面包中丙酸鈣的測定液相色譜條件優化

王麗珊　何土芬　黃漢中

丙酸鈣是一種新型食品添加劑，是聯合國糧農組織和世界衛生組織批準使用的可靠安全的食品和飼料用防霉劑。對菌革蘭氏陰性菌、黃曲霉素、細菌及霉菌等具有廣泛的抗菌作用，丙酸鈣可用作食品及飼料的防霉劑，用于面包及糕點的保存劑。丙酸鈣易于與面粉混合均勻，在作為保鮮防腐劑的同時又能提供人體必需的鈣質，起到強化食品的作用。根據GB2760-2010《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》規定，丙酸鈣允許用于生濕面制品，豆類制品，醋，醬油，面包，糕點飲料等食品中。本文意在研究面包中丙酸鈣的檢測方法。

食品中丙酸鈣常用的檢測方法有氣相色譜法，高效液相色譜法。目前氣相色譜法檢測丙酸最為常見，由于氣相色譜法前處理較繁瑣，實驗成本較高，而GB/T23382-2009《高效液相色譜法測定面包中的丙酸鈣》前處理簡便，以超純水作為溶劑，無毒，低成本，但該方法得出的效果不佳，回收率78%～83%，本研究著重對色譜檢測條件進行優化改良，提高了檢測的分離度及回收率，能滿足實驗室中大批量樣品檢測。

由于丙酸鈣微溶于有機試劑，易溶于水，所以選用超純水作提取溶劑。使用超聲提取能使分子運動加劇，提取效果更徹底。水作提取劑時加入磷酸溶液，可使丙酸鈣酸化成丙酸而被檢測。

材料及方法

設備與試劑。設備：DIONEX P680戴安高效液相色譜儀（配有紫外監測器）；超聲波水浴SY-1030F；超純水器M-illi-Q System；電子天平；離心機CT14RD；攪拌器飛利浦HR1608；具塞50ml比色管；Ph試紙；0.45μm微孔濾膜。

試劑：甲醇（色譜純）；磷酸磷酸氫二銨（分析純）配備1.5g/磷酸氫二銨溶液，用1mol/L磷酸溶液調ph2.7-3.5（現配現用），經0.45μm微孔濾膜過濾；丙酸鈣標準品（99.0%）1.1.3標準儲備液（10mg/ml）

樣品選用方法

樣品處理。直接浸提法：把方包搗碎攪拌均勻，準確稱取5g（準確至0.01 g）至50ml具塞比色管加入20ml水，加入1mol/L磷酸溶液0.5ml，混勻，經超聲浸提30min后，用1mol/L磷酸溶液調ph至3左右，用水定容至刻度，搖勻。全部轉移至50ml具塞塑料離心管中，以轉速4500r/min離心5min，取上清液，經0.45μm微孔濾膜過濾，待測。

色譜條件。流動相的確定：加標：往稱好的試樣]組（A1，A2，A3），2組（A4，A5，A6）中分別準確加入丙酸標準溶液（10mg/ml）1.00ml，即加標量為0.5mg/ml，樣品空白A7，A8，按上述方法一并處理待測。

1組相色譜條件：C18柱（安捷倫AICHROMBondC18 150mm*4.6mm/5μm）；流動相1.5g/L磷酸氫二銨溶液：甲醇（90：10）等度洗脫；紫外檢測波長214nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量20μl。

2組相色譜條件：C18柱；流動相1.5g/L磷酸氫二銨100%平衡1min，1-4.1min甲醇上升至10%，磷酸氫二銨降至90%，4.1-5min甲醇10%，磷酸氫二銨90%等度，5-7min磷酸氫二銨上升至1 00%，平衡4min；紫外檢測波長214nm；流速1.0ml/min柱溫：30℃；進樣量20μl。

結果與分析

本結果表明梯度洗脫的組2丙酸回收率明顯高于等度的組1，峰形堅銳，對稱性好，出峰時間在9.107。

樣品浸提時加入磷酸溶液使樣品中丙酸鈣轉化成丙酸便于提??；前期實驗表明流速為1.0ml/min校準曲線相關性，分離效果最為理想，故本實驗選用該流速作進一步研究；相對氣相色譜法，液相色譜法前處理更為簡便，無毒，節約實驗成本，且經實驗優化色譜條件后回收率高而穩定，在工作有較強的可操作性及實用性。