隆朋對大鼠不同腦區(qū)5-HT及5-HIAA的影響

劉　鑫，哈　達(dá)，高　利（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030）

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隆朋對大鼠不同腦區(qū)5-HT及5-HIAA的影響

劉鑫，哈達(dá)，高利
（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030）

摘要：研究隆朋對大鼠不同腦區(qū)抑制性單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化影響，探討隆朋麻醉作用機(jī)制。本試驗(yàn)將32只大鼠隨機(jī)分為四組，分別為對照組，麻醉組，恢復(fù)Ⅰ組和恢復(fù)Ⅱ組，使用高效液相色譜法檢測不同麻醉時(shí)期不同腦組織的5-羥色胺（5-HT）和5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）的含量。結(jié)果隆朋作用后，大鼠大腦皮層、海馬和丘腦5-HT和5-HIAA含量分別升高，且差異極顯著。表明這三個(gè)腦區(qū)是隆朋作用腦組織的靶位區(qū)，由此推斷隆朋可以通過促進(jìn)海馬、丘腦和大腦皮層內(nèi)神經(jīng)突觸釋放5-HT和5-HIAA而產(chǎn)生麻醉作用。

關(guān)鍵詞：隆朋；5-羥色胺；5-羥吲哚乙酸

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組成年Wistar純種大鼠32只，體重220±20 g，購自黑龍江省哈爾濱市醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，同一條件下飼養(yǎng)3周后開始試驗(yàn)。隨機(jī)分為對照組、麻醉組、恢復(fù)I組和恢復(fù)Ⅱ組共4個(gè)試驗(yàn)組，每組8只。

1.2試驗(yàn)材料Waters600高效液相色譜系統(tǒng)；色譜柱Diamonsil C18（4.6×200 mm，5 μm）；隆朋；5-羥色胺；5-羥基吲哚乙酸；色譜級甲醇；色譜級乙腈。

1.3腦組織采樣與處理對照組腹腔注射0.005 mL/g生理鹽水溶液，麻醉組腹腔注射0.005 mL/g濃度為40 mg/kg的隆朋。相應(yīng)判斷標(biāo)準(zhǔn)為：麻醉組為進(jìn)入臨床麻醉狀態(tài)；恢復(fù)Ⅰ組為意識恢復(fù)，開始出現(xiàn)翻正反射；恢復(fù)Ⅱ組為翻正反射恢復(fù)6 h后。各組分別在相應(yīng)時(shí)相斷頭冰面上分離大腦皮層、海馬、丘腦、小腦和腦干稱重，將稱重后的腦組織塊充分研磨，將腦組織勻漿液轉(zhuǎn)入離心管中，加0.1 mol/L高氯酸溶液，以10 000 r/min離心15 min。取上清液再以10 000 r/min離心10 min，取上清液用0.1 mol/L高氯酸溶液定容至1 mL，混勻得樣品溶液。

1.4色譜條件色譜柱：Diamonsil C18（4.6×200 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1 mol/L醋酸鈉緩沖鹽（內(nèi)含0.5 mmol/L EDTA-2Na，用HAc調(diào)pH值5.0）（1∶6）；流速：1 mL/min；發(fā)射波長333 nm，激發(fā)波長285 nm；靈敏度1；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20 μL。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。使用SPSS 19數(shù)據(jù)分析軟件系統(tǒng)做單因素方差分析，P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。

表1　隆朋麻醉后大鼠不同腦區(qū)5-HT的含量?。é蘥/g，n=8）

2　結(jié)果與分析

2.1隆朋麻醉對大鼠腦組織5-HT的影響如表1所示，大腦皮層、丘腦和海馬5-HT含量均在麻醉組升高至最高水平，與對照組相比分別升高66.35%，89.25%，83.36%，差異極顯著（P<0.01），并在恢復(fù)Ⅱ期迅速恢復(fù)至正常水平。小腦和腦干5-HT含量與對照組相比，在麻醉期、恢復(fù)Ⅰ期和恢復(fù)Ⅱ期5-HT含量差異均不顯著（P>0.05）。

2.2隆朋麻醉對大鼠腦組織5-HIAA的影響如表2所示，大腦皮層、丘腦和海馬5-HIAA含量均在麻醉組升高至最高水平，與對照組相比分別升高87.94%，85.32%，88.61%，差異顯著（P<0.05），并在恢復(fù)Ⅱ期迅速恢復(fù)至正常水平。小腦和腦干5-HIAA含量與對照組相比，在麻醉期、恢復(fù)Ⅰ期和恢復(fù)Ⅱ期5-HT含量差異均不顯著（P>0.05）。

表2　隆朋麻醉后大鼠不同腦區(qū)5-HIAA的含量（μg/g，n=8）

3　討論

由于血腦屏障的存在，血液中的5-HT很難透過血腦屏障進(jìn)入中樞系統(tǒng)，所以中樞的5-HT是腦內(nèi)合成的，與外周的5-HT不是一個(gè)來源，分屬兩個(gè)功能不同的獨(dú)立系統(tǒng)。全麻藥物的使用會導(dǎo)致腦內(nèi)5-HT含量增多，可能與5-HT是腦內(nèi)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)[5]。α2腎上腺素受體激動(dòng)劑的使用也能使腦內(nèi)5-HT含量增多，這與腦內(nèi)5-HT的受體和α2腎上腺素受體激動(dòng)劑相互作用有關(guān)[6]。大鼠腹腔注射隆朋后，麻醉組大腦皮層內(nèi)5-HT濃度顯著升高，較對照組升高了66.35%；丘腦和海馬內(nèi)5-HT濃度顯著升高，分別較對照組升高了89.25%、83.36.%。小腦和腦干組織中的5-HT變化不明顯。試驗(yàn)結(jié)果與姚尚龍等[7]報(bào)道的異丙酚麻醉對兔大腦皮層、丘腦和海馬5-HT含量的影響相似。推測隆朋激活大腦皮層、丘腦、海馬激活5-HT受體，使Na+/K+交換增加，并伴隨大量Ca2+內(nèi)流，使神經(jīng)元去極化，引起神經(jīng)元興奮性效應(yīng)，從而促進(jìn)5-HT的合成和釋放，產(chǎn)生麻醉作用。

5-HIAA是5-HT在腦內(nèi)的氧化代謝產(chǎn)物，在機(jī)體體內(nèi)5-HIAA隨著5-HT含量的變化呈現(xiàn)一定規(guī)律性的變化。研究表明，全麻藥異丙酚對大腦皮層內(nèi)5-HT的影響與動(dòng)物正常睡眠時(shí)是基本一致的，但是持續(xù)靜脈輸注異丙酚后大鼠感覺皮層內(nèi)5-HT和其代謝產(chǎn)物5-HIAA逐漸升高，停止輸注后又很快降至用藥前的基礎(chǔ)水平[8]。大鼠腹腔注射隆朋后，麻醉組丘腦、大腦皮層和海馬內(nèi)5-HIAA濃度顯著升高，分別較對照組升高了85.32%、87.94%和88.61%，小腦和腦干中的5-HI?AA濃度變化不顯著。陳瑾等[9]通過針刺鎮(zhèn)痛中的5-HT和5-HIAA的含量測定，得出針刺鎮(zhèn)痛刺激腦中5-羥色胺能神經(jīng)元，使中樞神經(jīng)中的5-HT和5-HIAA含量增多，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。大鼠腦組織中的5-HIAA變化與5-HT變化相似，這可能與5-HIAA是5-HT在腦內(nèi)的氧化代謝產(chǎn)物，隆朋影響5-HT含量變化后，導(dǎo)致其氧化代謝產(chǎn)物5-HIAA變化有關(guān)。結(jié)果表明，隆朋能增加這些腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HIAA的含量，從而產(chǎn)生麻醉作用。

4　結(jié)論

隆朋對大腦皮層、丘腦和海馬中5-HT與5-HIAA的合成及分泌有促進(jìn)作用，這3個(gè)腦區(qū)是隆朋發(fā)揮麻醉作用的靶位區(qū)。隆朋通過促進(jìn)大腦皮層、丘腦和海馬內(nèi)神經(jīng)突觸釋放5-HT和5-HI?AA而產(chǎn)生麻醉作用。

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Effects of Xylazineon the5-HT and 5-HIAA contents in different encephalic of rats

LIU Xin，HA Da，GAO Li
（College of Veterinary Medicine，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China）

Abstract：To study the effect of xylazine changes on different brain regions of the inhibitory neurotransmitter in rats，and ex?plore the mechanism of xylazine . 32 rats were randomly divided into control group，maintenance of anesthesia group，recoveryfrom-anesthesia I group，recovery-from-anesthesiaⅡgroup，and the contents of 5-HT and 5-HIAA in different encephalic re?gions in rats were measured by high performance liquid chromatography-fluorescence.The contents of 5-HT and 5-HIAA in cere?brum，hippocampus and thalamus significantly increased.The results indicated that the targets of xylazine in brain were cerebrum，hippocampus and thalamus.In conclusion，xylazine plays an anesthetic role by increasing 5-HT and 5-HIAA releasing in cerebral hippocampus and thalamus.

Key words：Xylazine；5-HT；5-HIAA

中圖分類號：S852.2；S859

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：0529-6005（2016）05-0089-02

收稿日期：2015-03-25

作者簡介：劉鑫（1989-），男，碩士，研究方向?yàn)閯?dòng)物麻醉學(xué)，E-mail：gbf72144288@126.com

通訊作者：高利，E-mail：gaoli43450@163.com

Corresponding author：GAO Li隆朋屬于α2-腎上腺素受體的激動(dòng)劑，具有明顯的麻醉、鎮(zhèn)痛作用。隆朋應(yīng)用于獸醫(yī)麻醉已有幾十年，它因?yàn)橛昧啃?、誘導(dǎo)期短、毒性低、無蓄積作用等特點(diǎn)一直被沿用至今，多種復(fù)合麻醉劑成分中均含有隆朋，因此準(zhǔn)確掌握隆朋的作用機(jī)理和作用效果是當(dāng)前開展復(fù)合麻醉劑研究的必要保證。本試驗(yàn)通過研究隆朋麻醉下，用高效液相色譜法[1-4]，檢測大鼠不同腦區(qū)5-羥色胺（5-HT）和5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）含量的變化，以探討隆朋對中樞麻醉作用的可能機(jī)制。