廣西產拳卷地錢中農藥殘留檢測

王躍峰 牛思琪 笪舫芳 王 劍 朱 華*

1.成都中醫藥大學,四川 成都 610075; 2.廣西民族大學,廣西 南寧 530006;3.廣西中醫藥大學,廣西 南寧 530200

中藥材是人們用以防病、治病的特殊商品，因其具有療效獨特、資源豐富、不良反應少等優勢[1]，在國內外掀起了綠色消費熱潮。為滿足日益增長的市場需求，中藥材開始像水稻、蔬菜等農作物一樣，進行農業化人工種植[2]。大面積種植中藥材易造成病蟲害相互傳染，且栽培過程中藥農嚴重依賴具有高效、速效、經濟等特點的化學農藥，而過量施用農藥或施用農藥不當致使中藥材農藥殘留量超標，不僅影響藥材療效，甚至會直接危害人體健康。隨著中藥被檢出重金屬和農殘等安全限量超標的報道頻頻出現，中藥材及其制劑的質量安全受到質疑，嚴重制約了中藥材及其產品走向國際舞臺[3-5]。

為進一步加強中藥材的質量控制，增加中藥的安全性指標，在2015年版《中國藥典》的基礎上，經國家藥典委員會組織有關單位和專家對黃曲霉毒素、重金屬及有害元素、農藥殘留量等有害物質的控制方法、限度值以及重點品種進行了試驗研究[6-8]。《中國藥典》收載的人參、西洋參藥材及其飲片品種項下增加“農藥殘留量”部分檢查項目，限度為“含總六六六( δ-BHC、γ-BHC、β-BHC、α-BHC 之和)不得過0.2 mg /kg；總滴滴涕(op′-DDT、 pp′-DDE、pp′-DDT、pp′-DDD之和)不得過0.2 mg /kg；五氯硝基苯不得過0.1 mg /kg”。

廣西產拳卷地錢來源為地錢科地錢屬植物拳卷地錢(MarchantiaconvolutaGao et Chang)，為廣西民間常用中草藥之一。其始載于《西藏苔蘚植物志》，廣泛分布在西藏、廣西、貴州等高寒山區[9]，是苔蘚植物中常見的中草藥之一，常用其外治燙傷骨折、體癬、瘡病不斂，內治黃疸性肝炎，獲得了較好的療效[10-11]。近年來，我國對中藥中農殘的研究報道屢見不鮮，農殘檢測主要采用氣相(GC)、高效液相(HPLC)、氣相-質譜聯用(GC-MS)等檢測方法[12-15]。筆者就拳卷地錢中總六六六( δ-BHC、γ-BHC、β-BHC、α-BHC 之和)、總滴滴涕(op′-DDT、 pp′-DDE、pp′-DDT、pp′-DDD之和)和五氯硝基苯9種有機氯農殘進行測定，為控制拳卷地錢安全限量提供實驗數據，以期為開發利用拳卷地錢藥材資源提供安全性保障。

1 儀器與材料

1.1 藥材來源 拳卷地錢采集于廣西南寧市高峰林場，經生藥學專家韋松基教授教授鑒定為地錢科地錢屬植物拳卷地錢(MarchantiaconvolutaGao et Chang)。

1.2 農藥標準品 α-六六六標準品、β-六六六標準品、γ-六六六標準品、δ-六六六標準品、P-P’-滴滴涕標準品、P-P’-滴滴滴標準品、P-P’-滴滴伊標準品、O-P’-滴滴涕標準品、純度≥99.99%；

1.3 試劑 石油醚、苯、丙酮、乙酸乙酯、無水硫酸鈉、正己烷等試劑均為分析純；40g/L氯化鈉水溶液；弗羅里硅土：層析用，于620℃灼燒4 h后備用，用前140℃烘2 h，趁熱加5%水滅活。

1.4 儀器 氣相色譜儀(ECD檢測器)；旋轉蒸發儀；電動振蕩器；高速離心機；200 g小型粉碎機；組織搗碎機；10 μL微量注射器：髙速分散器；硅鎂吸附劑預處理小柱。

2 方法與結果

2.1 有機氯農藥多種殘留量的測定

2.1.1 試樣制備 取所采集的干燥拳卷地錢經粉碎機粉碎，過20目篩制成試樣。

2.1.2 提取 稱取10 g試樣(精確到0.00 lg)，加入100 mL三角瓶，加入20 mL石油醚，于振蕩器上振搖0.5 h。凈化：①層析柱的制備:玻璃層析柱中先加入1 cm高無水硫酸鈉，再加入5 g 5%水脫活弗羅里硅土，最后加入1 cm高無水硫酸鈉，輕輕敲實，用20 mL石油醚淋洗凈化柱。②凈化與濃縮：吸取試樣2 mL，用100 mL石油醚-乙酸乙酯(95∶5)洗脫，收集洗脫液于蒸餾瓶中，于旋轉蒸發儀上濃縮近干，石油醚少量多次溶解殘渣，定容至1.0 mL，供氣相色譜分析。

2.1.3 測定

2.1.3.1 氣相色譜參考條件 色譜柱：石英彈性毛細管柱，0.25 mm(內徑)×15 m；氣體流速：氮氣40 mL/min，尾吹氣60 mL/min，分流比1∶50；溫度：180℃升至230℃，30 min；檢測器、進樣口溫度250℃。

2.1.3.2 色譜分析 吸取1 μL試樣液注入氣相色譜儀，記錄色譜峰的保留時間和峰高。再吸取1μL混合標準使用液進樣，記錄色譜峰的保留時間和峰高。根據組分在色譜上的出峰時間與標準組分比較定性；用外標法與標準組分比較定量。

2.2 五氯硝基苯殘留量的測定

2.2.1 標準品制備 五氯硝基苯標準貯備液和中間液:準確稱取五氯硝基苯0.0100 g，用正己烷溶解，100 mL容量瓶定容，濃度為100 μg/mL；供試液，稀釋100倍，標準中間液濃度：1 μg/mL。五氯硝基苯標準使用液:取中間液配制成：0.005、0.010、0.050、0.100、0.150 μg/mL系列標準使用液。載體：Chromsorb W AW 80～100目。固定液:OV-17 和 QF-1。

2.2.2 提取 稱取經粉碎過40目篩的試樣5.0 g置于50 mL離心管中，加20 mL正己烷，高速分散器 (10000 r/min)分散4 min，離心(2000 r/min)5 min，將提取液移入25mL容最瓶中，向離心管中加5 mL正己炫，按上法再提取一遍，將提取液合并，定容至25.0 mL。

2.2.3 凈化預處理 柱的凈化：1 mL丙酮-正己烷(1+9)分兩次淋洗，再用1 mL正己烷淋洗。將提取液5 mL過柱，K-D濃縮器集于液體收，丙酮-正己烷(1+9)3mL淋洗，淋洗液并入上述K-D濃縮器，吹氮氣濃縮至1mL，備用。2.2.4 氣相色譜參考條件 進樣口溫度：23℃；檢測器溫度：230℃；柱箱溫度：190℃；載氣(N2)流速：50 mL/min；色譜柱：內徑3 mm，柱長1.5 m，玻璃柱，內裝涂以1.5%OV-17+2%QF-l固定液，載體為80～100目Chromsorb W AW。

2.2.5 測定 五氯硝基苯標準使用液、試樣各1 μL注入氣相色譜儀，測定，計算五氯硝基苯的含量。檢測結果見表1。

表1 廣西產拳卷地錢中9種有機氯農藥殘留檢測結果

3 討論

由于農藥品種繁多，性質各異，近幾年其檢測技術主要是色譜法，其中以氣相色譜應用最為廣泛。該法檢測靈敏度高、簡便快捷、分離效果好，可作為拳卷地錢農殘安全限量監測及質量控制的有效手段。筆者采用氣相色譜法對9種有機氯進行測定，結果為總六六六( α-BHC、β-BHC、γ-BHC、 δ-BHC之和)未檢出；總滴滴涕( pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT 之和)未檢出；五氯硝基苯未檢出。參考《中國藥典》收載的人參、西洋參藥材及其飲片品種項下“農藥殘留量”“檢查限度”含總六六六( α-BHC、β-BHC、γ-BHC、 δ-BHC之和)不得過0.2 mg /kg；總滴滴涕( pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT 之和)不得過0.2 mg /kg；五氯硝基苯不得過0.1 mg /kg，可見9種有機氯農殘檢出結果均合格。

拳卷地錢采于廣西南寧高峰林場，為南寧市近郊，但其為野生藥材，與農作物交集較少，生長在較天然環境下，故農殘含量結果未檢出說明其生長環境農藥污染不明顯。

[1]Zhang BG,Yong P,Zhao Z,et al. GAP production of TCMherbs in China[J].Planta Med,2010(76):1948.

[2]楊銀慧,豆小文,孔維軍,等. 我國中藥材中農藥登記現狀及污染分析[J]. 中國中藥雜志,2013(24):4238-4245.

[3]張鵬,李西文,董林林,等. 植物源農藥研發及中藥材生產中的應用現狀[J]. 中國中藥雜志,2016,41(19):3579-3586.

[4]康傳志,郭蘭萍,周濤,等. 中藥材農殘研究現狀的探討[J]. 中國中藥雜志,2016,41(2):155-159.

[5]孔令軍,張婭婷,谷令彪,等. 中藥材農藥殘留的研究進展[J]. 中國實驗方劑學雜志,2015,21(21):231-234.

[6]國家藥典委員會.關于中藥中重金屬、農殘、黃曲霉毒素等物質限量標準草案的公示[J]. 中國藥品標準,2013,14(1):51.

[7]李.國家藥典委員會發布中藥重金屬、農殘、黃曲霉毒素等的限量標準草案[J]. 化學分析計量,2013,22(1):10.

[8]本刊通訊員.《中華人民共和國藥典》擬增中藥重金屬等限量標準[J]. 中國中醫藥信息雜志,2013,20(1):5.

[9]中國科學院青藏高原綜合科學考察隊.西藏苔蘚植物志[M].北京: 科學出版社,1985: 553.

[10]朱華.廣西地錢屬藥用植物資源調查和形態構造研究[A].中國中醫藥學會編,第7屆全國中藥標本館專業學術討論會論文集[C]//成都:成都中醫藥大學,2002:161.

[11]Zinsmeister HD.苔蘚植物是生物活性物質的一個資源[J].國外醫藥(植物藥分冊),1994,9(5):203 .

[12] 萬益群,李艷霞.氣相色譜-質譜法同時測定中藥中有機磷和有機氮農藥殘留量[J].分析測試學報,2005,24(3):90-94.

[13]沈燕,許文祥. 氣相色譜法測定部分中藥中有機氯類農藥殘留量[J]. 中成藥,2006，28(3):406-408.

[14]梁秋平,梁燕云,郭結曉,等. GC-ECD測定中藥何首烏、梔子有機氯農藥殘留量[J]. 北方藥學,2013，10(8):8-9.

[15]劉洪波. 氣質聯用測定杭白菊等3種中藥中5種擬除蟲菊酯類農藥殘留[J]. 浙江農林大學學報,2015,32(1):110-115.