本研究旨在探討影響NSE檢測(cè)的影響因素，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標(biāo)本：健康體檢者30例，男性20例，女性10例，年齡20～40歲，均無(wú)抽煙史，無(wú)基礎(chǔ)病；小細(xì)胞肺癌患者3例，為2016年4～10月確診的我院男性住院患者，年齡45～60歲。自制溶血標(biāo)本：取無(wú)溶血的正常人混合血清標(biāo)本，人工使其溶血后高速離心，取上清備用。自制黃疸標(biāo)本：取無(wú)溶血的正常人混合血清標(biāo)本，人工加入特定含量膽紅素備用。

1.2 試劑與儀器

NSE試劑盒為化學(xué)發(fā)光免疫法，深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司提供；化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定儀器，深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司提供的MAGLUMI 2000。Mek7222k血液分析儀，日本光電公司生產(chǎn)。

1.3 方法

（1）早晨分別采集健康體檢者和肺癌患者空腹靜脈血10 mL，同一標(biāo)本按放置時(shí)間不同分裝四份。按深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作（試劑盒為化學(xué)發(fā)光免疫法）。健康體檢人群與3例小細(xì)胞肺癌患者血清標(biāo)本收集后，分別在放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h后進(jìn)行離心，檢測(cè)。每次、每份標(biāo)本重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算其均值、標(biāo)準(zhǔn)差及進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

（2）將自制的溶血標(biāo)本，再次離心，取上清液用光電Mek-7222k血細(xì)胞分析儀重復(fù)測(cè)定數(shù)次，調(diào)整血紅蛋白含量使其均值為4.0 mg/mL，將其倍比稀釋成1.0，0.25，0.063的4個(gè)梯度。每個(gè)濃度梯度重復(fù)進(jìn)行5次測(cè)定，算出其NSE均值（ng/mL）。再分別計(jì)算出每克Hb的NSE含量（ng/mL），最后以NSE和Hb總量，計(jì)算出總平均每克Hb的NSE含量（ng/mL）。

（3）自制黃疸標(biāo)本，取無(wú)溶血的正常人混合血清標(biāo)本，分成6組，分別加入不同濃度的膽紅素制備成梯度濃度的黃疸血清樣本，40～60 μmol/L組、60～100 μmol/L 組、100～200 μmol/L組、200～300 μmol/L組、300～400μmol/L組、＞400 μmol/L組各20份，進(jìn)行NSE檢測(cè)。

2 結(jié) 果

（1）正常人血清標(biāo)本放置0.5 h，1 h，3 h，5 h后， 檢測(cè)NSE含量。NSE水平最高為放置5 h的樣本，隨著放置時(shí)間的減少NSE明顯降低，其中與0.5 hNSE結(jié)果相比，3 h和5 h差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 正常人血清標(biāo)本放置不同時(shí)間NSE檢測(cè)水平對(duì)比（± s）

表1 正常人血清標(biāo)本放置不同時(shí)間NSE檢測(cè)水平對(duì)比（± s）

放置時(shí)間（h）nNSE（± s，ng/mL）P 0.5307.90±0.59-1 308.15±0.64＞0.05 3 309.74±0.91＜0.05 5 3011.46±1.86＜0.05

（2）小細(xì)胞肺癌患者NSE放置0.5 h，1 h，3 h，5 h測(cè)定結(jié)果及差異顯著性。見(jiàn)表2。

表2 肺癌患者血清標(biāo)本不同放置時(shí)間對(duì)NSE檢測(cè)水平對(duì)比（± s）

表2 肺癌患者血清標(biāo)本不同放置時(shí)間對(duì)NSE檢測(cè)水平對(duì)比（± s）

注：※為與0.5 h組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05

放置時(shí)間（h）患者1患者2患者3 0.520.12±0.9935.09±1.6551.60±2.11 123.23±1.43※38.84±1.18※54.21±3.32※328.76±2.26※43.36±2.23※62.23±3.93※532.53±3.17※49.43±3.77※75.65±4.46※

（3）自制溶血標(biāo)本NSE測(cè)定結(jié)果。見(jiàn)表3。

（4）不同濃度黃疸樣本的NSE檢測(cè)水平對(duì)比 ，結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表4。

表3 自制溶血標(biāo)本NSE測(cè)定結(jié)果

表4 不同濃度黃疸的神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)水平對(duì)比（± s）

表4 不同濃度黃疸的神經(jīng)元特異性烯醇化酶檢測(cè)水平對(duì)比（± s）

濃度（μmol /L）檢測(cè)水平（ ng /ml）混合血清原液7.90±0.59 40～607.87±0.57 60～1007.93±0.61 100～2007.79±0.53 200～3007.83±0.54 300～4007.99±0.51＞4007.89±0.51 P＞0.05

3 討 論

血清NSE是糖酵解通路中的一種肝糖分解酶，是烯醇化酶的一種同工酶，分子量為78 KD。正常存在于神經(jīng)元、周圍神經(jīng)組織和神經(jīng)內(nèi)分泌組織如APUD細(xì)胞系統(tǒng)中[4-7]，在細(xì)胞被破壞時(shí)釋放出來(lái)，可作為APUD腫瘤的特異性腫瘤標(biāo)志物[7]。NSE在神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中呈異常高表達(dá)。小細(xì)胞肺癌也是能夠分泌NSE的APUD腫瘤之一。目前NSE被認(rèn)為是小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤最特異、最敏感的腫瘤標(biāo)志物。同時(shí)研究證實(shí)NSE不但存在于APUD細(xì)胞系中，還存在于APUD瘤細(xì)胞系中，對(duì)NSE進(jìn)行測(cè)定既可以輔助診斷小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤，還可為其療效觀察和預(yù)后評(píng)價(jià)提供依據(jù)，同時(shí)還可對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤、胰島細(xì)胞瘤、黑色素瘤、甲狀腺髓樣癌等提供診斷信息。

正常紅細(xì)胞中也存在較多量的NSE，溶血標(biāo)本會(huì)對(duì)結(jié)果的正常判斷造成干擾[8-9]；由于紅細(xì)胞破裂會(huì)釋放出較多的NSE，因此溶血可引起結(jié)果偏高；同樣血小板中也可釋放NSE，因此，未充分離心的樣本NSE的結(jié)果也會(huì)偏高等[10]。但是紅細(xì)胞內(nèi)含有NSE的量以及溶血會(huì)對(duì)血清NSE測(cè)定結(jié)果造成多大的影響，已經(jīng)達(dá)成共識(shí)[11-12]。研究顯示，每溶解紅細(xì)胞釋放1 g血紅蛋白的量，就可以平均測(cè)定出32.45 ng/mL的NSE，屬假陽(yáng)性結(jié)果。可見(jiàn)NSE實(shí)驗(yàn)結(jié)果受溶血的影響很大；同時(shí)正常人和小細(xì)胞肺癌患者血清標(biāo)本放置一定時(shí)間后再測(cè)定，均會(huì)導(dǎo)致NSE結(jié)果產(chǎn)生差異。而黃疸對(duì)NSE的檢測(cè)結(jié)果不產(chǎn)生影響。

綜上所述，標(biāo)本溶血和標(biāo)本放置過(guò)長(zhǎng)時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果有顯著影響，實(shí)踐中NSE檢測(cè)一定要避免標(biāo)本溶血，靜脈采血盡量一次成功，避免在同一部位反復(fù)穿刺，在采取標(biāo)本后應(yīng)盡量快速送檢并分離血清且應(yīng)立即進(jìn)行測(cè)定。假如不能即刻測(cè)定，也應(yīng)該立即分離血清，置入冰箱冷凍保存?zhèn)洳椤Ｄ康木褪潜M可能避免因標(biāo)本溶血和標(biāo)本久置使紅細(xì)胞中NSE釋放進(jìn)入血清，影響測(cè)定結(jié)果。

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本文編輯：李 豆

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ISSN.2095-6681.2016.34.111.02

楊先凱