通痹膏的提取工藝研究

劉鳳樂 楊忠進 謝建苗 王蕊蕊 高文全??

摘要：目的 優選通痹膏的最佳提取工藝。方法 采用L9（34）正交試驗法，考察加水倍量、煎煮時間和煎煮次數3個因素，以提取物干浸膏得率為考察指標，優選確定最佳提取工藝。結果 最佳提取工藝為A3B2C3，即加水倍量12倍，煎煮時間90 min，煎煮次數3次。結論 通過驗證實驗，通痹膏提取工藝合理可行，所優選的提取工藝條件提取浸膏得率較高，能夠較好的保證有效成分提取率。

關鍵詞：通痹膏；正交實驗；提取工藝

中圖分類號：R284 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2016）06-0073-03

通痹膏是根據本院臨床驗方所研制的院內中藥制劑，由忍冬藤、透骨草、木瓜、桂枝等藥物組成，用于中老年風濕痹痛，腰腿疼痛等病癥。痹證[1]，正如《素問·痹論》所云：“風寒濕三氣雜至，合而為痹也”。是因為感受風寒濕熱之邪引起的以肢體、關節疼痛、酸楚、麻木、重著以及活動障礙甚或關節腫大灼熱等為主要癥狀的病癥，臨床上具有漸進性或反復發作的特點。其病機主要是氣血閉阻不通，肌肉關節失于濡養所致。西醫治療痹證所采用的方法是抗炎鎮痛與激素治療，重點是解除患者的癥狀，如疼痛、腫脹、功能缺失；而中醫則側重于病因、病機治療，如祛風、除濕、散寒、活血、通絡、扶正等，尤其是西醫的激素治療與中醫的扶正治療幾乎是正相反的，一個是運用免疫抑制劑；一個是增強免疫功能。而且西藥治療痹證會帶來些許副作用，從而影響患者的身體，不宜長期使用。通痹膏外敷于局部，經透皮吸收后控制和緩解疼痛，標本兼治，對于長期用藥的患者來說比較合適。為更加方便患者的攜帶使用，改變原有應用方式，對通痹膏的提取工藝進行研究，為該劑型進一步研究奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AR423DCN電子天平（奧豪斯儀器有限公司）；DV215CD電子天平（奧豪斯國際貿易有限公司）；MB54鹵素水分測定儀（奧豪斯儀器有限公司）；C21-ST2118電磁爐（廣東美林生活電器有限公司）；SUPERwscYLRO-3000MZ水處理系統（誼利廣州有限公司）；H.H.S型電熱恒溫水浴鍋（上海醫療器械五廠）。

1.2 試藥 藥材購于云南白藥集團股份有限公司中藥飲片分公司（由中藥庫采購，經趙愛梅副主任藥師鑒定均為合格品）。

2 方法與結果

2.1 提取方法的選擇 結合臨床應用經驗和生產條件，組方藥材分為兩部分，一部分為貴重藥材或主要化學成分不宜煎煮藥材打成細粉入藥，另一部分主要含有機酸類、皂苷類等極性較大成分藥材采用水煎煮。

2.2 L9（34）正交試驗的設計[2～5] 根據煎煮法的條件選擇加水倍量（A）、提取時間（B）及提取次數（C）3個條件為考察因素，各因素根據實際情況均取3個水平，以提取物干浸膏得率為評價指標，篩選最佳提取工藝，因素水平表見表1，L9（34）正交實驗安排表見表2。

2.3 稠浸膏水分含量測定方法 采用鹵素水分測定儀測稠浸膏水分含量，該儀器可用來測量任何物質含水量。

2.3.1 鹵素水分測定儀的操作原理 該儀器的操作是根據熱解重量原理。開始，儀器測量樣品重量，內部的鹵素加熱單元和水分蒸發器快速干燥樣品。在干燥過程中，儀器持續測量并顯示結果。干燥完成后，結果以水分含量%、干重%、重量和回潮率%顯示。

2.3.2 水分測定儀測量條件 ①溫度程序：階梯；②干燥溫度：0～4 min，升至200℃，4 min后降至105℃；③關閉模式：60 min；④測量時間：5 min。

2.4 浸膏得率的測定 按照L9（34）正交表安排實驗，分別精密吸取9組實驗一定體積的提取液，置于已干燥至恒重的蒸發皿中，加熱濃縮至稠浸膏（含水量約為40%～60%），轉移至水分測定儀，測出含水量，計算出浸膏得率。

2.5 工藝流程

2.6 提取工藝優選[6～8]依處方組成配比稱取藥材，先浸泡30 min，然后按L9（34）正交表安排試驗，進行煎煮提取，將煎煮所得溶液濃縮得浸膏，分別計算浸膏得率，分析結果見表2，表3。

結合極差分析表和方差分析表，以提取物干浸膏得率為考察指標，各指標因素的主次順序為：C>A>B，提取過程中提取次數對試驗結果有極顯著性影響，加水量對試驗結果有顯著性影響，提取時間對試驗結果影響不大，結合K值越大的工藝條件越有利于浸膏的提取，確定通痹膏提取條件為A3B2C3。

2.7 驗證實驗 按最佳工藝條件A3B2C3進行驗證實驗，兩次實驗平均結果為17.297%，實驗結果較為理想，說明該工藝條簡單可行。而且操作簡單、方便易行，適合大規模生產。從生產的綜合效益出發，考慮到節能降耗、縮短生產周期等因素，最終確定了各因素的最佳水平組合。

2.8 追加實驗[9～10] 由直觀分析表和方差分析表可以看出，實驗結果顯示3個因素的最大K值都落在最高水平上，由于提取時間對實驗結果的影響沒有顯著性差異，所以對加水量和提取次數這兩個因素分別進行追加實驗，即在最佳提取工藝 A3B2C3基礎上分別將加水量12倍換為14倍和將提取次數3次換成4次，2組實驗，分析結果見表4，圖1。

由表4可以看出，14倍量水和提取4次2組實驗的浸膏得率與2次驗證實驗的平均浸膏得率17.297%相比并無顯著差異，結合圖1，可以看出，加水量10倍以上變化趨勢漸緩，提取次數趨勢變化也放緩，綜合考慮實驗的嚴謹性、實際生產的合理性，多次提取有可能含大量雜質，所以就不再繼續追加實驗，確定最佳提取工藝為A3B2C3。

3 討論

3.1 提取方法的討論 通痹膏是由忍冬藤、桂枝等中藥組成，其部分藥材為貴重藥材、脂溶性有效成分含量較多，部分藥材為含有機酸類、皂苷類等極性較大有效成分，鑒于藥物的主要化學成分的有效溶出，考慮了幾種提取方法，包括水提醇沉法、超聲提取、微波提取、乙醇回流提取、蒸餾法提取揮發油，因為是醫院制劑，儀器設備不足，沒有乙醇提取和回收裝置，結合臨床用藥方便及療效，最終選擇將貴重藥材和脂溶性有效成分含量較多藥材打粉，含極性較大有效成分藥材用水煎煮。并且，藥材浸泡30 min的吸水量，經多次實驗驗證可忽略不計。

3.2 評價指標的選擇 通痹膏組方由將近20味藥材組成，組方復雜，且“君藥”均以粉末入藥，提取部分藥材多為“臣、佐、使”藥，含有10多味藥材，無法確定具體以哪一個有效成分或有效部位作為評價指標，最終選擇水煎煮經常采用的提取物干浸膏得率為評價指標。

3.3 最佳提取工藝的確定 正交試驗的極差分析結果顯示3個因素都落在最高水平上，只有加水量和提取次數對實驗有顯著性影響，而提取時間對實驗無顯著性影響。所以就在加水量和提取次數上對實驗進行追加，結果顯示與最佳提取工藝（A3B2C3）無顯著差性異，再從生產的綜合效益出發，考慮到節能降耗、縮短生產周期等因素，最終確定各因素的最佳水平組合為A3B2C3。為醫院制劑通痹膏的申報和生產提供了相應依據。

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（收稿日期：2016-04-15）