乙型肝炎病毒檢測方法的研究現狀

黎燕瓊

【摘要】 目前乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是一個較嚴重的公共衛生問題之一。全球有近3億HBV攜帶者，我國占45%，準確、及時地檢測HBV，對控制HBV傳播、提高診療效果非常重要。隨著HBV檢測方法的不斷發展，臨床已廣泛開展與其相關的檢測技術，對防治HBV感染發揮了重要作用。目前HBV的檢測方法主要有電子顯微鏡法、免疫學法、分子生物學法。本文對HBV幾種檢測方法進行綜述。

【關鍵詞】 乙型肝炎病毒； 檢測方法

中圖分類號 R512.6 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2016）8-0159-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.8.091

乙型病毒性肝炎是一種廣泛傳播、危害嚴重的傳染性疾病，其病原體是HBV，HBV主要經血液和血制品等傳播、母嬰傳播及接觸傳播。HBV感染是一個世界性的公共衛生問題，全球有近3億HBV攜帶者，我國占45%[1]。急性乙肝有20%會轉化為慢性乙肝，進而可能發展為肝硬化和肝癌[2]。HBV屬嗜肝DNA病毒科，基因組長為3.2 kb。HBV基因組是不完全閉合環狀雙鏈DNA，是目前已知感染人類最小的DNA病毒[3]。HBV具有嚴格種屬及器官特異性，感染人體后侵襲的主要是肝細胞，并在肝細胞內定居復制。目前認為機體免疫調節紊亂和免疫功能低下是HBV持續存在并形成慢性肝細胞損傷的主要原因[4]。

1 電子顯微鏡法

電子顯微鏡法主要包括常規電鏡法和免疫電鏡法。英國學者Dane于1970年使用電鏡發現了完整的感染性病毒顆粒，即Dane顆粒。常規電鏡法具有觀察比較直觀、標本用量小、制樣速度快的特點，但由于其觀察靈敏度較低而要求病毒在標本中大量存在，該法在日常應用中受到一定限制。免疫電鏡術是將免疫化學技術與電鏡術結合，是在超微結構水平下觀察和研究抗原、抗體結合定位的一種方法，該方法的敏感性較常規電鏡法高，能提高HBV的檢出率，但該方法對操作者的技術要求較高，樣本制備過程較復雜[5]。由于電子顯微鏡檢查難以在臨床常規開展，故檢查HBV感染一般不用該類方法。

2 免疫學法

HBV感染的病原學診斷方法臨床上最常用的是檢測HBV標志物。傳統的兩對半即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb是HBV免疫標志物的血清學檢查的常規項目，近年來有文獻[6-8]報道前S1抗原與HBV、DNA及HBeAg三者間有顯著的相關性，可作為補充性免疫指標。目前常用的免疫學檢測有酶免疫法（EIA）、微粒子酶免分析法（MEIA）或化學發光法（CIA）等，臨床應用最廣泛的方法是ELISA和CIA。

早期的放射免疫法（RIA）有較高的檢測靈敏度，缺點是操作復雜、標記物不穩定、對人體及環境造成放射性污染。逐步發展起來的有酶聯免疫吸附技術（ELISA）、膠體金免疫層析技術（CICA）、時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）、微粒子酶免疫分析（MEIA）及電化學發光免疫法（ECLIA）[3]。其基本原理是將酶與抗體或抗原結合成酶標記抗體或抗原，在酶標抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應完成后，加入酶的相應底物，通過酶對底物的顯色反應，對抗原（抗體）進行定位、定性或定量的測定分析，上述各種方法只是標記物和吸附表面的不同。固相放射免疫法（SPRIA）靈敏度高，比ELISA法的靈敏度高20倍，檢測生物活性物質可達pg水平，但因對環境造成污染，同位素穩定性差等原因，已很少用于HBV標志物的檢測。ELISA法特異性高，靈敏度一般認為在0.05 ng/ml水平，目前應用最廣，其優點為標記的試劑無放射性危害且比較穩定，但ELISA法易受酶純度和外界環境影響[4-5]。CICA標志物為膠體金，利用層析技術來檢測抗原或抗體，優點是不需儀器，操作快速、簡便，有助于減少醫源性HBV感染，主要用于急診患者創傷性操作前快速過篩檢測[9]。

近年來發展起來的TRFIA是稀土離子標記抗原或抗體、核酸探針和細胞等為特征的靈敏度遠超過放射性同位素的檢測技術，且具有標記物制備簡便、無放射性污染、存儲時間長、操作流程短、不受樣品自然熒光干擾、標準曲線范圍寬、檢測重復性好等優點，是一種理想的乙肝兩對半定量檢測方法，特點是能檢測低水平的HBV標志物，在臨床中值得推廣[10]。富宏然[11]報道TRFIA法檢測的特異性、敏感性均比ELISA法高。