氫化可的松致SD大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型研究*

王　凱，劉帥帥，郭起岳，冷　平，蔣芳菲，孫曉生

1.廣州中醫藥大學 基礎醫學院(廣州　510006); 2.劉敏如女科醫系研究院(深圳　518000);3.廣東省醫學實驗動物中心(佛山　528248); 4.成都中醫藥大學(成都 610075); 5.廣州中醫藥大學(廣州　510006)

氫化可的松致SD大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型研究*

王凱1,2，劉帥帥1，郭起岳3，冷平4，蔣芳菲4，孫曉生5△

1.廣州中醫藥大學 基礎醫學院(廣州510006); 2.劉敏如女科醫系研究院(深圳518000);3.廣東省醫學實驗動物中心(佛山528248); 4.成都中醫藥大學(成都 610075); 5.廣州中醫藥大學(廣州510006)

【摘要】目的探討氫化可的松致SD雌性大鼠腎陽虛證卵巢早衰(POF)模型的大體情況、卵巢指數、子宮指數、動情周期紊亂情況、血清生殖激素水平的特征。方法以8～9周齡SPF級成年性成熟雌性SD大鼠(未孕未產)為研究對象，模型組每日上午后下肢肌注氫化可的松32 mg·kg-1·d-1，1次/d，連續12 d，建立腎陽虛證大鼠POF模型，對照組為未注射氫化可的松的雌性SD大鼠。分兩個階段觀察比較在造模結束后第2天、第14天兩組在大鼠體質量、卵巢指數、子宮指數、動情周期、血清生殖激素水平的變化。結果1)模型組大鼠第一階段和第二階段注射氫化可的松后體質量均低于對照組和注射前(P<0.05)，第一階段和第二階段體質量差異無統計學意義(P>0.05)；2)模型組大鼠動情周期紊亂，陰道涂片顯示動情間期持續或延長；3)模型組大鼠第一階段和第二階段注射氫化可的松后卵巢指數均低于對照組和注射前(P<0.05)，第二階段卵巢指數均數低于第一階段(P<0.05)，子宮指數無明顯差異(P>0.05)。4)與對照組和注射前相比，模型組大鼠第一階段和第二階段注射氫化可的松后血清E2下降，FSH、LH升高，FSH/LH升高，差異有統計學意義(P<0.05)；5)與模型組第一階段相比，第二階段血清E2下降，FSH/LH下降，差異有統計學意義(P<0.05)；模型組兩個階段的FSH、LH差異無統計學意義(P>0.05)。結論氫化可的松致大鼠腎陽虛卵巢早衰模型大鼠體質量下降，呈明顯陽虛證型，動情周期紊亂，動情間期延長或持續，卵巢指數降低，在給藥結束后生殖激素異常，且在給藥結束后14 d腎陽虛證持續。

【關鍵詞】氫化可的松；腎陽虛證；卵巢早衰；動情周期；模型

卵巢早衰[1-3](premature ovarian failure,POF)是指女性40歲以前出現絕經或下丘腦性閉經，伴見圍絕期癥狀群，具有高促性腺激素和低雌激素特征的婦科疑難病，是婦科內分泌領域的常見病，占婦女人群的1%～3%，卵巢早衰發病率有逐年上升和年輕化趨勢[4-7]。中醫婦產科中無卵巢早衰病名，但卵巢早衰癥狀與中醫婦產科中不孕癥、閉經、月經過少、血枯、未老經水斷、絕經前后諸癥等臨床表現特點類似，中醫腎陽虛證是上述中醫病、癥臨床常見的病理狀態之一，因此腎陽虛證也是卵巢早衰常見的證型之一。卵巢早衰動物模型國內外報道有很多種，比較常見的有化療藥物如環磷酰胺[8-10]、紫杉醇[11-12]、順鉑[12 ]等致卵巢早衰模型，中藥雷公藤[13-14]也可致卵巢早衰，基因敲除卵巢可致早衰模型[15-16]，其他方法[17-20]如放射線、半乳糖血癥、應激模型、超促排卵模型、高血壓、自然衰老和藥物去勢等可致卵巢早衰模型。國內腎陽虛證造模方法很多，主要分為3大類[21]：藥物干預，手術切除和模擬中醫病因病機。陳英華等[22]研究指出，腎陽虛模型應從一般狀態觀察及試驗檢測、客觀指標、藥物反證,3個大的方面進行診斷；旺建偉等[23]研究認為，中醫證模型具有中醫理論特色，可以分為中醫一般狀態評價和借助現代醫學方法學進行評價。在腎陽虛證藥物造模中，氫化可的松是最早使用[21，23]且公認的造模藥物[24-25]。腎陽虛模型的建立是探討中醫證候實質和中藥藥性實質的基礎，也是現代中醫藥研究的重點，研究西醫的病與中醫證相結合的動物模型，是中西醫結合研究的一種方法探討。目前腎陽虛證卵巢早衰的動物模型報道并不多見，本研究試圖建立氫化可的松致SD雌性大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型，觀察大鼠的大體情況、動情周期、卵巢指數、子宮指數和血清生殖激素等，為臨床治療腎陽虛證卵巢早衰探索實驗基礎。

1材料與方法

1.1材料

實驗動物：SPF級SD雌性大鼠32只，購入體質量200～240 g，年齡8～9周齡，由廣東省醫學實驗動物中心提供，實驗動物使用許可證號SYXK(粵)2013-0002。主要實驗儀器及試劑：氫化可的松注射液，批號1411403-A12，規格20 mL，100 mg，性狀：無色澄明液體，生產單位：國藥集團容生制藥有限公司，購自廣州中山醫藥有限公司；S-3000A電子天平：上海友聲衡器有限公司，感量0.1 g；BS224S電子天平：北京賽多利斯儀器有限公司，感量0.000 1g。自動放免儀：中國科大中佳公司，E2試劑盒，批號20151220，FSH、LH試劑盒，批號20160102，均購自北京北方生物技術研究所。

1.2實驗方法

1.2.1檢疫對購入SD大鼠檢疫3 d。期間每日檢查大鼠1次，如發現不健康大鼠立即剔除，選用健康大鼠進行實驗。

1.2.2飼養動物飼養在廣東省醫學實驗動物中心SPF級動物房，識別方法：采用被毛染色法，使用飽和苦味酸對大鼠進行編號，在大鼠體表不同部位的被毛涂染斑點，以示不同號碼。以大鼠皮膚染色和籠具雙重編號標記識別。動物飼養條件：5～6只/箱， 群養。飼養溫度與相對濕度：20～26 ℃，40%～70%，采用10 h∶14 h晝夜間斷照明；飼養室條件始終保持穩定，以保證實驗結果的可靠性。自由進食飲水，飼料和飲用水均由廣東省醫學實驗動物中心提供。

1.2.3分組對購入SPF級成年性成熟雌性SD大鼠32只(未孕未產)，適應性飼養3 d后，將納入實驗的大鼠隨機分為對照組16只、模型組16只。

1.2.4腎陽虛證POF造模模型組大鼠每日上午后下肢肌注氫化可的松32 mg·kg-1·d-1，1次/d，連續12 d。

1.2.5一般臨床情況觀察觀察記錄大鼠體形、被毛、皮膚、糞便、肌肉張力、步態、精神、呼吸和進食等情況，同時觀察是否出現外生殖器潮濕、陰道口變大、觸之興奮等動情期反應， 1次/d。

1.2.6體質量造模期及給藥期，每5 d稱量大鼠體質量1次，每周測量大鼠攝食量1次。

1.2.7動情周期檢查從氫化可的松注射造模第一天起，每天上午抓取大鼠進行連續陰道涂片，性周期消失或動情間期持續或延長可確定造模成功。涂片在光鏡下觀察，根據陰道細胞形態判斷大鼠動情周期。動情前期：光鏡下以橢圓形有核上皮細胞占多數，白細胞和角質化上皮細胞很少；動情期：以片狀角化上皮細胞為主，白細胞和有核上皮細胞很少，動情后期片狀角質化上皮細胞、有核上皮細胞和白細胞均有，比例無明顯異常；動情間期：白細胞占絕大多數，有核上皮和角質化上皮細胞很少[26]。

1.2.8相關激素檢測于末次肌肉注射后第24 h(第一階段)和第14天(第二階段)，對照組和模型組各隨機抽取8只大鼠進行取材檢測。腹主動脈采血，離心取血清，放射免疫測定血清中E2、FSH和LH水平，計算FSH/LH值，激素檢測委托廣州中醫藥大學核醫學教研室檢測。

1.2.9大鼠子宮指數和卵巢指數測定采血后處死大鼠，取子宮及雙側卵巢，分別稱取濕重后，按以下公式計算：子宮指數=子宮濕重(mg)/體質量(g)×100%；卵巢指數=卵巢濕重(mg)/體質量(g)×100%。

2結果

2.1大鼠的一般情況

模型組大鼠在首日注射氫化可的松1 h后，大部分動物隨即出現精神萎靡、蜷縮、活動減少、嗜睡癥狀，持續注射氫化可的松后，大鼠精神萎靡，蜷縮怕冷癥狀逐漸加重，外觀豎毛、毛無光澤、拱背少動、飲食減少、體質量降低、反應遲鈍、呼吸深遲、肉眼未見外生殖器潮濕、陰道口變大、觸之興奮等動情期反應等。模型組大鼠體質量在造模前與對照組比較，差異無統計學意義(P=0.28)。模型組大鼠在造模期和停止造模后體質量(P<0.001，<0.001，<0.001，<0.001，0.01，0.01)、攝食量(P<0.001，<0.001，0.01，<0.001)均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)(表1、表2)。

表1　各組大鼠體質量的變化±s)

注：與對照組比較，*P<0.05；造模前～停止造模第1天：n=16；停止造模第6天～停止造模第15天：n=8

表2　各組大鼠攝食量的變化±s)

注：與對照組比較，*P<0.05；造模第1周～造模第2周：n=16；停止造模第1周～停止造模第2周：n=8

2.2大鼠動情周期

造模期與停止造模期，模型組大鼠動情周期紊亂數量與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.001，<0.001)(表3)。且模型組大鼠陰道涂片顯示動情間期持續或延長。

表3　各組大鼠動情周期紊亂數比較[n(%)]

注：與對照組比較，*P<0.05；造模期：n=16；停止造模期：n=8

2.3卵巢、子宮系數

停止造模第1天和第15天，模型組大鼠卵巢指數均低于對照組(P=0.01,P<0.001)，差異有統計學意義(P<0.05)；子宮指數(P=0.86,0.69)差異無統計學意義(P>0.05)。停止造模第15天模型組大鼠卵巢指數低于停止造模第1天(P<0.001)，差異有統計學意義(P<0.05)(表4)。

表4　各組大鼠卵巢、子宮指數的變化

注：與對照組比較，*P<0.05；與停止造模第1天模型組比較，#P<0.05

2.4血清激素水平

停止造模第1天和第15天，與對照組比較，模型組大鼠血清E2下降(P<0.001,<0.001)，FSH(P<0.001，0.01)、LH(P=0.02，<0.001)升高，FSH/LH(P=0.01,0.03)升高，差異有統計學意義(P<0.05)。與停止造模第1天模型組比較，停止造模第15天模型組大鼠E2(P=0.03)下降，FSH/LH(P<0.001)下降，差異有統計學意義(P<0.05)；FSH(P=0.17)、LH(P=0.39)差異無統計學意義(P>0.05)(表5)。

表5　各組大鼠血清激素水平的變化±s)

注：與對照組比較,*P<0.05；與停止造模第1天模型組比較,#P<0.05

3討論

卵巢早衰的病因目前尚不明確，據報道[3,27-28]，可能與自身免疫功能異常、遺傳因素、酶缺乏、促性腺激素及其受體異常、代謝異常、感染因素和損傷因素等有關。POF患者因低雌激素水平、卵巢儲備功能下降導致不孕、月經稀發、停經、多汗、煩躁、失眠、抑郁等圍絕期癥狀，嚴重影響婦女生殖能力和生活質量。早衰在《黃帝內經》中早有記載，《素問·陰陽應象大論》：“帝曰：調此二者奈何？岐伯曰：能知七損八益，則二者可調，不知用此，則早衰之節也。年四十陰氣自半也，起居衰也。”《內經》明確提出早衰，并以四十為界，出現升陽之氣與降陰之氣各半。早衰即未老先衰，《內經》提出的早衰，與現代醫學提出的婦女35～40歲出現的停經、卵巢早衰可以相互參照研究，中醫學中的婦女早衰就相當于西醫的卵巢早衰。《素問·上古天真論》指出 “女子七歲，腎氣盛，齒更發長；二七而天癸至……五七，陽明脈衰于上，面皆焦，發始白……七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也”，闡明了月經的產生與調節以腎為主導，并界定“七”(年)為女性生長變化的周期，“八”(年)為男性生長變化的周期，因此，出現早衰的時間對男性而言，應為五八即40歲左右，對女性而言，應為五七即35歲左右，與現代醫學卵巢早衰的主要發病年齡一致。中醫“腎主生殖”，《素問·寶命全形論》說：“人身有形，不離陰陽”。腎的功能核心，在于腎陰腎陽之相對平衡協調，病態主要以偏虛為主。腎的陽陽盛衰關系到沖任二脈的通盛與協調，沖任之本在于腎，天癸的至與竭均與腎氣的盛衰密切相關。

劉敏如[3]主編的中醫婦產科學中新增了卵巢早衰病名，并將脾腎陽虛血瘀證列為第2個證型；在不孕癥中，腎陽虧虛證列為首個證型 ；在絕經前后諸癥中，腎陽虛證為次于腎氣虛、腎陰虛之后的的第3大證型。藤秀香[29]對122名卵巢早衰患者進行證候分析，其中脾腎陽虛證占15.57%。中醫古籍中有諸多關于脾腎陽虛、宮寒不孕的記載，如明代薛已《校注婦人良方·求嗣門》比較全面論述了不孕的病因病機，有子宮虛冷的記載：“竊謂婦人之不孕，亦有因六淫七情之邪，有傷沖任，或宿疾淹留，傳遺臟腑，或子宮虛冷……”，清代陳士鐸在《石室秘錄·卷之五·論子嗣》中認為，“女子不能生子有十病。……十病何為？一胞胎冷也，一脾胃寒也……”。《傅青主女科新解·種子·下部冰冷不孕》[30]記載，“夫寒冰之地，不生草木，重陰之淵，不長魚龍，今胞胎既寒，何能受孕”，指出真火不足，心腎陽虛，胞失溫煦，以致宮寒不能攝精而不孕。羅頌平[31]認為，男女生殖方面的疾患，與臟腑、氣血、精神、環境、飲食等都有關系，但腎虛是主因，并區別其腎陰虛、腎陽虛、腎陰陽兩虛，確診后對證下藥，才可以收到預期效果。由于先天腎氣不足，命門火衰，腎陽虛損不能溫養子宮，令子宮發育不良；陽虛氣血失于溫煦，血行滯澀瘀結，導致先后天不足致精血匱乏，沖任虧虛，陰寒內盛于沖任胞宮，則天癸早竭，宮冷不孕，胞宮失養經水早斷，引起腎-天癸-沖任-子宮生殖軸失調，發生閉經導致不孕。卵巢早衰與肝、脾、腎虛密切相關，可能通過影響下丘腦-垂體-卵巢軸引起卵巢早衰。隨著國家全面實施二孩政策，越來越多35～40歲育齡期婦女有著較強的生育愿意，而不孕癥呈高發趨勢，其中卵巢早衰是其中一個重要因素，因此研究卵巢早衰對防治不孕癥和改善婦女提早出現的圍絕期癥狀、改善生活質量有重要意義。

卵巢分泌的最重要的雌激素是E2，雌激素對卵巢本身的發育是必需的，卵巢生發上皮的功能及卵巢皮質各期卵泡的生長和發育均需要雌激素的存在，顆粒細胞和卵泡膜細胞既是分泌雌激素的部位，其本身也有雌激素受體，并接受雌激素的影響，雌激素可通過下丘腦-垂體前葉，發生正反饋和負反饋作用，間接影響卵巢的形態和功能[32]。卵巢指數也能直接反應卵巢大體功能，卵巢的質量與體積相關，Erdem等[33]研究認為，不孕癥卵巢體積、基礎竇卵泡數與年齡成反比，卵巢早衰患者的卵巢體積和重量，隨著年齡增長而減少，本模型中卵巢重量減少導致卵巢指數降低，說明腎陽虛證大鼠的卵巢重量和形態均發生改變。FSH和LH是垂體分泌的促性腺激素，FSH和LH升高是POF早期指標，基礎FSH/LH值能更敏感反映卵巢儲備，FSH/LH值升高說明卵巢功能下降[1，34]。POF患者卵巢內分泌的雌激素下降，對垂體的負反饋減弱甚至消失，導致FSH和LH升高。卵巢顆粒細胞還分泌兩種抑制素inhibin(抑制素A和抑制素B)，inhibin是卵巢儲備功能的主要標志物[35]，對垂體的FSH合成和分泌有反饋抑制作用，Wu等[36]研究表明，inhibin B與FSH、LH以及FSH/LH呈負相關。在POF患者，由于卵巢功能下降，inhibin分泌減少，從而對FSH分泌的抑制減少，導致FSH的升高比LH升高快，是導致FSH/LH值升高的因素。本實驗中停止造模第1天和第15天，與對照組比較，模型組大鼠血清E2下降，FSH、LH升高，FSH/LH比值升高，差異有統計學意義。模型組停止造模第15天與停止造模第1天相比，大鼠E2下降，FSH/LH比值下降，差異有統計學意義；FSH、LH差異無統計學意義(P>0.05)。說明第一階段腎陽虛證卵巢早衰模型造模成功。第二階段模型持續，可能由于大鼠自我修復能力強，導致FSH/LH比值相對第一階段下降，但FSH、LH均較模型組及對照組升高，也能說明氫化可的松致SD雌性大鼠腎陽虛證卵巢早衰模型成功。

本實驗通過外源性糖皮質激素，使垂體促腎上腺皮質激素釋放抑制，使腎上腺皮質分泌類固醇激素減少，使動物出現一系列耗竭現象，造成腎陽虛證動物模型。給藥后大鼠出現腎陽虛證表現，外觀豎毛、毛無光澤、拱背少動、精神萎靡、嗜睡、蜷縮怕冷、飲食減少、體質量降低、反應遲鈍、呼吸深遲，由于腎陽虛影響正常動情周期，動情間期顯著延長或動情周期消失，故肉眼未見外生殖器潮濕、陰道口變大、觸之興奮等動情期反應。在停藥后第二階段，大鼠攝食量略增多，體質量緩慢增長。

綜上所述，氫化可的松致大鼠腎陽虛卵巢早衰模型大鼠體質量下降，呈明顯陽虛證型，動情周期紊亂，動情間期延長或持續，卵巢指數降低，在給藥結束后生殖激素異常，且在給藥結束后14 d腎陽虛證持續。

參考文獻

[1]喬杰.生育力保護與生殖儲備[M].北京:北京大學醫學出版社,2013:73-74.

[2]龐震苗,易穎,陳凱佳,等.卵巢早衰發病的流行病學調查及可能性預測的數學模型的構建[J].現代中西醫結合雜志,2007,16(28):4257-4258.

[3]劉敏如,譚萬信.中醫婦產科學[M].第二版,北京:人民衛生出版社,2011:426-430,436-439,803-806.

[4]歐思嫻.30～40歲青年婦女卵巢早衰發病率及其知識-態度-行為水平的調查[J].廣東醫學院學報,2014,32(4):565-567.

[5]Coulam CB,Adamson SC,Annegers JF.Incidence of prema-ture ovarian failure[J].Obstet Gynecol, 1986, 67(4): 604-606.

[6]Anasti JN.Premature ovarian failure:an update[J].Fertility and Sterility,1998,70(1):1-15.

[7]畢丹,林秀文,程紅玲,等.卵巢早衰的性激素水平分析及臨床發病率[J].中國婦幼保健,2005,20(19):2568-2569.

[8]張永芳, 馬會明, 王永峰, 等.環磷酰胺所致卵巢早衰大鼠模型的研究[J].寧夏醫科大學學報, 2015, 37(8):874-878.

[9]Meirow D,Lewis H,Nugent D,etal.Subclinical depletion of primordial follicular reserve in mice treated with cyclophosphamide: clinical importance and proposed accurate investigative tool.[J].Hum Reprod, 1999, 14(7): 1903-1907.

[10] 劉慧瑩,任春娥,姜愛芳.兩種造模方法導致大鼠卵巢早衰模型的比較研究[J].中國婦幼保健,2015,30(28):4869-4872.

[11] Gücer F, Balkanli-Kaplan P, Doganay L,etal.Effect of paclitaxel on primordial follicular reserve in mice[J].Fertil Steril, 2001, 76(3): 628-629.

[12] Mehmet SY,Mustafa CT,Aydin OM,etal.Effect of chemotherapy on primordial follicular reserve of rat: An animal model of premature ovarian failure and infertility[J].Australian and New Zealand Journal of Obstetrics and Gynaecology,2004, 44(1): 6-9.

[13] 梁策, 高慧.雷公藤制劑致卵巢早衰的研究進展[J].中華中醫藥雜志, 2015, 30(10):3588-3590.

[14] Hao J,Wang CL.The animal model of premature ovarian failure in rats caused by tripterygium[J].China Mater Child Health,2012,27(12):1866-1870.

[15] Jagarlamudi K, Reddy P, Adhikari D,etal.Genetically modified mouse models for premature ovarian failure (POF)[J].Mol Cell Endocrinol, 2010, 315(1-2): 1-10.

[16] Reddy P,Liu L,Adhikari D,etal.Oocyte-specific deletion of Pten causes premature activation of the primordial follicle pool.[J].Science, 2008,319(5863):611-613.

[17] 許小鳳,談勇.卵巢儲備功能下降及卵巢早衰動物模型研究進展[J].中國實驗動物學報,2008,16(4):309-312.

[18] 張麗娜,鄭錦,劉特,等.卵巢早衰的動物實驗研究進展[J].遼寧中醫雜志,2015,40(3):665-668.

[19] 向瀾,姚廣濤,李瑞霞,等.卵巢功能早衰動物模型建立方法的研究進展[J].中國藥學雜志,2015,50(5)386-389.

[20] 吳倩,秦佳佳,李瑞滿.卵巢早衰動物模型研究進展[J].中醫學報,2014,29(9):1353-1355.

[21] 杜江,李楠,王和鳴.腎虛模型造模方法及相關指標[J].中國組織工程研究與臨床康復,2010,14(50):9433-9436.

[22] 陳英華,歐陽軼強,孫琪,等.腎陽虛證動物模型規范化研究中診斷指標選擇的初步探討[J].中國中醫基礎醫學雜志,2003,9(10):26-30.

[23] 旺建偉,葉虹玉,胥風華,等.中醫動物模型建立的研究進展及思路[J].中醫藥信息,2014,31(4):80-84.

[24] 杜力軍,趙玉男.實驗動物與實驗動物模型[M].北京:中國醫藥科技出版社,2012:479.

[25] 孫敬方.動物實驗方法學[M].北京:人民衛生出版社,2001:490.

[26] 施新猷.現代醫學實驗動物學[M].北京:人民軍醫出版社,1999:331.

[27] Laissue P,Vinci G,Veitia RA,etal.Recent aduances in the study of genes involved in non-syndromic premature ovarian failure[J].Mol Cell Endocrinol, 2008, 282(1-2): 101-111.

[28] Persani L,Rossetti R,Cacciatore C,etal.Genetic defects of ovarian TGF-β-like factors and premature ovarian failure[J].Journal of Endocrinological Investigation, 2011, 34 (3):244-251.

[29] 藤秀香.122名卵巢早衰患者中藥證候分析及致病因素調查[J].中國中醫藥信息雜志, 2008,15(4):18.

[30] 肖進順.傅青主女科新解[M].第三版,北京:學苑出版社,2007,131-133.

[31] 羅頌平.中國百年名中醫臨床家叢書.婦科專家卷.羅元愷[M].第二版,北京:中國中醫藥出版社,2012:147-149.

[32] 李力,喬杰.實用生殖醫學[M].北京:人民衛生出版社, 2012:50-53.

[33] Erdem M, Erdem A, Biberoglu K,etal.Age-related changes in ovarian volume, antral follicle counts and basal follicle stimulating hormone levels: comparison between fertile and infertile women[J].Gynecol Endocrinol, 2003, 17(3): 199-205.

[34] Shrim A, Elizur SE, Seidman DS,etal.Elevated day 3 FSH/LH ratio due to low LH concentrations predicts reduced ovarian response[J].Reprod Biomed Online, 2006, 12(4): 418-422.

[35] 張文杰,馮玉昆,楊曉花.卵泡液中Inhibin B與IVF-ET的相關性[J].中國優生與遺傳雜志,2010,18(8):103-104.

[36] Wu RR, Liao YC, Ye Y,etal.Usefulness of serum inhibin B measurement for evaluation of ovarian reserve in controlled ovarian hyperstimulation[J].Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi, 2005, 40(10): 679-681.

Study on Premature Ovarian Failure Model Induced by Hydrocortisone in SD Rats with Kidney Yang Deficiency Pattern

WangKai1,2,LiuShuaishuai1,GuoQiyue3,LengPing4,JiangFangfei4,SunXiaosheng5△.

1.CollegeofBasicMedicalSciences,GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510006,China; 2.InstituteofLiuMinru′GynecologicalofTraditionalChineseMedicine,Shenzhen518000,China;3.GuangdongMedicalLaboratoryAnimalCenter,Guangzhou528248,China; 4.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610075,China; 5.GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510006,China

【Abstract】ObjectivesTo explore the general situation, ovary index, uterus index, estrous cycle disturbance, and serum reproductive hormone in premature ovarian failure (POF) model induced by hydrocortisone in SD rats with kidney yang deficiency pattern. MethodsSPF sexually matured adult SD rats (8-9 weeks old, not pregnant) were recruited and divided into model and control groups. Hydrocortisone (32 mg/kg per day, for twelve days) was injected in SD rats in model group to construct POF model and SD rats in control group received nothing. After injection, the body weight, ovary index, uterus index, estrous cycle and serum reproductive hormone were compared in two phases (the second and fourteenth days respectively) after the finishing of model construction. Results1) After two phases of injection, the body weight in the model group was lower than that of the control group as well as before injection (P<0.05), there was no significant difference in body weight between the two phases (P>0.05); 2) There was disturbance in estrous cycle in the model group and vaginal smear showed the estrus was maintained or prolonged; 3) The ovary index in the model group was lower than that of the control group as well as before injection (P<0.05), the ovary index in the first phase was lower than that of the second phase (P<0.05). There was no significant difference in uterus index (P>0.05); 4) Compared with the control group and before injection, the concentration of serum E2 decreased, FSH and LH increased, FSH/LH increased, the differences were statistically significant (P<0.05). 5) Compared with the first phase in the model group, the concentration of serum E2 and FSH/LH decreased in the second phase (P<0.05), there was no significant difference in FSH and LH between the two phases in the model group(P>0.05). ConclusionHydrocortisone could cause estrous cycle disturbance, estrus extension, ovary index reduction, reproductive hormone abnormality, and the kidney yang deficiency pattern remained after fourteen days of injection.

【Key words】Hydrocortisone; Kidney yang deficiency pattern; Premature ovarian vailure; Estrous cycle；Model

doi:10.3969/j.issn.1674-2257.2016.01.003

*基金項目：廣東省教育部產學研結合基金項目(No:2012B091100485)

通信作者：△孫曉生，E-mail：sunxiaosheng@gzucm.edu.cn

【中圖分類號】R-332

【文獻標志碼】A

網絡出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20160221.2008.012.html

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