三陰性乳腺癌HER2(0/1+)和HER2(2+)的相關基因表達差異

許增祥，謝　閔，黃小梅，周芳芳，盧林明

(1.皖南醫學院　病理學教研室，安徽　蕪湖　241002；2.蕪湖市第二人民醫院　病理科，安徽　蕪湖　241000)

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三陰性乳腺癌HER2(0/1+)和HER2(2+)的相關基因表達差異

許增祥1，謝閔2，黃小梅1，周芳芳1，盧林明1

(1.皖南醫學院病理學教研室，安徽蕪湖241002；2.蕪湖市第二人民醫院病理科，安徽蕪湖241000)

【摘要】目的：探討三陰性乳腺癌(TNBC)HER2(0/1+)和HER2(2+)兩組中CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOP Ⅱα的表達差異及其臨床意義。方法：收集2010年1月～2014年12月TNBC患者HER2(0/1+)組30例，HER2(2+)組15例，采用免疫組織化學方法檢測CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOP Ⅱα的表達。結果：與HER2(2+)組比較，HER2(0/1+)組中CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα的表達均偏高，但不具有統計學差異(P>0.05)；且與患者年齡、腫瘤大小、病理學類型及分級、淋巴結轉移、脈管侵犯均無相關性(P>0.05)。結論：TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)兩者存在一些基因表達差異，可能為臨床靶向治療藥物的選擇提供理論依據。

【關鍵詞】三陰性乳腺癌；HER2；表達；差異

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.01.007

三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)是一種特殊分子類型的乳腺癌，其特點是雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)以及人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor reptor 2,HER2)表達均呈陰性。由于TNBC病人內分泌治療和抗HER2靶向治療均無效，可選擇的藥物作用靶點和治療手段相對較少，因而TNBC患者預后較差。有研究報道，與HER2(1+)相比，HER2(0)的TNBC中CK5/6或EGFR表達明顯較高，表現出更像基底細胞樣乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC)特征。本研究通過采用免疫組織化學方法，檢測TNBC患者HER2(0/1+)和HER2(2+)兩組內CK5/6、表皮生長因子受體(epithelial growth factor,EGFR)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、環氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)和DNA拓撲異構酶Ⅱα(topoisomerase，TOPⅡα)的表達情況，并分析其差異和臨床意義。

1資料與方法

1.1臨床資料隨機選擇2010年1月～2014年12月在皖南醫學院附屬弋磯山醫院和蕪湖市第二人民醫院行手術并病理確診的乳腺癌病人標本45例。患者年齡29～75歲，中位年齡52歲，均無其他惡性腫瘤史。所有病例ER、PR和HER2均經本實驗室再次免疫組織化學驗證，其中HER2(0/1+)組30例，HER2(2+)組15例，后者并經熒光原位雜交(FISH)技術證實呈陰性。

1.2實驗方法所有標本均用10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋。根據HE染色切片選取癌細胞豐富區域的對應蠟塊進行打孔(直徑1.2 mm)，制備組織芯片。組織芯片蠟塊切片厚度4 μm，常規HE染色。免疫組化染色采用SP法，DAB顯色，技術操作嚴格按照國家衛計委PQCC要求進行病理質控。所有抗體ER、PR、HER2、CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα均購自福州邁新生物技術開發有限公司和北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3結果判定免疫組化染色結果判讀分別由3名高年資病理醫師完成，最后對判讀結果進行綜合分析。ER、PR表達于細胞核，著色<10%判為陰性(以周邊正常乳腺導管上皮細胞作陽性對照)。HER2判定依照2014版乳腺癌HER2檢測指南進行。CK5/6、VEGF和COX-2主要表達于細胞漿，TOPⅡα定位于細胞核，EGFR呈細胞膜/胞漿染色，當上述基因蛋白表達的陽性細胞≥10%時判為陽性。

1.4統計學方法應用SPSS 18.0統計軟件處理數據，所有數據比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率法，以P<0.05作為差異具有統計學意義。

2結果

2.1TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)中基因表達差異由表1可知，CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2和TOPⅡα在TNBC HER2(0/1+)中表達均高于HER2(2+)，但不具有統計學差異(P>0.05)。

A示病理組織芯片掃描片(HE染色)，B～F示免疫組化染色(IHC ×200)：B示CK5/6(+)，C示EGFR(+)，D示VEGF(+)，E示COX-2(+)，F示Top Ⅱ(+)。

圖1TNBC組織芯片HE染色及免疫組化標記

2.2TNBC HER2(0/1+)組和HER2(2+)組基因表達與臨床病理特征關系由表2、3可見，在HER2(0/1+)和HER2(2+)中，CK5/6、EGFR、VEGF、COX-2、TopoⅡα的表達與患者年齡、腫瘤大小、病理學類型及分級、脈管侵犯、淋巴結轉移均無相關性(P>0.05)。

表1三陰性乳腺癌HER2(0/1+)與HER2(2+)基因表達差異

HER-2表達CK5/6+-陽性率/%PEGFR+-陽性率/%PVEGF+-陽性率/%PCOX-2+-陽性率/%PTOPⅡα+-陽性率/%PHER2(0/1+)82226.67>0.05102033.33>0.0522873.33>0.0524680.00>0.05141646.67>0.05HER2(2+)31220.0021313.3310566.678753.3351033.33合計113424.44123326.67321371.11321371.11192642.22

3討論

三陰性乳腺癌(TNBC)免疫組化標記顯示為“三陰性”，即ER、PR、HER2均為陰性，是一種特殊類型的乳腺癌，其病理形態、臨床特征均與普通乳腺癌有所不同。TNBC發病率約占所有乳腺癌的12%～24%，平均15%左右。TNBC發病年齡比普通乳腺癌患者年齡輕，腫瘤體積往往較大，呈推擠性生長，中央往往伴有大片壞死；腫瘤細胞異型較明顯，組織學分級高，具有較高的增殖活性，侵襲性強。而且缺乏有效的減危手段，主要以化療為主，治療后大多在1～3年內復發，多數在5年內死亡。基底細胞樣乳腺癌(BLBC)同樣具有免疫組化標記“三陰性”特征。它與TNBC有相似特性，但不完全相同，存在交叉重復。BLBC具有基底細胞基因表型，并不同程度地表達CK7、CK5/6、干細胞因子受體(c-kit)、p53等基因。因此，CK5/6和(或)CK14陽性表達成為BLBC病理診斷標準之一。也有文獻將CK5/6或EGFR陽性表達作為具有基底細胞樣表型乳腺癌的指標。TNBC和BLBC均高表達EGFR，而EGFR高表達則抑制細胞凋亡、促進血管新生，從而促進腫瘤發生、轉移和侵襲;乳腺癌患者若表達CK5/6或EGFR，其生存率明顯降低，預后往往極差。本實驗發現，TNBC組織內CK5/6、EGFR均高表達，而且HER2(0/1+)組TNBC中CK5/6、EGFR表達率均高于HER2(2+)組。另外，CK5/6或EGFR陽性表達者占50%(15/30)，也明顯高于HER2(2+)組，這些結果提示HER2(0/1+)組TNBC在免疫表型上更加具有BLBC的特征，但CK5/6、EGFR的表達在兩個實驗組均與臨床病理資料無顯著相關性。

表2TNBC HER2(0/1+)中基因表達與臨床病理特征之間的關系

臨床病理特征nHER(0/1+)組CK5/6+-PEGFR+-PVEGF+-PCOX-2+-PTOPⅡα+-P年齡/歲>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥5018414612126144810 <5012484810210266腫塊大小>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥2cm226168141481661012 ﹤2cm82626808044病理類型>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 浸潤性導管癌268188182062241214 其他40422222222組織分級>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 Ⅰ、Ⅱ102846828255 Ⅲ20614614146164911淋巴結轉移>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有18612810144162108 無12210210848448脈管侵犯>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有1441041010410477 無1641261012414279

表3TNBC HER2(2+)中基因表達與臨床病理特征之間的關系

臨床病理特征nHER(2+)組CK5/6+-PEGFR+-PVEGF+-PCOX-2+-PTOPⅡα+-P年齡/歲>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥5071616524334 <5082617534426腫塊大小>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 ≥2cm102828646428 ﹤2cm51405412332病理類型>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 浸潤性導管癌13310211947658 其他20202111102組織分級>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 Ⅰ、Ⅱ71616433425 Ⅲ82617625335淋巴結轉移>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有62424514233 無91809544527脈管侵犯>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05 有40422403113 無1138011655647

血管內皮生長因子能特異性促進血管內皮細胞增殖和血管、淋巴管的生成，并能提高血管通透性，在腫瘤的生長和轉移過程中起重要作用。已有研究證實，TNBC高表達VEGF，而且患者生存期往往更短。COX-2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在多種腫瘤中高表達，可促進腫瘤細胞增殖、抑制凋亡和促進血管新生、腫瘤播散[10]。同樣，COX-2在乳腺癌組織中高表達，且與預后相關[11]。最近有文獻報道[12]，TNBC中COX-2表達增高。本實驗結果發現，TNBC組織中VEGF和COX-2呈高表達，COX-2在HER2(0/1+)TNBC中表達也高于HER2(2+)，進一步提示COX-2高表達不僅與TNBC有關，而且可能與BLBC關系更密切，有可能作為BLBC未來的一個分子治療靶點。TOP是DNA代謝過程中催化DNA拓撲結構改變的重要的酶，同時也是多種化療藥物的靶點。乳腺癌中，TOPⅡα不僅在TNBC組織中高表達[3,13]，而且還可作為蒽環類藥物的療效預測指標以及乳腺癌的預后指標[14]。我們的實驗結果顯示TOPⅡα在HER2(0/1+)組表達率高于HER2(2+)組，提示蒽環類藥物可能對部分TNBC有效。

本實驗中，我們分別研究了HER2(0/1+)和HER2(2+)中這些基因表達與臨床病理特征之間的關系，結果顯示HER2(0/1+)中這些基因的表達患者年齡、腫瘤大小、病理學類型及分級、淋巴結轉移、脈管侵犯均無相關性，可能原因是標本量過低所導致。但就部分數據可言，提示我們這些基因在TNBC HER2(0/1+)和HER2(2+)中表達存在差異，可能與腫瘤的不同生物學行為存在某些聯系。

總之，本研究結果表明TNBC中，HER2不同表達狀態下，一些基因表達存在差異，這些基因表達差異不僅反映了TNBC不同的臨床生物學行為，而且可根據這些基因表達的差異，選擇合理的化療方案，對TNBC的預防和治療、改善預后等均有重要意義。

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Gene expression difference between HER2(0/1+)and HER2(2+)in the triple-negative breast cancers

XU Zengxiang,XIE Min,HUANG Xiaomei,ZHOU Fangfang,LU Linming

Department of Pathology,Wannan Medical College,Wuhu 241002 China

【Abstract】Objective：To investigate the expression difference of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2,TOPⅡα genes and their clinical significance between HER2(0/1+)and HER2(2+)in the triple-negative breast cancers(TNBC).Methods:Thirty cases of TNBC with HER2(0/1+)and 15 with HER2(2+)were included.Immunohistochemistry was performed to detect the expression of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2 and TOPⅡα in the tissue specimens obtained from the TNBC cases.Results:Up-regulated expression of CK5/6,EGFR,VEGF,COX-2 and TOPⅡα was observed in cases of HER2(0/1+),yet the difference was not statistically significant,and expression of these genes was not correlated with the patient′s ages，tumor size,type of pathology,histology grade,lymph node metastasis and vascular invasion(P>0.05).Conclusion:Expression of HER2(0/1+)appears somewhat different from that of in TNBC,and this biological marker may be an important theoretical support to molecular target therapy for TNBC.

【Keywords】triple-negative breast cancer;HER2;expression;differences

文章編號：·臨床醫學·1002-0217(2016)01-0022-04

基金項目：皖南醫學院中青年科研基金項目(WK201513)

收稿日期：2015-05-29

作者簡介：許增祥(1980-),男,講師,碩士,(電話)0553-3932474；(電子信箱)xuzx1980@126.com；

【文獻標識碼】【中圖號】R 737.9A

謝閔(1981-)，女，主治醫師，博士研究生，(電子信箱)76206423@qq.com，通訊作者.