CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及意義

錢金鋒，楊其昌，謝慧君，張曉娟，沈　屹，高翠玉

(1. 江蘇省南通市第一人民醫院，江蘇 南通 226001；2. 江蘇省南通瑞慈醫院，江蘇 南通 226010)

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CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及意義

錢金鋒1，楊其昌1，謝慧君2，張曉娟1，沈屹1，高翠玉1

(1. 江蘇省南通市第一人民醫院，江蘇 南通 226001；2. 江蘇省南通瑞慈醫院，江蘇 南通 226010)

[摘要]目的探討CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其臨床意義。方法采用免疫組織化學方法檢測118例乳腺浸潤性導管癌患者的癌組織及相應30例癌旁正常乳腺組織中CyclinD1和Survivin的表達情況，分析二者表達與乳腺浸潤性導管癌患者的臨床病理因素(年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級、TNM分期)、內分泌表型(ER、PR)及預后之間的關系。結果乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1和Survivin陽性表達率明顯高于正常乳腺組織(P均<0.05)。乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1和Survivin陽性表達與患者的淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈正相關，與其他臨床病理因素和內分泌表型無關。Kaplan-Meier生存曲線分析結果顯示，CyclinD1和Survivin陽性表達越強，無瘤生存時間越短(P<0.05)。結論CyclinD1和Survivin的過表達與乳腺浸潤性導管癌生物學行為密切相關，對判斷腫瘤的侵襲、轉移及預后具有一定價值。

[關鍵詞]乳腺浸潤性導管癌；CyclinD1；Survivin

乳腺癌居我國女性最常見的惡性腫瘤第2位，每年新發病例達16.9萬，每年女性因乳腺癌死亡的病例約4.5萬[1]。從微觀的角度研究乳腺癌轉移的分子機制，尋找乳腺癌轉移潛力及影響轉移的相關因子，對乳腺癌的診斷和治療具有十分重要的意義。本研究采用免疫組織化學方法檢測了乳腺浸潤性導管癌患者的癌組織及相應癌旁正常乳腺組織中CyclinD1和Survivin的表達情況，并分析了二者表達與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理特征、內分泌表型(ER、PR)及預后的關系。現將結果報道如下。

1臨床資料

1.1一般資料收集2002年11月—2010年8月南通瑞慈醫院病理確診的118例女性乳腺浸潤性導管癌患者標本，患者年齡32～84歲，平均51歲。同時切取其中30例癌旁正常乳腺組織作為對照。

1.2方法手術切除標本均用10%福爾馬林溶液固定，常規石蠟包埋切片，并進行HE和免疫組織化學染色。免疫組織化學染色采用SP法[2]，試劑均購于北京中杉金橋生物技術有限公司。檢測118例乳腺浸潤性導管癌患者的癌組織及相應30例癌旁正常乳腺組織中CyclinD1和Survivin的表達情況，分析二者表達與乳腺浸潤性導管癌患者的臨床病理因素(年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級、TNM分期)、內分泌表型(ER、PR)及預后之間的關系。

1.3結果判定標準CyclinD1陽性細胞著色定位于腫瘤細胞胞核，浸潤性腫瘤細胞無著色為陰性(-)，≤50%的腫瘤細胞胞核著色為弱表達(+)，>50%的腫瘤細胞胞核著色為強表達()[3]。Survivin陽性細胞著色定位于癌細胞胞漿，浸潤性腫瘤細胞無著色為陰性(-)，≤50%的腫瘤細胞胞漿著色為弱表達(+)，>50%的腫瘤細胞胞漿著色為強表達()[3]。ER和PR陽性細胞著色定位于腫瘤細胞胞核，腫瘤細胞無著色為陰性(-)，≤30%的腫瘤細胞胞核著色為弱表達(+)，>30%的腫瘤細胞胞核著色為強表達()[4]。

1.4統計學方法本研究中數據運用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計數資料的比較采用雙側卡方檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。對所有隨訪結果進行分析，采用Log-rank檢驗并做出Kaplan-Meier生存曲線。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1CyclinD1和Survivin蛋白表達情況CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導管癌組織中陽性表達的免疫組織化學染色結果見圖1～4。乳腺浸潤性導管癌癌組織中CyclinD1和Survivin的陽性表達率明顯高于正常乳腺組織(P均<0.05)，見表1。

圖1　乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1弱表達表現(SP，×200)

圖2　乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1強表達表現(SP，×200)

2.2CyclinD1和Survivin蛋白表達與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理因素及內分泌表型的關系CyclinD1和Survivin蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達與患者的淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈正相關(P均<0.05)，與患者的年齡、腫瘤部位、腫瘤大小和內分泌表型無相關性(P均>0.05)。見表2。

圖3　乳腺浸潤性導管癌組織中Survivin弱表達表現(SP，×200)

圖4　乳腺浸潤性導管癌組織中Survivin強表達表現(SP，×200)

例

2.3乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白表達的相關關系Survivin在CyclinD1陰性的乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達率為43.5%(20/46)，在CyclinD1弱表達的乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達率為68.8%(42/61)，在CyclinD1強表達的乳腺浸潤性導管癌中的表達率為72.7%(8/11)。相關分析顯示，Survivin在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達與CyclinD1陽性表達呈正相關(P<0.05)。見表3。

2.4乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白表達與預后的相關性本研究共隨訪到102例，隨訪1～98個月，隨訪率為86.4%。5年、3年、1年總生存率分別為65.7%(67/102)、81.4%(83/102)及95.1%(97/102)。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示：CyclinD1(-)、(+)及()表達者5年總生存率分別為80.0%(8/10)、43.4%(23/53)及10.3%(4/39)，CyclinD1陽性表達越強，無瘤生存時間越短(P<

表2　乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白表達與患者臨床病理特征及內分泌表型的關系　例

表3　乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1和Survivin蛋白

圖5　乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1表達對預后影響的生存曲線

3討論

圖6　乳腺浸潤性導管癌組織中Survivin表達對預后影響的生存曲線

乳腺癌的發生、發展是一個多基因參與、多階段、多步驟的復雜過程，包括癌細胞增殖、細胞程序性死亡減少等[5]。近年來的研究表明CyclinD1和Survivin是參與腫瘤細胞增殖與抗凋亡的重要因子[3，6-8]。

CyclinD1是周期素依賴激酶的調節因子，作用于G1期，參與G0/G1期的轉換調控，是細胞周期的正性調控因子[9]，能夠促進DNA的合成，加速細胞增殖，并且與多種腫瘤發生發展密切相關。CyclinD1是Wnt信號轉導通路中重要的靶基因，當Wnt信號通路被激活，使β-catenin在細胞漿中聚集并形成復合物[10]，從而激活CyclinD1基因轉錄[11]。有研究證實，CyclinD1的擴增與過表達與人體多種腫瘤有關[12-13]。本研究結果顯示，CyclinD1在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，表明CyclinD1陽性表達在乳腺浸潤性導管癌的發生發展過程中起著關鍵性作用。CyclinD1陽性表達與乳腺浸潤性導管癌患者的淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈正相關，與其他臨床病理特征和內分泌表型無顯著相關性，并發現隨著CyclinD1陽性表達的增強，患者無瘤生存時間縮短。提示CyclinD1的過表達預示著患者的預后不良及低生存率，進一步顯示CyclinD1在乳腺浸潤性導管癌的發生發展過程中的重要作用，對臨床的早期診斷和預后評估具有重要意義。

Survivin是近年來發現的凋亡蛋白抑制因子(IAP)的家族成員之一，在多數腫瘤中均有表達，具有細胞周期依賴性和明顯的組織選擇性，其與腫瘤新生毛細血管的形成有關[14]。Survivin高表達可抑制腫瘤細胞凋亡的多種誘導途徑，比如P53、Fas、 Casepase 等途徑，從而促進其增殖，腫瘤病程的進展同Survivin的表達密切相關[15-16]。Wu等[17]研究發現Survivin在腫瘤組織中高表達可以促進VEGF誘導新生毛細血管的形成、血管內皮細胞的增殖和毛細血管網形成，為腫瘤細胞的生長和轉移提供豐富的血供。 另外，Survivin在細胞有絲分裂中也有重要作用[18]，如卵裂溝的形成、微管的聚合和胞質的分裂；Survivin在腫瘤組織中強表達可以使腫瘤細胞的周期縮短，跳過G2/M期的檢查點，完成異常有絲分裂，使腫瘤細胞逃避凋亡，促進腫瘤細胞增殖[19]。本研究發現，Survivin在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁正常組織，提示其可能與乳腺浸潤性導管癌的發生相關，是其形成的重要因素；且Survivin表達與乳腺浸潤性導管癌患者的淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈正相關，與其他臨床病理特征和內分泌表型無顯著相關性，提示Survivin在乳腺浸潤性導管癌發生、發展和轉移等過程中起著重要作用。本研究結果還顯示，隨著Survivin陽性表達的增強，患者無瘤生存時間越短，提示Survivin基因可作為乳腺癌預后判斷的指標，其與患者的預后密切相關。

本研究結果還顯示，Survivin和CyclinD1在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達呈正相關，與文獻[20-22]的報道一致，提示Survivin和CyclinD1在細胞周期調控中既有獨立的功能，又有協同作用，其機制可能為：CyclinD1過度表達，激活細胞周期依賴激酶4，從而加速細胞從G1期進入S期，在G2/M期，Survivin抑制Caspase-3活性，抑制凋亡，加速增殖，共同導致細胞增殖與凋亡平衡破壞，從而發生癌變[23]。因此，在乳腺浸潤性導管癌前病變組織中聯合檢測Survivin和CyclinD1的表達，對于乳腺浸潤性導管癌的早期診斷、治療以及預后有重要意義。

綜上所述，CyclinD1和Survivin的過表達均與乳腺浸潤性導管癌生物學行為密切相關，對判斷腫瘤的侵襲、轉移及預后具有一定價值。臨床通過聯合檢測乳腺浸潤性導管癌組織中CyclinD1和Survivin表達情況，能夠有效預測患者的預后。

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Expression and significance of CyclinD1 and Survivin in breast invasive ductal carcinoma

QIAN Jinfeng1, YANG Qichang1, XIE Huijun2，ZHANG Xiaojuan1,SHEN Yi1, GAO Cuiyu1

(1.The First People's Hospital of Nantong, Nantong 226001, Jiangsu, China; 2.Nantong RICH Hospital, Nantong 226010, Jiangsu, China)

Abstract:Objective It is to explore the expression and clinical significance of CyclinD1 and Survivin in breast invasive ductal carcinoma. Methods The expressions of CyclinD1 and Survivin in 118 cases of the invasive ductal carcinoma of breast and 30 cases of the corresponding normal tissues adjacent to cancer were detected by immunohistochemistry. The relationship of CyclinD1 and Survivin expressions to age, tumor site, tumor size, lymph node metastasis, histological grade, TNM stage, endocrine phenotype (such as ER, PR) and prognosis of the patients with invasive ductal carcinoma of breast was analyzed. Results The positive rates of the CyclinD1 and Survivin in the invasive ductal carcinoma of breast were significantly higher than those in the corresponding normal tissues adjacent to cancer (P<0.05).The positive expression of CyclinD1 and Survivin in the invasive ductal carcinoma tissue was positively related with the lymph node metastasis, histological grade and TNM stage (P<0.05), not related with other clinical factors and endocrine phenotype (P>0.05). The Kaplan-Meier survival curve analysis showed that the positive expression of CyclinD1 and Survivin were stronger, the tumor free survival time was shorter (P<0.05). Conclusion CyclinD1 and Survivin overexpression were closely related to the biological behavior of breast invasive ductal carcinoma, judging tumor invasion, metastasis and prognosis of a certain value.

Key words:breast invasive ductal carcinoma; CyclinD1;Survivin

[收稿日期]2015-11-02

[中圖分類號]R737.9

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)11-1151-05

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.11.003

[作者簡介]錢金鋒，男，碩士，主治醫師，主要從事腫瘤病理方面的研究。[通信作者]楊其昌，E-mail：ntyangqc@163.com