酶聯免疫法測抗-HCV-IgG的S/CO比值與HCV-RNA及肝功能的相關性研究

陸紹花　李　婭

1.云南省廣南縣人民醫院檢驗科，云南　廣南　663300;2.昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科，云南　昆明　650032

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酶聯免疫法測抗-HCV-IgG的S/CO比值與HCV-RNA及肝功能的相關性研究

陸紹花1李婭2

1.云南省廣南縣人民醫院檢驗科，云南廣南663300;2.昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科，云南昆明650032

【摘要】目的：探討酶聯免疫法(ELISA)檢測抗-HCV-IgG水平與實時熒光定量PCR檢測HCV-RNA載量及肝功能ALT、AST、TBIL之間的相關性。方法：選取酶聯免疫法(ELISA)檢測抗-HCV-IgG 有反應的標本186例,使用熒光定量PCR檢測HCV-RNA、生化分析儀檢測ALT、AST等肝功能指標。結果：熒光定量PCR檢測的HCV-RNA陽性140例，陰性46例，陽性率75.27%。HCV-RNA定量檢測陽性(HCV-RNA載量>1.0×103IU/ml)的140例患者ALT陽性率達65%，AST陽性率達57.85%, TBIL陽性率達37.14%；46例HCV-RNA定量檢測陰性患者ALT陽性率達36.96%，AST陽性率達36.96%, TBIL異常率達39.13%。HCV-RNA定量檢測陽性組患者ALT、AST陽性率明顯高于陰性組(P<0.05)。HCV-RNA 陽性率與ELISA 法的S/CO 值呈正相關(R=0.40,P<0.05)。結論：HCV-RNA 陽性率與ELISA法的S/CO 比值呈正相關，可根據S/CO 比值預測HCV-RNA 的結果，進而初步預測患者肝功能狀況，為丙肝診斷和治療提供可靠依據。

【關鍵詞】抗-HCV-IgG ；酶聯免疫法；聚合酶鏈反應；肝功能

丙型肝炎病毒(HCV)感染是一個世界性的健康問題，主要通過血液系統傳播。WHO估計全世界HCV 感染率約為3.0%，大約有1.7億人被感染，而我國HCV 感染者約4000 萬至6000 萬人[1]，60%～80%HCV 感染者會出現慢性化發展，若不及時診治，容易發展為肝硬化、肝癌[2]，因此，及時檢測相關指標，及時開展診斷和治療至關重要。本文對ELISA法檢測抗-HCV-IgG有反應的標本進行實時熒光定量PCR 檢測，旨在分析HCV-RNA 病毒載量、肝功能指標與抗-HCV-IgG的關聯性，為指導臨床工作提供支持。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年11月至2014年11月昆明醫科大學第一附屬醫院門診及住院HCV患者186例，其中男116例，女70例，年齡0～88歲，平均年齡(49.50±8.95)歲。所有患者符合HCV診斷標準[3]。排除其他類型肝炎患者，及存在其他可引起肝功能異常疾病的患者。1.2方法在無菌條件下抽取患者靜脈血5ml，使用TECAN全自動酶免一體機全程檢測抗-HCV-IgG水平，當樣品OD值/CO值(即S/CO值) ≥0.14 為抗-HCV-IgG有反應；使用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應技術進行HCV-RNA檢測，HCV-RNA 定量檢測試劑盒由中山大學達安基因股份有限公司提供，儀器為ABI7300，每次實驗均設置臨界陽性、陰性對照，定量標準品和質控，HCV-RNA檢測的線性反應范圍為1.0×103～5.0×107IU/ml，檢測下限為1.0×103IU/ml。使用羅氏全自動生化分析儀及原裝配套校準物、質控品和試劑檢測肝功能，其中：ALT>35 IU/L為異常，ASTT>40IU/L為異常，TBIL>17.1umol/L為異常。操作人員嚴格按照說明書進行上述檢測。

2結果

2.1熒光定量PCR 檢測結果186 例ELISA 法-HCV-IgG檢測有反應的標本中，共檢測出HCV-RNA 陽性標本140 例，陰性46 例，陽性率為75.27 %，其中：116 例男性患者檢出陽性92例，陽性率79.31%，70 例女性患者檢出陽性48例，陽性率為68.57%，男女之間的HCV-RNA 陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

表1　男女患者HCV-RNA陽性結果比較　(例)

2.2抗-HCV-IgG不同S/CO 值區間與HCV-RNA陽性率的關系ELISA 法測抗-HCV-IgG初篩試驗S/CO 比值分別在0.140-2.000、2.001-3.000、3.001-4.000、>4.001 區間時，HCV-RNA 陽性例數分別為11(64.71%)、24(68.57%)、21(70.00%)、84 (100.00%)，抗-HCV-IgG的S/CO 不同區間的HCV-RNA 陽性率比較，差異明顯具有統計學意義(P<0.05)。HCV-RNA 陽性率與ELISA 法的S/CO 值呈正相關(R=0.40,P<0.05)。詳見表2。另外，有20例S/CO 值>4.000，但是HCV-RNA 低于下限值，經查閱病歷后證實該部分患者均使用干擾素治療后導致病毒載量降低到HCV-RNA檢測下限以下。繼續對30例S/CO值在3.001-4.000區間的樣本進行分析發現，ELISA 法檢測抗-HCV-IgG初篩試驗S/CO 比值>3.701的患者HCV-RNA的陽性率為100%。詳見表3。

表2　抗-HCV-IgG不同S/CO比值區間與HCV-RNA陽性率比較　[例(%)]

注：與前3個區間陽性率比較，★P<0.05。

表3　30例S/CO值在3.001-4.000區間與HCV-RNA陰陽性比較

2.3HCV-RNA定量檢測結果與肝功能相關分析對186例患者進行肝功能檢測發現，HCV-RNA定量檢測陽性(HCV-RNA載量>1.0×103IU/ml)的140例患者ALT陽性率達65%，AST陽性率達57.85%, TBIL陽性率達37.14%；46例HCV-RNA定量檢測陰性患者ALT陽性率達36.96%，AST陽性率達36.96%, TBIL陽性率達39.13%。兩組比較，HCV-RNA定量檢測陽性組患者ALT、AST陽性率明顯高于陰性組，差異明顯有統計學意義。詳見表4。

表4　HCV-RNA定量檢測結果與肝功能相關性　[例(%)]

注：與陰性組比較，*P<0.05。

3討論

中國HCV 的感染率約為3.2 %[4]，HCV 感染后可導致肝臟慢性炎癥，是造成肝硬化和肝癌的主要因素[5]，且治療費用高，療程較長，但療效卻不理想，現階段尚無特異性疫苗對其進行有效防治，主要依靠檢測抗-HCV-IgG 和HCV-RNA來診斷[6]。

目前對于HCV感染的臨床診斷仍以檢測抗-HCV-IgG為主，ELISA法因其靈敏度高、操作簡單、重復性好等優點近年來已經成為國內外各大型醫院檢測抗-HCV-IgG的主要檢測方法[7]。但抗-HCV-IgG 不是保護性抗體，其陽性僅表示患者既往感染或現癥感染[8]。HCV-RNA陽性是HCV感染的直接依據，已成為診斷HCV 感染的“金標準”，可以作為臨床選擇抗病毒治療和監測療效的依據[9]。但由于PCR操作復雜，受較多影響因素制約，很多大型醫院未開展。

本文研究發現HCV-RNA 陽性的比例隨著ELISA 法抗-HCV-IgG篩檢陽性的S/CO 值的升高而增加。對抗-HCV -IgG篩查有反應的標本，目前國內大多醫院沒有開展HCV-RNA確診試驗便報告陽性結果，常引起不必要的糾紛[10]。本研究發現S/CO>3.701的患者HCV-RNA的陽性率為100.00%，因此，建議ELISA 法抗-HCV-IgG S/CO>3.701者，直接檢測HCV-RNA，檢測是否有病毒復制及決定是否進行抗病毒治療。根據ELISA 法篩查抗-HCV-IgG結果的S/CO 值預測HCV-RNA 結果對臨床醫生給患者合理解釋檢測結果和進一步的檢查建議有重要的指導意義。但值得注意的是，本研究發現20例S/CO 值>4.000的患者，其HCV-RNA載量低于檢測下限值，提示干擾素能有效抑制患者血清中HCV的復制，降低血清轉氨酶，促進肝細胞的修復，容易導致CR檢測的HCV-RNA檢測假陽性結果，進行HCV診斷過程中需要了解患者干擾素服用史，避免漏診、誤診[11]。

ALT 是臨床最常規的肝功能檢查項目，當肝細胞受損時，肝細胞膜通透性增加[12]。本研究顯示ALT、AST在HCV-RNA陽性時存在明顯異常(P<0.05),證實血清中HCV-RNA水平高，提示病毒在肝臟中大量復制，可能有持續性肝臟損傷的危險。就其原因主要在于丙型肝炎發病過程中肝炎病毒感染使機體免疫系統活化，這些活化的細胞可與因肝炎病毒感染而改變的肝細胞膜成分發生免疫應答，從而造成肝功能的衰退以及肝細胞的壞死[13]。

綜上所述，HCV-RNA 陽性率與ELISA法的S/CO 比值呈正相關，可根據S/CO 比值預測HCV-RNA 的結果，進而初步預測患者肝功能狀況，為丙肝患者的診斷和治療提供可靠依據。兩種檢測方法聯合使用，可進一步完善診斷、評價HCV治療效果，具有重要的臨床使用價值。

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通信作者：李婭，碩士，昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科副主任技師，E-mail:13708710060@139.com

【中圖分類號】R575

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)09-0082-03

(收稿日期：2016.03.16)