死后細菌學檢測在死因鑒定中的作用初探

黃鴻江　張彬云

武宣縣公安局，廣西　武宣　545900

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死后細菌學檢測在死因鑒定中的作用初探

黃鴻江張彬云

武宣縣公安局，廣西武宣545900

摘要：目的：評價死后細菌學檢測在死因鑒定中的作用。方法：取健康SD大鼠30只，10只采用頸椎脫臼法處死納入A組，10只制作缺氧缺血模型20min確認死亡納入B組，10只注射金黃色葡萄球菌納入C組，不給于治療，待死亡，分別在死后3、6、9日，取后肢深部肌肉，采用化學發光法檢測ATP水平，另取30只SD大鼠，同法處死，分別在死后第1-10日，采樣取后肢深部肌肉、肝臟、脾臟、腎臟組織，進行細菌學培養鏡檢。結果：以ATP濃度對數值作為橫坐標，以相對發光單位的對數值作為橫坐標，呈一元線性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01；A組、B組、C組死后第3日、6日、9日ATP組間與組內比較差異具有統計學意義(P<0.05)；普通培養、厭氧培養，A組、B組、C組肌肉、肝臟、脾臟、腎臟細菌培養陽性出現時間、優勢菌類型差存在差異。結論：死后細菌學檢測可用于死因鑒定中，ATP、細菌培養與鑒定等都可作為死因判斷依據，但檢測結果受觀察時間等因素影響，同時是否適用于野外大型動物死亡尚無明確定論。

關鍵詞：死因；細菌學檢查；司法鑒定

死因鑒定是司法鑒定的基礎工作，是法醫學鑒定需解決的關鍵問題，重要性僅次于死亡時間。但需注意的是，死亡24h之內，尸體尚未發生腐敗，但死亡24h后，尸體便逐年開始腐敗，出現各種晚期尸體現象，出現各種細菌滋生、繁殖，尸體組織形態逐漸崩解、內源性化學物質不斷降解，難以建立相應的死后細菌學檢查體系。目前尚無一個確切、完整、系統的“法醫微生物學”概念與理論，但法醫學、微生物交叉融合內容已較豐富。

一、材料與方法

(一)實驗動物與材料

取健康SD大鼠30只，雌雄不限，體重150-200g，隨機分為10組，其中10只采用頸椎脫臼法處死納入A組，10只制作缺氧缺血模型20min確認死亡納入B組，10只注射金黃色葡萄球菌納入C組，不給于治療，待死亡。分別在死后3、6、9日，取大鼠尸體，按照無菌操作要求，取后肢深部肌肉，準確稱量成若干份，每份100mg，編號放入滅菌EP管，-70℃凍存待測。設備采用TD-20/20Luminometer、ATP、APyrase等與相關檢測試劑盒。另取30只SD大鼠，同法處死，分別在死后第1-10日，采樣取后肢深部肌肉、肝臟、脾臟、腎臟組織。

(二)方法

1.檢測組織中微生物ATP

取樣本0.10g 2ml無菌均漿器中，加入0.9ml 4℃無菌生理鹽水，均漿，收集5ml放入無菌EP管中，1ml無菌生理鹽水振洗，3次，混勻3000r/min離心5min。取離心后樣品上層清洗50μl檢測管內，加入50μ Triton X-100與腺苷三磷酸雙磷酸酶混合液，37℃賦予10min，沸水水浴1min，加入100μl BacTier-GloTM檢測液，孵育5min，檢測發光值，以無菌生理鹽水作為空白，計算ATP標準曲線。

2.菌種培養鑒定

獲得均漿，接種，以分區劃線法接種于培養皿中，每份樣品接種2份，分別在37℃有氧條件和37℃無氧條件下培養24h。采用接種環刮培養菌落，涂抹在栽載玻片中央，酒精燈烤制細菌涂片，采用Granm染色法染色，油鏡下觀察細菌形態。

(三)統計學處理

二、結果

(一)微生物ATP

以ATP濃度對數值作為橫坐標，以相對發光單位的對數值作為橫坐標，呈一元線性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01。A組：死后第3日、6日、9日，-Log([ATP])分別為(10.63±0.14)%、(7.81±0.11)%、(8.17±0.12)%，B組則為(7.82±0.15)%、(6.17±0.12)%、(7.52±0.20)%，C組則為(12.7±1.27)%、(10.6±6.42)%、(11.8±6.20)%，差異具有統計學意義(P<0.05)。

(二)菌種培養鑒定

普通培養，A組與B組1-3日，肌肉、肝臟、脾臟、腎臟均無細菌生長，C組脾臟、腎臟細菌培養陽性。均厭氧培養后，A組3-10日組織均有細菌長出，主要為G-小桿菌，死后7-10日出現G+大桿菌，B組3-5日組織有細菌長出，6-10日見G-小桿菌，C組組織見金黃色葡萄糖球菌，3-5日出現桿菌。

三、討論

從本次研究結果來看，不同死因大鼠在不同時間段得到的不同后肢深部組織微生物ATP含量存在顯著差異，不同死因大鼠在不同時間段得到的不同組織細菌培養陽性出現時間、優勢菌結果存在一定差異，反映死因、死亡時間對微生物的繁殖存在顯著影響，不僅影響微生物含量還影響微生物含量。但需注意的是，受死亡環境、尸體所在環境、尸體大小等因素影響，不同類型尸體腐敗速度、細菌類型定然存在差異，該法是否可作為野外死亡人的死因鑒定尚存在異議，但在發現較早、醫院死亡及時冷凍的尸體死因鑒定中有一定價值。

[參考文獻]

[1]趙子琴.法醫病理學[M].北京：人民衛生出版社，2009.

中圖分類號：D919.4

文獻標識碼：A

文章編號：2095-4379-(2016)16-0150-01

作者簡介：黃鴻江(1978-)，男，壯族，廣西武宣人，本科，武宣縣公安局，法醫師(初級)，研究方向：法醫學。