鹽酸多西環素與土霉素對胸膜肺炎放線桿菌的體外抑菌效果研究

王德功，魏麗娟，楊國輝，劉 欣，吳聰明，賈國賓*

（1.河北遠征藥業有限公司，河北 石家莊 050041；2.河北省獸藥工程技術研究中心，河北 石家莊 050041；3.中國農業大學，北京 100193）

鹽酸多西環素與土霉素對胸膜肺炎放線桿菌的體外抑菌效果研究

王德功1，2，魏麗娟1，2，楊國輝1，2，劉 欣1，2，吳聰明3，賈國賓1，2*

（1.河北遠征藥業有限公司，河北 石家莊 050041；2.河北省獸藥工程技術研究中心，河北 石家莊 050041；3.中國農業大學，北京 100193）

為研究鹽酸多西環素、土霉素對胸膜肺炎放線桿菌的抗菌活性，本試驗采用微量肉湯稀釋法，對胸膜肺炎放線桿菌進行了體外藥敏試驗。結果顯示，鹽酸多西環素對胸膜肺炎放線桿菌的MIC范圍為0.125～1.0 μg/mL，土霉素對胸膜肺炎放線桿菌的MIC范圍為0.125～1.0 μg/mL，兩種藥物對胸膜肺炎放線桿菌的體外抗菌活性相當。結果表明，鹽酸多西環素和土霉素對胸膜肺炎放線桿菌具有良好體外抑菌作用。

鹽酸多西環素；土霉素；胸膜肺炎放線桿菌；體外抑菌試驗

多西環素（Doxycycline）與土霉素（Oxytetracycline）均屬于四環素類抗菌藥[1]，是臨床上廣泛應用的廣譜抗生素[2]。多西環素又名強力霉素、脫氧土霉素，具有抗菌活性和組織穿透力更強、生物利用度高、體內分布廣、半衰期較長等優點，在治療大腸桿菌病、沙門氏菌病、巴氏桿菌病及支原體感染等方面效果顯著[3]。土霉素對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、支原體、衣原體、立克次體等引起的感染有效，也可用于治療梨形蟲病、附紅細胞體病等[4]。

傳染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumonia，PCP）是由胸膜肺炎放線桿菌（APP）引起的豬的一種高度傳染性呼吸道疾病，以急性出血和慢性纖維素性胸膜肺炎為特征，可造成患病豬死亡，在新進豬群中多呈急性爆發[5]。其發病率在10%以上，最急性型的死亡率可高達80%～100%[6]。隨著養豬業規模化和集約化的發展，傳染性胸膜肺炎已成為嚴重危害養豬業發展的主要細菌性傳染病之一，給養殖業帶來了極大的經濟損失[7]。本試驗旨在通過觀察鹽酸多西環素及土霉素對胸膜肺炎放線桿菌的體外抑菌活性，為臨床藥物合理使用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試藥物 鹽酸多西環素（原料藥），含量84.50%，批號201312022，揚州聯博藥業有限公司。

土霉素（原料藥），含量 90.20%，批號：141401074，赤峰制藥股份有限公司。

1.1.2 對照藥物 鹽酸多西環素（標準品），含量85.20%，批號130485-201202，購自中國食品藥品檢定研究院。

土霉素（對照品），含量91.30%，批號K0031208（K0031208-01），購自中國獸醫藥品監察所。

1.1.3 試驗菌株 胸膜肺炎放線桿菌，共計7株，均購自中國獸醫藥品監察所。這些菌株均分離自豬胸膜肺炎病例，由中國獸醫藥品監察所鑒定保存。

1.1.4 質控菌株 大腸桿菌ATCC25922和金黃色葡萄球菌ATCC29213，購自美國標準菌種收藏所（ATCC）。

1.1.5 培養基 MH肉湯培養基和MH瓊脂培養基（質控菌用），批號分別為1211071和1302051；PPLO肉湯和PPLO瓊脂（測試菌用），批號分別為1211071和1302051。上述試劑購自北京市陸橋技術有限責任公司。

1.2 試驗方法 按微量肉湯稀釋法進行，測試步驟參照CLSI（2013，VET01-S2）。具體操作如下。

1.2.1 藥液配制 將鹽酸多西環素、土霉素分別用滅菌蒸餾水配制成1 280 μg/mL的貯備液，過濾除菌，-20℃低溫保存備用。

1.2.2 菌液制備 質控菌株（大腸桿菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC29213）分別用MH肉湯復活，測試菌株（胸膜肺炎放線桿菌）用PPLO肉湯（添加1%NAD和5%豬血清）復活。質控菌株復活后接種于MH瓊脂平板，測試菌株復活后接種于PPLO瓊脂（添加1% NAD和5%豬血清）平板，37℃過夜培養后，分別挑取1～3個單菌落接種于MH肉湯或PPLO肉湯，置37℃孵育16～18 h。將原菌液用相應液體培養基按1:1 000稀釋作為試驗菌液。

1.2.3 接種培養 將兩種藥物貯備液分別用MH肉湯培養基（質控菌用）或PPLO肉湯（測試菌用）依次倍比稀釋成 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125 μg/mL，用微量加液器將稀釋好的藥液依次加入微孔板每排，每孔50 μL，第12孔加不含藥物的培養基作為陰性對照。用微量加液器將試驗菌液依次加入微孔板每排，每孔50 μL，這樣每孔內藥物的最后濃度為64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.063 μg/mL，第12孔為不含藥物的陰性對照。混勻，將微量板置于墊有濕紗布的搪瓷方盤內，置37℃培養18～24 h觀察結果。

1.2.4 MIC判定 在襯有黑底板的光線下觀察，細菌生長時小孔內培養液呈彌散狀渾濁或U形底部有圓形或絲網狀沉淀，無細菌生長孔的最低藥物濃度即為該藥物的MIC。

2 結果與分析

2.1 鹽酸多西環素和土霉素對質控菌和測試菌的體外藥敏試驗結果見表1。數據顯示，鹽酸多西環素和土霉素對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC）在質控范圍內（大腸桿菌0.5～2.0 μg/mL；金葡菌0.125～1.0 μg/mL），表明試驗所用試劑（培養基）和操作方法合乎要求，檢測數據可信。

2.2 數據可見，鹽酸多西環素原料藥對7株胸膜肺炎放線桿菌的MIC范圍為0.125～1.0 μg/mL，鹽酸多西環素標準品對7株胸膜肺炎放線桿菌的MIC范圍為0.063～0.5 μg/mL。鹽酸多西環素原料藥和標準品對胸膜肺炎放線桿菌的體外抗菌活性基本相當。

2.3 數據可見，土霉素原料藥對7株胸膜肺炎放線桿菌的MIC范圍為0.125～1.0 μg/mL，土霉素對照品對7株胸膜肺炎放線桿菌的MIC范圍為0.063～1.0 μg/mL。土霉素原料藥和對照品對胸膜肺炎放線桿菌的體外抗菌活性也基本相當。

2.4 測定數據顯示，鹽酸多西環素對胸膜肺炎放線桿菌的體外抗菌活性與土霉素相當。兩種藥物原料藥的體外抗菌活性也與它們的標準品（或對照品）相當。且鹽酸多西環素、土霉素對7株胸膜肺炎放線桿菌的MIC≤1 μg/mL，根據臨床實驗室標準化委員會（CLSI）的判定標準均為敏感。

表1 鹽酸多西環素和土霉素對豬源胸膜肺炎放線桿菌的體外藥敏檢測結果Table1 In vitro susceptibility test results of doxycycline and oxytetracycline hydrochloride on porcine Actinobacillus pleuropneumoniae

3 討論

3.1 胸膜肺炎放線桿菌屬巴氏桿菌科嗜血桿菌屬，后根據其表型和DNA雜交水平均與放線桿菌屬模式種密切相關，歸屬為巴氏桿菌科放線桿菌屬[8]，目前已報道的APP有15個血清型，15個血清型又分為生物Ⅰ型和生物Ⅱ型[9]。由于其血清型眾多，具有地方特異性，同時各血清型之間也很難產生較強的交叉保護作用，疫苗免疫常常面臨交叉保護作用不強的問題，影響其防控效果，所以抗菌藥物成為控制這種病的主要手段[10]，臨床上常用先鋒霉素、阿莫西林、頭孢噻呋、替米考星、四環素、氯霉素等治療該病[11]。鹽酸多西環素和土霉素作為臨床上廣泛應用的廣譜抗生素，對胸膜肺炎放線桿菌具有良好的體外抑菌作用，因此開發用于防治豬胸膜肺炎放線桿菌感染的鹽酸多西環素和土霉素制劑，有潛在的臨床應用價值。

3.2 由于胸膜肺炎放線桿菌易產生耐藥性[12]，隨著臨床生產實踐中抗菌藥物大量的使用，其耐藥性也越來越嚴重。郭慶河[13]報道對新疆昌吉地區經過檢測的9株APP進行藥物敏感性檢測，發現該細菌對鹽酸多西環素敏感，其敏感率分別為77.8%；楊瑞晨[14]報道對來自四川廣安、層山等地區疑似病料進行APP分離獲得9株分離株進行藥物敏感試驗研究，結果表明9株分離株均四環素耐藥；李海利等[15]報道對分離的7株APP進行藥物敏感性試驗，結果表明對四環素、鹽酸多西環素耐藥；本試驗中鹽酸多西環素、土霉素對胸膜肺炎放線桿菌的MIC范圍均為0.125～1.0 μg/mL，處于敏感狀態。但隨著鹽酸多西環素在臨床中的廣泛應用，菌株有可能會產生耐藥。因此建議臨床應加強分離菌的藥物敏感性監測，以提高用藥針對性，保證療效。

參考文獻

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Studies on the Antibacterial Activity of Doxycycline Hydrochloride and Oxytetracycline against Actinobacillus Pleuropneumoniae in vitro

Wang Degong1,2,Wei Lijuan1,2,Yang Guohui1,2,Liu Xin1,2,Wu Congming3,Jia Guobin1,2*
（1.Hebei Yuanzheng Pharmaceutical Co.,Ltd,Hebei Shijiazhuang 050041; 2.Hebei provincial veterinary Engineering Technology Research Center,Hebei Shijiazhuang 050041; 3.China Agricultural University,Beijing 100193）

In order to study the antibacterial activity of doxycycline hydrochloride and oxytetracycline against Actinobacillus pleuropneumoniae,This experiment adopts the broth microdilution method of Actinobacillus pleuropneumoniae by drug sensitivity test in vitro.The results showed that the MIC of doxycycline hydrochloride against Actinobacillus pleuropneumoniae was 0.125～1.0 μg/mL,the MIC of oxytetracycline against Actinobacillus pleuropneumoniae was 0.125～1.0 μg/mL. The antimicrobial activity in vitro of the two drugs were equivalent against Actinobacillus pleuropneumoniae.The results show that doxycycline hydrochloride and oxytetracycline has good antibacterial activity against Actinobacillus pleuropneumoniae in vitro.

Doxycycline Hydrochloride;Oxytetracycline;Actinobacillus pleuropneumoniae;Antibacterial experiment in vitro

S855.12

：B

：1672-9692(2016)09-0016-04

2016-06-11

王德功（1981-），男，工程師，大學本科，學士，研究方向：藥劑學及畜禽疾病。

賈國賓（1964-）男，大學本科，學士，高級工程師，研究方向：藥劑學及畜禽疾病。

石家莊市科學技術研究與發展計劃課題項目（131200083A）。