食藥用菌母種培養(yǎng)基膠囊的研制

殷樂　張桐語　楊昌天　宮敬利

摘要：本項目根據(jù)食藥用菌企業(yè)菌種母種生產(chǎn)工藝，研究了一種能夠簡化生產(chǎn)流程，降低成本，自動化生產(chǎn)的食藥用菌母種培養(yǎng)基膠囊，確定了母種培養(yǎng)基膠囊的組成成分及制作工藝。

關(guān)鍵詞：食藥用菌；母種培養(yǎng)基；膠囊

基金項目：吉林農(nóng)業(yè)科技學院大學生科技創(chuàng)新科研項目項目（2015001）；吉林省教育廳“十二五”科學技術(shù)研究項目[吉教科合字（2012）第322號]

中圖分類號：S646 文獻標識碼：A DOI編號：10.14025/j.cnki.jlny.2016.10.035

從20世紀80年代我國建立起獨特的食用菌菌種技術(shù)體系，至21世紀初期，中國已成為世界上食用菌生產(chǎn)大國，年產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的70%以上。隨著食藥用菌需求量的增加，傳統(tǒng)食藥用菌菌種母種制作方法已落后食藥用菌企業(yè)的發(fā)展。早在1999年，何培新等人就開始了食用菌母種培養(yǎng)基試劑化制備的研究，意圖簡化母種培養(yǎng)基的制備流程。由于大部分食藥用菌菌絲生長對營養(yǎng)條件要求較高，目前食藥用菌母種的生產(chǎn)仍采用傳統(tǒng)煎煮制備方法。本項目由此出發(fā)，旨在利用現(xiàn)代分離提取技術(shù)所得產(chǎn)物，研制出一種適合食藥用菌企業(yè)自動化生產(chǎn)的母種培養(yǎng)基膠囊。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種黑木耳、香菇、靈芝菌種均由吉林農(nóng)業(yè)科技學院食藥用菌實驗室保存。

1.1.2 培養(yǎng)基配方采用平板培養(yǎng)法在PDA培養(yǎng)基上將黑木耳、香菇、靈芝的菌種擴大培養(yǎng)，選用適合食藥用菌生長的8種培養(yǎng)基進行試驗，PDA培養(yǎng)基為對照，詳見表1。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基制備制備試管母種培養(yǎng)基和平板母種培養(yǎng)基，置于25℃恒溫暗培養(yǎng)48小時，取無雜菌污染的培養(yǎng)基，備用。

1.2.2 接種培養(yǎng)方法參照張春霞等方法進行接種培養(yǎng)，菌絲生長狀況、生長速度實驗及顯微性狀觀察試驗采用平板培養(yǎng)法；菌絲萌發(fā)時間和滿管時間試驗采用試管培養(yǎng)法。

1.2.3 母種培養(yǎng)基膠囊制作工藝

1.2.3.1 培養(yǎng)基成分顆粒的制備節(jié)將培養(yǎng)基成分固體粉末制成顆粒劑，以改善粉末成分遇水易凝結(jié)成團，溶解性差的現(xiàn)象，結(jié)合培養(yǎng)基組成成分，確定顆粒劑制備的其它輔料為：2.6%CMC-Na，1%PVP，2.6%CMS-Na。采用等量遞增混合法，將培養(yǎng)基成分與輔料混合均勻，用適量95%乙醇軟材，制粒，烘干，過篩整粒，制備出培養(yǎng)基成分顆粒。

1.2.3.2 培養(yǎng)基膠囊的灌裝選擇市售00#無色透明淀粉硬膠囊殼，裝入培養(yǎng)基成分顆粒，每粒膠囊可裝入1.140克。

1.2.4 食藥用菌母種培養(yǎng)基膠囊的檢測應(yīng)用將培養(yǎng)基膠囊放入18毫米×150毫米試管中，加入13毫升純凈水，121℃，30分鐘高溫滅菌，擺斜面冷卻成母種培養(yǎng)基，接種，25℃恒溫暗培養(yǎng)，觀察菌絲的生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基中菌絲的生長狀況及顯微性狀

黑木耳菌種從菌絲密度、顯微性狀等五方面比較試驗組與CK組及試驗組相互之間的差異。M3、M6、M8三組培養(yǎng)基中黑木耳菌絲稠密；M4、M6、M7、M8四組培養(yǎng)基中黑木耳菌絲顏色較淺、分枝少，其老化程度低，菌絲活性強（見表2）。

2.2 不同培養(yǎng)基中菌絲的生長速度（見表3）

9種培養(yǎng)培養(yǎng)黑木耳菌絲有顯著性差異，培養(yǎng)基M6的生長速度最高，M8上菌絲的生長速度均值與之接近，M3次之。因此，適合黑木耳菌絲生長最好的培養(yǎng)基是M6，其次是M8、M3。表明黑木耳菌絲對培養(yǎng)基營養(yǎng)成分有較高的要求，以大豆蛋白胨、豆粞粉作為氮源，以葡萄糖、蔗糖作為碳源的培養(yǎng)基能使黑木耳菌絲較好的生長。

2.3 不同培養(yǎng)基中菌絲的萌發(fā)時間及滿管時間

黑木耳菌絲在培養(yǎng)基M4、M5上的萌發(fā)時間最長，菌絲滿管時間也是最長；9種培養(yǎng)基上菌絲滿管時間差異明顯，M3、M6、M7、M8培養(yǎng)基滿管時間最短，M2、M1、CK培養(yǎng)基滿管時間次之，見表4。

2.4 不同培養(yǎng)基中菌絲生長的均一性

食藥用菌菌絲在母種培養(yǎng)基上不僅要求菌絲生長稠密、長勢長速好，而且要求菌絲生長速度和長勢均一。黑木耳菌絲生長速度和滿管時間的方差分析見表4，菌絲在9種培養(yǎng)基上的生長速度方差差異較大，依次為cK→M6→M8→M7→M1→M2→M5→M4→M3。菌絲生長速度方差小，表明變異性小，說明培養(yǎng)基均一性。從表4可知，CK組培養(yǎng)基上菌絲生長均一性好，M6、M7培養(yǎng)基與之相近，說明M6、M7培養(yǎng)基較為適合黑木耳菌種生長。

2.5 不同食藥用菌在膠囊培養(yǎng)基上的生長狀況

黑木耳、香菇、靈芝三種食藥用菌在J6、J8培養(yǎng)基上菌絲分布情況及菌絲密度差異較大（表5），J6、J8培養(yǎng)基其碳源成分不同，在制粒時，蔗糖黏合性較葡萄糖好；在膠囊溶解中，J8培養(yǎng)基膠囊顆粒較J6培養(yǎng)基膠囊顆粒分布均勻，造成兩種膠囊培養(yǎng)基菌絲生長狀況差異。

3 結(jié)論與討論

香菇易生長的食用菌，黑木耳、靈芝是生長條件要求高的食藥用菌，其三者菌種在18膠囊培養(yǎng)基上均表現(xiàn)出了良好的生長狀況，反映出J8膠囊培養(yǎng)基適合大部分食藥用菌菌種母種培養(yǎng)。J8膠囊培養(yǎng)基組成成分為（70粒00#膠囊）：大豆蛋白胨7.5克，蔗糖20.0克，酵母粉2.0克，KH₂PO₄3.0克，MgS041.5克，瓊脂20.0克，CMC-Na1.5克，PVP0.6克，CMS-Na1.5克。

膠囊培養(yǎng)基采用顆粒制劑的工藝制成，在工業(yè)化生產(chǎn)中，采用制粒機、膠囊自動灌裝機等現(xiàn)有工業(yè)生產(chǎn)設(shè)備就可實現(xiàn)自動化生產(chǎn)。片劑、丸劑等其它劑型是否更加適合母種培養(yǎng)基的制作，還要進一步探究。培養(yǎng)基膠囊顆粒劑的制作工藝，還可以進一步優(yōu)化。

膠囊培養(yǎng)基適用于黑木耳、靈芝等大部分食藥用菌母種培養(yǎng)基的制作，是否存在食藥用菌菌種生長不適宜的情況，還需進一步的研究。黑木耳、香菇、靈芝三種食藥用菌在膠囊培養(yǎng)基上生長狀況良好，對于實際生產(chǎn)中，以此母種制成的原種及栽培種生長狀況是否有影響，還需進一步研究。