卡巴匹林鈣在豬體內的藥代動力學和安全性研究

韓可可，陳 紅，田玉柱，王 佩，王嘉鵬，徐 維，權 丹，周雨卉

（1.華南農業大學獸醫學院，廣東 廣州 510642；2.山東齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250100）

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卡巴匹林鈣在豬體內的藥代動力學和安全性研究

韓可可1，陳 紅1，田玉柱2，王 佩1，王嘉鵬1，徐 維1，權 丹1，周雨卉1

（1.華南農業大學獸醫學院，廣東 廣州 510642；2.山東齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250100）

摘 要：研究了豬單劑量口服、靜注40 mg/kg.bw卡巴匹林鈣后其代謝產物阿司匹林和水楊酸的藥代動力學過程，并按照1、3、5倍推薦劑量進行了卡巴匹林鈣可溶性粉對靶動物豬的安全性試驗。藥動學試驗通過HPLC-UV測定不同采樣時間點的血藥濃度，數據用WinNonlin5.2.1軟件的非房室模型進行擬合。結果表明，卡巴匹林鈣給藥后，代謝產物阿司匹林和水楊酸達峰快，峰濃度高。安全性評價試驗則通過測定血常規、血生化指標來評估。給藥組與對照組相比，WBC、RBC、HGB等血液生理常規指標及AST、GLU、TG、TC等血液生化指標沒有顯著差異，臨床也未觀察到不良反應。結果表明，卡巴匹林鈣可溶性粉5倍推薦劑量給藥，對靶動物豬是安全的。

關鍵詞：卡巴匹林鈣；豬；藥代動力學；安全性評價

卡巴匹林鈣（Carbasalate Calcium）是阿司匹林鈣與尿素的絡合物，最早由荷蘭默沙東（DSM）公司研制生產?？ò推チ肘}的代謝特點和藥理作用與阿司匹林相同，在水中水解為阿司匹林而發揮解熱、鎮痛、抗炎及抑制血小板聚集的作用。目前，歐盟已經批準卡巴匹林鈣用于除水生動物外的所有食品動物，美國FDA也將其列為非處方藥。在國內，卡巴匹林鈣正逐步推廣應用于畜禽養殖業［1］。本試驗對卡巴匹林鈣可溶性粉在豬體內的藥代動力學進行研究，并對其安全性進行評價，為其在獸醫臨床的合理用藥提供理論依據。

1　材料與方法

1.1 試驗材料

卡巴匹林鈣可溶性粉（批號為1405014，含量50%，齊魯動物保健品有限公司提供），卡巴匹林鈣原料藥（以無水化合物計含量100.04%，齊魯動物保健品有限公司提供），阿司匹林標準品（含量100%，購自中國食品藥品檢定研究院），水楊酸標準品（含量99.9%，購自中國食品藥品檢定研究院）。高效液相色譜系統（Waters2695），紫外檢測器（Waters2487），MEK-6138K全自動血液學分析儀（日本光電工業株式會社），魅力1800自動血液生化分析儀（美國MD儀器公司）

1.2 藥動學研究方法

1.2.1 樣品采集 將6頭健康三元雜交大白豬（體重20～25 kg）隨機交叉試驗設計，分兩組，每組3頭。一組按40 mg/kg（BW）的劑量耳緣靜脈注射原料藥配置的靜注液，另一組按80 mg/kg（BW）灌服卡巴匹林鈣可溶性粉。口服給藥的豬分別于給藥前和給藥后5 min、15 min、0.5 h、0.75 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h于前腔靜脈采血。靜脈注射給藥的豬分別于給藥前和給藥后5 min、15 min、0.5 h、0.75 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h于前腔靜脈采血。血樣離心（3 000 r/min，10 min）后取2～3 m L血漿加入100 μL 1 mol/L鹽酸［2］，立即放入-70℃冰箱保存。第1次試驗結束后，飼養1周，交叉給藥。

1.2.2 血漿樣品前處理 取肝素抗凝血漿0.5 mL，置于1.5 m L尖底離心管中，加入0.5 m L色譜乙腈，渦旋30 s，12 000 r/min離心10 min后取上清液，過孔徑0.22 μm的尼龍濾膜，上機檢測。

1.2.3 檢測條件 色譜柱：Hypersil BDS C18（5 μm 250 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇∶乙腈∶流動相I為10∶20∶70（體積比，流動相I∶1‰磷酸水，用三乙胺調pH值到2.3～2.4，過孔徑0.22 μm的水系濾膜）；波長：230 nm；流速：0.9 mL/min；柱溫：20℃；進樣量：10 μL。

1.3 安全性評價試驗方法

將24頭健康長白 × 大白二元雜交豬（公母兼有，體重25 kg左右）隨機分為4組，分別為空白對照組、1倍劑量組、3倍劑量組、5倍劑量組，每組6頭。1倍劑量組、3倍劑量組、5倍劑量組分別按80、240、400 mg/kg（BW）口服卡巴匹林鈣可溶性粉，連續給藥5 d（1次/d）。連續給藥5 d后24 h，前腔靜脈采集各組試驗豬的血液，包括鮮血（加抗凝劑）和分離血清（不加抗凝劑）。新鮮血液用于測定血液生理指標，如紅細胞數（RBC）、白細胞數（WBC）、血紅蛋白含量（HGB）、血細胞比容（HCT）、血小板計數（PLT）；血清用于血液生化指標的測定，如丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、尿酸（UA）、直接膽紅素（DBIL）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、血總蛋白（TP）、肌酸激酶（CK）。

1.4 數據處理

藥動學試驗不同采樣時間點的血藥濃度數據用WinNonlin5.2.1軟件的非房室模型進行擬合。采用SPSS 17.0統計分析軟件對血液生理生化指標數據進行顯著性檢驗，采用t檢驗比較試驗組與對照組間血液生理指標、血清生化指標的差異性。

圖1　液相色譜檢測方法結果

2　結果與分析

2.1 藥動學研究結果

2.1.1 液相色譜檢測方法結果 在1.2.3液相色譜條件下測得阿斯匹臨和水楊酸的保留時間分別為9.9、13.8 min，空白血漿在上述保留時間無干擾峰出現（圖1）

2.1.2 標準曲線和線性范圍 以血漿中藥物濃度的1/2為X軸、對應峰面積為Y軸做標準曲線（圖2）。阿司匹林、水楊酸的線性方程分別：y=31650x+677.55（r2=0.9993），y=38614x+710.54 （r2=0.9989）。

2.1.3 回收率和精密度 測得水楊酸、阿司匹林的回收率分別為80.1%～104.84%、81.67%～103.51%。批內變異系數分別為2.43%～9.98%、2.55%～6.02%；批間變異系數分別為2.89%～ 8.68%、3.06%～5.45%。其批內批間變異系數小于15%，表明所建立的同時檢測阿司匹林、水楊酸高效液相色譜方法符合生物樣品分析的要求。

2.1.4 藥物動力學結果 卡巴匹林鈣靜注給藥后，運用WinNonlin5.2.1 藥物動力學程序軟件對靜注和口服后血漿中藥物的經時過程進行擬和，采用非房室模型計算統計矩參數等藥物動力學參數，結果見表1。阿司匹林、水楊酸藥物時間曲線見圖3。

圖2　阿司匹林（左）、水楊酸（右）的標準曲線

表1　豬靜注、口服卡巴匹林鈣后其代謝產物阿司匹林、水楊酸藥動學參數（n=6）

圖3　阿司匹林、水楊酸藥物時間曲線

2.2 安全性評價結果

2.2.1 血液學檢查結果 最后一次給藥24 h后，各劑量組動物與對照組相比，各項血常規指標差異均不顯著（表2）。

表2　各組豬的血液生理指標平均值（n=6）

2.2.2 血液生化檢驗結果 血液生化學檢查結果見表3，統計學分析表明，與對照組相比，各劑量組動物指標均無顯著差異，以及各劑量組之間差異也不顯著。表明卡巴匹林鈣可溶性粉對靶動物豬肝腎功能及物質代謝無不良影響。

表3　各組豬的血液生化指標平均值（n=6）

3　結論與討論

3.1 分析方法的優化確定

目前做阿司匹林和水楊酸同時檢測的方法有很多，有毛細管電泳法［3-4］、高效液相色譜法［5］、高效液相色譜串聯質譜法［6］、超高效液相色譜法［7-8］。高效液相色譜法簡便、快捷，應用比較廣泛。關于檢測器的選擇，阿匹林熒光性較弱，水楊酸的熒光性較強。用熒光檢測器，阿司匹林檢測限滿足不了試驗要求。但有研究用柱后衍生反應提高阿司匹林的檢測靈敏度，使阿司匹林的檢測限、定量限分別可達到32.5、50 pg/μL［9］。但該方法需要額外的設備，對儀器要求比較高。

3.2 卡巴匹林鈣在豬的藥代動力學特點

豬靜注卡巴匹林鈣后，其代謝產物阿司匹林即可達峰，峰濃度為48.96 μg/m L，而水楊酸達峰時間平均為0.54 h，達峰迅速，峰濃度為83.53 μg/m L。與鄭文等［10］做的雞卡巴匹林鈣藥動結果相比，阿司匹林和水楊酸的峰濃度要低得多。雞靜注40 mg/kg卡巴匹林鈣后8 h，阿司匹林已幾乎檢測不出，水楊酸84 h仍能檢測出微量的藥物。相比之下，豬對卡巴匹林鈣的代謝要比雞代謝得快，阿司匹林、水楊酸平均滯留時間MRT分別為0.29 （±0.06）、3.53（±0.35） h，比雞靜注給藥后阿司匹林MRT1.72（±0.23 ）h、水楊酸MRT5.67（± 0.39 ）h要小得多。

豬口服卡巴匹林鈣后，其代謝產物阿司匹林平均0.39 h達峰，峰濃度為8.42 μg/mL；水楊酸平均1.75 h達峰，峰濃度為60.47 μg/mL。與雞相比，其代謝產物阿司匹林的達峰時間稍慢，水楊酸達峰稍快，但差別不大。阿司匹林峰濃度跟雞的很接近，水楊酸峰濃度是雞的1.5倍。其代謝產物阿司匹林和水楊酸在豬平均滯留時間（MRT）分別為0.85 （±0.14）、4.03（±0.52） h，與雞相比，平均滯留時間依然比雞的要小。由此可說明，豬口服卡巴匹林鈣后，代謝產物阿司匹林和水楊酸達峰迅速，峰濃高，與雞相比半衰期較短，藥物消除較快。

3.3 卡巴匹林鈣的安全性

連續給藥5 d后，推薦劑量1倍組、3倍組、5倍組與對照組相比，血液學、血液生化學等參數指標均無顯著差異，以及各劑量組之間差異也不顯著。同時臨床未觀察到中毒癥狀及不良反應，給藥豬解剖，胃腸粘膜、心臟、腎臟、脾臟等組織也未見病灶。本試驗結果表明，卡巴匹林鈣可溶性粉對靶動物豬是安全的，具有較好的臨床應用前景。

參考文獻：

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［10］ 鄭文，陳洪亮，黃玲利，等，卡巴匹林鈣可溶性粉在雞的藥動學研究［J］.家禽科學，2011（11）：13-16.

（責任編輯崔建勛）

Study on pharmacokinetics and safety evaluation of carbasalate calcium in pig

HAN Ke-ke1，CHEN Hong1，TIAN Yu-zhu2，WANG Pei1，WANG Jia-peng1，XU Wei1，QUAN Dan1，ZHOU Yu-hui1
（1.College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；2.Qilu Animal Health Products Co.，Ltd，Jinan 250100，China）

Abstract：The pharmacokinetics of aspirin and salicylic acid，carbasalate calcium's metabolites were investigated in pig by oral administration and intravenous injection at a single dosage of 40 mg/kg body weight.The safety of carbasalate calcium was evaluated by oral administration at 1，3，5 times of the recommended dose of carbasalate calcium soluble powder.In the pharmacokinetic study，the plasma samples collected at different points of time were determined by HPLC-UV.The data were analyzed by noncompartmental model of W inNonlin5.2.1 software.The results showed that，time to peak of aspirin and salicylic acid was short and peak concentrations of them were high.Safety evaluation of carbasalate calcium was carried out by detecting hematological parameters，biochemical indicators.Comparing the test group and control group，there was no significant difference between them in regular blood physiology indicators like WBC，RBC，HGB，etc.and serum biochemistry indicators like AST，GLU，TG，TC，etc.There was no clinical adverse reaction.The results indicated that the carbasalate calcium soluble powder was safe to pig at the dosage of 5 times of recommended dose.

Key words：carbasalate calcium； pig； pharmacokinetic； safety evaluation

中圖分類號：S859.79+1

文獻標識碼：A

文章編號：1004-874X（2016）-0125-05

收稿日期：2015-09-07

基金項目：廣東省自然科學基金（S2012030006590）

作者簡介：韓可可（1988-），女，在讀碩士生，E-mail：emma881desigh@126.com

通訊作者：陳紅（1969-），女，碩士，高級獸醫師，E-mail：shuyi@scau.edu.cn，1269038413@qq.com