育肥豬群豬圓環病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

劉　濤，王　瑞，曲哲會，何書海，鐘長銀（信陽農林學院，河南信陽464000；.河南省正陽縣畜牧局，河南正陽463600）

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育肥豬群豬圓環病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

劉濤1，王瑞1，曲哲會1，何書海1，鐘長銀2
（信陽農林學院，河南信陽464000；2.河南省正陽縣畜牧局，河南正陽463600）

豬圓環病毒是動物病毒中最小的一員，研究發現PCV-2型對豬具有致病性，主要感染6～12周齡豬，可引起豬的先天性顫抖和豬斷奶后多系統衰弱綜合征等病型。而大腸桿菌在臨床上主要是一種條件性致病菌，在遇到特殊情況，會產生多種毒素造成機體多種病變特征，其中以仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病最為常見，在育肥豬階段發病較為少見。臨床上引起育肥豬群腹瀉的常見傳染性因素主要是豬增生性回腸炎、溫和性豬瘟。而由圓環病毒與大腸桿菌混合感染引起的育肥豬只腹瀉病例較為少見，近期通過臨床及實驗室工作，筆者確診一例規模化豬場育肥豬圓環病毒與大腸桿菌混合感染病例，現將該案例的診治分析報告如下。

1　發病情況及臨床癥狀

駐馬店市正陽縣一母豬存欄450頭豬場，110～115日齡階段的育肥豬從2014年10月中旬陸續開始出現頑固性腹瀉，拉黃色稀糞，繼而消瘦，衰竭而死，病程一般持續20 d左右。發病率在5%，死亡率在70%。該場在發病期間使用過氟苯尼考、替米考星、楊樹花口服液，但治愈率很低。

2　病理變化

2.1大體病變尸體嚴重營養不良，明顯消瘦，貧血，全身皮膚蒼白，切開皮膚見皮下較干燥，從血管斷端流出少量稀薄而凝固不全的血液。肺臟多膨脹不全、質地變實，腸系膜淋巴結腫大出血，結腸袢淡黃色膠胨樣水腫（見中插彩版圖1）。肝臟淤血、腫大，呈暗紅色，膽汁瘀滯，膽囊萎縮（見中插彩版圖2）。心臟暗紅，外膜血管呈樹枝狀充血，心室擴張，尤以右心室明顯，心尖變鈍、質地較軟。脾臟輕度腫大，因增生而質地堅實，切面干燥、平滑。胃內容物少，并因胃內有膽汁逆流而呈黃色。黏膜腫脹，有點狀出血，黏膜面上覆有較多黏液，呈卡他性炎癥變化，在胃的無腺部與有腺部的交界處可見有小潰瘍。腸黏膜有點狀出血，腸壁淋巴小結腫大。

2.2組織病變淋巴結被膜和實質中的血管充血，淋巴竇擴張，其內充滿單核細胞和其他炎性細胞，并見大量含鐵黃紅素沉積。在單核細胞、淋巴細胞中可檢出嗜堿性胞漿和核內包涵體。腎小管上皮發生嚴重的顆粒變性，部分脫落，腎間質中有大量結締組織增生，伴有大量單核細胞和淋巴細胞浸潤。肝竇內有較多的血液，肝細胞發生輕度的脂肪變性，小葉結締組織增生。脾竇內有大量單核細胞浸潤，脾白髓萎縮，網狀細胞增生。

3　實驗室檢驗

3.1主要試劑引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。動物總RNA快速提取試劑盒，購自上海捷瑞生物工程有限公司；基因組RNA反轉錄試劑盒，購自Thermo公司；2ⅹPower PCR Master Mix，購自北京百泰克生物技術公司；DNA Marker，購自寶生物工程（大連）有限公司。

3.2引物設計與合成根據GenBank已發表的序列，應用PrimerPremier5. 0軟件設計豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬圓環病毒引物。上游引物：5′-CCTGCACCGCGTAGAACTG-3′，下游引物：5′-GCGAAACGCCTGGTAAGC-3′。引物擴增特異性目的片段，出現540 bp大小條帶判斷為PRRSV經典株陽性，出現450 bp大小條帶判斷為PRRSV缺失株陽性。上游引物5′-CTCCCTGGGT?GGTCTAAG-3′，下游引物：5′-GGTTCCTCCACTCCCATTG-3′。出現290 bp大小條帶判斷為CSFV陽性。上游引物：5′-ATGGGCATCGGCGACTACCT-3′；下游引物：5′-GCGAGAAGAGCTGCGAGTGGA-3′。引物擴增特異性目的片段，出現270 bp大小條帶判斷為PRV陽性。上游引物：5′-GTTATGGTATG?GCGGGAGG-3′；下游引物：5′-CCGCTCTGTGCCCTTTGA-3′。引物擴增特異性目的片段，出現189 bp大小條帶判斷為PCV陽性。

3.3細菌分離無菌采集病豬的脾、肝、淋巴結、肺臟及結腸膠胨樣滲出物若干份。無菌操作，分別接種于麥康凱培養基、高鹽瓊脂培養基上，37.5℃，培養24 h。麥康凱培養基上長出粉紅色菌落，高鹽培養基上不生長。涂片、革蘭染色、鏡檢，可見到革蘭陰性短桿菌。

3.4生化試驗革蘭陰性分離菌發酵乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、半乳糖、甘露糖，產酸產氣，發酵木糖，不發酵山梨醇，水解水楊苷。綜合其培養特性鑒定為大腸桿菌。

3.5藥敏試驗用下列藥物進行藥敏試驗，包括恩諾沙星、氧氟沙星、環丙沙星、諾氟沙星、大觀霉素、新霉素、鏈霉素、氨芐青霉素、舒巴坦鈉、丁胺卡那霉素、慶大霉素、強力霉素、林可霉素、阿莫西林、頭孢拉啶、菌必治。藥敏結果顯示菌必治、舒巴坦鈉及恩諾沙星高敏。

圖3　PCR擴增產物的電泳M：DNA分子質量標準；1：PRV PCR產物；2：PCV2 PCR產物；3：CSFV-PRRSV PCR產物

3.6豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒、豬圓環病毒檢測結果。

4　討論

結合臨床、病理變化及實驗室病原檢測工作，顯示該豬場發病豬只感染有圓環病毒及大腸桿菌。

圓環病毒在自然界廣泛存在（Allan和Ellis，2000），據歐美一些國家報道，在一些圓環病毒控制較差的豬場，保育豬和生長豬腸炎的發病率明顯增加，究其原因同飼料中添加抗生素的限制和圓環病毒2型所造成的免疫抑制有關，從而導致腸道病原菌的增殖和危害。常見的病原菌有細胞內勞森菌、密螺旋體、沙門菌等。而此次從發病場分離出來的則是大腸桿菌。

大腸桿菌性腹瀉與病菌、環境條件和宿主因素的相互作用有關。一般認為產志賀毒素大腸桿菌或產vero毒素大腸桿菌可誘發病灶水腫。

本例中病豬膽囊萎縮或膽汁瘀滯，表明膽汁分泌嚴重不足及膽道被阻塞。膽汁對脂肪的消化和吸收具有重要作用。當膽道被阻塞，膽汁不能進入十二指腸時，脂肪的消化和吸收就會發生障礙，可引起脂肪痢。膽鹽能抑制結腸對鈉和水的吸收，如果小腸吸收膽鹽發生障礙，大量膽鹽進入結腸，常引起水瀉。

因此該場對本病的控制應從對因和對癥兩方面入手：（1）對因控制：據了解，該場并未使用圓環疫苗進行免疫接種。從檢測情況看，建議該場今后將圓環疫苗引入免疫程序中，針對圓環病毒的感染，建議在80日齡開始使用七清敗毒顆粒連續用藥10～15 d。結合該場運行時間已超過10年，豬舍老化較為嚴重，建議加強生物安全和飼養管理措施。豬舍應當保持一定程度的清潔衛生，飼養密度適中，嚴禁與早已斷奶的育肥豬混群飼養，同時嚴格把握好原料關，減少或杜絕霉變原料進場。注意對豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬病、氣喘病的疫苗接種，提高群體的免疫水平，減少圓環病毒的發病風險。另可根據藥敏結果，使用阿莫西林含舒巴坦鈉及恩諾沙星聯合用藥；（2）對癥：選用龍膽瀉肝散來疏肝利膽，喂以麩皮粥，或喂給適量的鹽類瀉劑，如芒硝、硫酸鎂等，幫助病豬進行胃腸調理。后期喂以微生態制劑，調節腸道菌群，促進康復。

參考文獻：

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中圖分類號：S858.28

文獻標志碼：B

文章編號：0529-6005（2016）05-0050-02

收稿日期：2015-01-09

基金項目：信陽市科技攻關項目（130017）

作者簡介：劉濤（1979-）男，副教授，碩士，研究方向為規模化豬場疫病控制技術，E-mail：decai178@163.com