胎膜早破孕婦胎膜不同區域及胎盤組織中孕酮膜受體組件1的表達

程國梅，張琳瑛，郝志偉，王夢琦，崔世紅，管秀娟，張春雙

1)鄭州大學第三附屬醫院婦產科 鄭州 450052　2)鄭州大學第三附屬醫院病理科 鄭州 450052

胎膜早破孕婦胎膜不同區域及胎盤組織中孕酮膜受體組件1的表達

程國梅1)△，張琳瑛1)，郝志偉2)，王夢琦1)，崔世紅1)，管秀娟1)，張春雙1)

1)鄭州大學第三附屬醫院婦產科 鄭州 4500522)鄭州大學第三附屬醫院病理科 鄭州 450052

△女，1969年6月生，博士，主任醫師，研究方向：圍產醫學，E-mail：905682243@qq.com

關鍵詞孕酮受體膜組件1；胎膜早破；破膜區；遠離破膜區；胎盤

摘要目的：探討胎膜早破(PROM)患者胎膜破裂(RS)區、遠離破膜(DS)區胎膜組織及胎盤組織中孕酮膜受體組件1(PGRMC1)的表達及意義。方法：選擇20例PROM孕婦作為病例組、20例無宮縮擇期剖宮產孕婦作為對照組。采用免疫組化法對PGRMC1蛋白的表達進行定位，采用Western blot方法檢測兩組孕婦胎膜RS區、DS區及胎盤組織中PGRMC1蛋白的表達。結果：PGRMC1主要在絨毛膜和蛻膜中表達。與對照組相比，PROM組胎膜RS區和胎盤組織中PGRMC1蛋白表達降低(P<0.05)；PROM組胎膜RS區和胎盤組織中PGRMC1蛋白表達低于DS區(P<0.05)。結論：孕婦胎膜RS區和胎盤組織中PGRMC1蛋白的低表達可能參與了PROM的發生。

胎膜早破(premature rupture of membranes，PROM)是產科臨床常見的產前并發癥，發生率約為10%，常可導致胎兒宮內感染、窘迫、早產及新生兒成活率低、肺炎、敗血癥、黃疸等不良結局的發生[1]。PROM是由多病因引起的，最常見的為自發性PROM[2]。有研究[3]報道PROM是由機械拉伸、細胞外基質成分的不平衡及凋亡增強所致。雖然胎膜破裂的生理機制尚未完全闡明，但凋亡和細胞外基質降解是被公認的主要特征。基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)是基質金屬蛋白酶家族中的重要成員，對細胞外基質包括基底膜均有降解作用[4]。孕酮受體膜組件1(progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1)是一種相對分子質量為25 000～28 000的蛋白，含有一段短的跨膜序列及一段細胞色素b5結合區域[5]。有研究[6]發現PGRMC1參與維持妊娠的許多過程，如細胞分化、細胞凋亡、類固醇的生成以及子宮的收縮。孕酮可抑制胎膜組織中基礎細胞凋亡及阻斷腫瘤壞死因子-α(TNF-α)介導的細胞凋亡過程，還可保護絨毛膜細胞及蛻膜細胞免受鈣離子誘導的細胞死亡，且能減弱蛻膜細胞中細胞因子誘導的MMP-9的表達及活性。在滋養層細胞中，PGRMC1似乎在孕酮對細胞因子誘導的MMP-9的表達及活性方面起保護作用，但其在預防炎癥因子誘導胎膜破裂中所起的具體機制尚不清楚[7]。因此，鑒于PGRMC1的上述功能，作者推測它可能參與胎膜細胞凋亡的調控及改變細胞外基質的降解和重塑，從而導致PROM的發生。作者通過測定PROM組、對照組孕婦胎膜不同區域和胎盤組織中PGRMC1的表達情況，探索其導致胎膜破裂的可能機制。

1對象與方法

1.1研究對象選擇2014年7月至11月在鄭州大學第三附屬醫院分娩的20例PROM孕婦作為病例組(PROM組)、20例無宮縮擇期剖宮產組孕婦作為對照組。40例孕婦均無合并感染。于標本收集之前均獲得孕婦及家屬的同意并簽署知情同意書，且都為廢棄組織。PROM診斷標準： 臨床表現(有較多液體從陰道流出)或窺器檢查見陰道后穹隆有羊水積聚或有羊水自宮口流出、陰道液pH值≥6.5及陰道液涂片檢查見羊齒植物狀結晶(為羊水)，符合以上任意一條即診斷為PROM[8]。PROM排除標準：多胎妊娠、羊水過多、妊娠合并糖尿病、腎臟疾病、子癇前期和免疫性疾病。

1.2標本收集及處理于分娩后20 min內收集每位孕婦的破裂區(RS區)及遠離破裂區(DS區，距破裂口大于3 cm)胎膜組織各2份，正對臍帶的胎盤組織各2份(1 cm×1 cm×1 cm)。其中的一份經生理鹽水充分沖洗后卷成胎膜卷放入盛有體積分數10%中性福爾馬林的容器內，另一份直接放入凍存管后立即保存于-80 ℃冰箱內。

1.4統計學處理采用SPSS 15.0進行分析，應用重復測量數據的方差分析比較同一組別不同區域組織中PGRMC1蛋白表達的差異，應用t檢驗比較孕婦及新生兒資料、同一區域組織不同組別中PGRMC1蛋白表達的差異，檢驗水準α=0.05。

2結果

2.12組孕婦及新生兒資料的比較見表1。

表1　2組孕婦及新生兒資料比較

2.22組孕婦胎膜及胎盤組織中PGRMC1蛋白的表達見圖1、2和表2。PGRMC1蛋白主要在胎膜的絨毛膜層和蛻膜層中表達。

上排：PROM組；下排：對照組；左：RS區組織；中：DS區組織；右：胎盤組織；A：羊膜層；C：絨毛膜層； D：蛻膜層。圖1　2組孕婦胎膜及胎盤中PGRMC1蛋白的表達(IHC,×200)

圖2　2組孕婦胎膜及胎盤中PGRMC1蛋白表達的蛋白印跡條帶圖

表2　同一區域不同組別和同一

3討論

胎膜由羊膜、絨毛膜、蛻膜和細胞外基質構成。細胞外基質(包括各種膠原蛋白和彈性蛋白)使細胞連接在一起，從而維護胎膜的完整性和彈性[9]。周先榮[10]認為胎膜局部微環境的改變能夠影響膠原纖維的降解及彈力纖維的產生，且病理學研究揭示PROM胎膜破裂區厚度下降35%；Feng等[11]也發現某些因子在胎膜RS區與DS區的表達不一致。

該研究發現，與胎膜DS區相比，PROM組RS區PGRMC1蛋白的表達明顯降低，提示PGRMC1蛋白與PROM的發生密切相關。Allen等[7]發現用siRNA沉默PGRMC1的表達，可導致HTR8/SVneo細胞醋酸甲羥孕酮(MPA)抑制TNF-α誘導MMP-9表達的能力降低。PGRMC1可能通過細胞膜或細胞質或者是核內PGRMC1的二聚體發揮其介導效應。核內PGRMC1的二聚體能夠調控細胞凋亡基因及轉錄因子的表達。因此推測胎膜某區PGRMC1表達的降低使得孕酮抑制TNF-α誘導MMP-9表達的能力降低以及細胞凋亡增加，進而導致PROM的發生。

該研究還發現PGRMC1蛋白在PROM組胎盤中的表達也降低，且其表達水平與胎膜RS區一致，原因有待進一步探討。

綜上所述，PROM組胎膜RS區PGRMC1蛋白表達的降低可能參與了PROM的發生。另外，PROM組胎膜RS區與DS區PGRMC1蛋白表達的差異提示在以后的研究中要多位點取材，以便發現更細微的差別，從而更深入地了解PROM的發病機制。

參考文獻

[1]郭華峰,楊筱青,古雅麗,等.胎膜早破和絨毛膜羊膜炎患者胎膜組織中 MMP-9、MIF 的表達和羊水中 IL-6水平檢測[J].鄭州大學學報(醫學版),2015,50(2):229

[2]HACKENHAAR AA,ALBERNAZ EP,DA FONSECA TM.Preterm premature rupture of the fetal membranes: association with sociodemographic factors and maternal genitourinary infections[J].J Pediatr (Rio J),2014,90(2):197

[3]BLANCHON L,ACCOCEBERRY M,BELVILLE C,et al.Rupture of membranes: pathophysiology, diagnosis, consequences and management[J].J Gynecol Obstet Biol Reprod (Paris),2013,42(2):105

[4]李志晉,葉晶珠,詹麗英,等.軸抑制因子通過β-catenin調控MMP7、MMP9 影響淋巴瘤細胞的和侵襲轉移[J].南方醫科大學學報,2016,36(3):1

[5]KOWALIK MK,REKAWIECKI R,KOTWICA J.Expression and localization of progesterone receptor membrane component 1 and 2 and serpine mRNA binding protein 1 in the bovine corpus luteum during the estrous cycle and the first trimester of pregnancy[J].Theriogenology,2014,82(8):1086

[6]KOWALIK MK,SLONINA D,REKAWIECKI R,et al.Expression of progesterone receptor membrane component(PGRMC)1 and 2,serpine binding protein 1(SERBP1)and nuclear progesterone receptor(PGR)in the bovine endometrium during the estrous cycle and the first trimester of pregnancy[J].Reprod Biol,2013,13(1):15

[7]ALLEN TK,FENG LP,GROTEGUT CA,et al.Progesterone receptor membrane component 1 as the mediator of the inhibitory effect of progestins on cytokine-induced matrix metalloproteinase 9 activity in vitro[J].Reproductive Sciences,2014,21(2):260

[8]謝幸,茍文麗.婦產科學[M].8版.北京：人民衛生出版社, 2013:133

[9]OZDAMAR O,GU N I,MU NGEN E,et al.The assessment of the relationship between amniotic fluid matrix metalloproteinase-9 and zinc levels with adverse obstetric outcomes[J].Arch Gynecol Obstet,2014,290(1):59

[10]周先榮.胎膜早破的胎盤病理學改變[J].中國實用婦科與產科雜志,1996,12(1):19

[11]FENG L, ANTCZAK BC, LAN L,et al. Progesterone receptor membrane component 1 (PGRMC1) expression in fetal membranes among women with preterm premature rupture of the membranes (PPROM) [J].Placenta,2014,35(5):331

(2015-09-16收稿責任編輯趙秋民)

Expression of PGRMC1 in different regions of fetal membrane and placenta tissue among women with premature rupture of fetal membranes

CHENGGuomei1),ZHANGLinying1),HAOZhiwei2),WANGMengqi1),CUIShihong1),GUANXiujuan1),ZHANGChunshuang1)

1)DepartmentofGynecologyandObstetrics，theThirdAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou4500522)DepartmentofPathology，theThirdAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052

Key wordsprogesterone receptor membrane component 1；premature rupture of membranes；site of rupture；the distant to rupture site；placenta

AbstractAim: To explore the expression of progesterone receptor membrane component 1(PGRMC1) in the site of rupture(RS) and the distant to rupture site(DS) of fetal membrane and placenta tissue from women with premature rupture of membranes(PROM).Methods: 20 with PROM(PROM group) and 20 control(control group) pregnant women were chosen. The expression and localization of PGRMC1 in RS,DS,and placenta tissue of the 2 groups were assessed by Western blot and immunohistochemistry.Results: PGRMC1 was mainly expressed in chorion and decidua. Compared with control group, the expression of PGRMC1 was lower in RS of fetal membranes and placenta tissue of PROM group(P<0.05). The expression of PGRMC1 in RS and placenta tissue was lower than that in DS of PROM group(P<0.05).Conclusion: The lower expression of PGRMC1 in RS and placenta tissue may participate in the occurrence of PROM.

doi：10.13705/j.issn.1671-6825.2016.03.024

中圖分類號R714.7