急性腦梗死患者血清HSP70水平變化及意義

張蕓，段勁峰，陳忠倫，羅倩，文世全 (綿陽市中心醫院，四川綿陽 621000)

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急性腦梗死患者血清HSP70水平變化及意義

張蕓，段勁峰，陳忠倫，羅倩，文世全 (綿陽市中心醫院，四川綿陽 621000)

摘要：目的觀察急性腦梗死患者血清熱休克蛋白70(HSP70)水平變化，并探討其意義。方法將61例急性腦梗死患者作為觀察組，30例健康者作為對照組，采用酶聯免疫吸附法檢測觀察組發病后第1～3天、第7、14、28天及對照組血清HSP70，采用Spearman秩相關檢驗分析觀察組血清HSP70水平與NIHSS評分、腦梗死體積、Barthel指數評定量表評分的關系。結果與對照組相比，觀察組血清HSP70水平在發病后第1～3天、第7、14、28天均高(P均<0.05)。觀察組發病后第1～3天、第7、14和28天血清HSP70水平與NIHSS評分均呈正相關(r分別為0.365、0.628、0.371、0.608，P均<0.05)，與腦梗死體積均呈正相關(r分別為0.402、0.437、0.411、0.398，P均<0.05)。觀察組發病后第7、28天血清HSP70水平與BI評分呈負相關(r分別為-0.349、-0.621，P均<0.05)。以6.33 ng/mL為界值，血清HSP70診斷急性腦梗死的靈敏度為73.3%，特異度為96.7%,ROC曲線下面積為0.943 3(P<0.000 1)。結論急性腦梗死患者血清HSP70水平升高，監測血清HSP70水平有助于判斷急性腦梗死病情嚴重程度和預后。

關鍵詞：熱休克蛋白70；急性腦梗死；神經功能缺損；腦梗死體積

熱休克蛋白70(HSP70)是急性腦卒中腦損傷過程中的重要參與者[1,2]，動物實驗研究[3]發現其在急性腦卒中大鼠腦組織中的表達量明顯升高，但是關于HSP70在急性腦卒中患者血清中的表達情況目前相關研究較少。本研究觀察了急性腦梗死患者血清HSP70水平變化，并對其在急性腦梗死患者的病情監測的臨床意義進行探討。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2013年2月～2014年11月在綿陽市中心醫院接受住院治療的急性腦梗死患者61例(觀察組)，診斷均經過CT和MRI確診。觀察組患者為首次發病，發病時間到入院時間均<1 d，排除伴有自身免疫性疾病及嚴重感染的患者，排除使用免疫抑制劑或者免疫增強藥物的患者，排除合并有嚴重心、肝、腎功能衰竭的患者。另選擇30例同期健康體檢者作為對照組，頭顱CT或MRI檢查無腦梗死、腦出血，無中樞神經系統感染、變性、癲癇、腫瘤以及自身免疫性疾病。觀察組男31例、女30例，年齡(74.40±18.50)歲，吸煙18例，BMI(26.0±3.6)kg/m2，高血壓病50例，總膽固醇(4.90±1.12)mmol/L，LDL(3.02±0.91)mmol/L，HDL(1.22±0.27)mmol/L，甘油三酯0.75～1.72 mmol/L，肌酐(1.0±0.3)mmol/L，腦梗死面積(27.4±46.6)cm3。對照組男16例、女14例，年齡(74.70±4.46)歲，吸煙10例，BMI(26.2±3.4)kg/m2，高血壓病24例，總膽固醇(5.15±0.88)mmol/L，LDL(2.89±0.78)mmol/L，HDL(1.47±0.28)mmol/L，甘油三酯0.94～1.58 mmol/L，肌酐(0.88±0.20)mmol/L。兩組一般資料具有可比性。本研究均經患者或其家屬知情同意，研究方案經過我院倫理委員會批準。

1.2血清HSP70檢測觀察組分別于發病后第1～3天、第7、14和28天按照美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)[4]進行神經功能缺損程度評分，用Barthel指數評定量表(BI)[5]評估患者日常生活能力，觀察腦梗死體積。觀察組進行評分的同時采集患者的肘靜脈血10 mL，裝入加EDTA的離心管中，對照組于晨起空腹靜脈抽血10 mL，3 000 r/min離心10 min，將分離的血清置于-80 ℃冰箱中保存待檢。HSP70酶聯免疫吸附法檢測試劑盒購自聯科生物技術有限公司，檢測操作步驟嚴格按照說明書進行。測量前首先將試劑盒及樣本平衡至室溫，采用標本稀釋液按1∶1將待測標本稀釋，吸取50 μL稀釋后標本加入反應孔內，然后加入稀釋好后的標準品50 μL于反應孔混勻，立即加入50 μL的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37 ℃溫育1 h；甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。然后每孔加入80 μL的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37 ℃溫育30 min。甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。每孔加入底物A、B各50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃溫育10 min。避免光照。取出酶標板，迅速加入50 μL終止液，加入終止液后應立即測定結果。在450 nm波長處測定各孔的OD值。以OD值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標繪制標準曲線，根據血漿樣品的OD值在標準曲線上查出其對應的濃度。

2結果

兩組血清HSP70水平比較見表1。觀察組發病后第1～3天、第7、14和28天血清HSP70水平與NIHSS評分均呈正相關(r分別為0.365、0.628、0.371、0.608，P均<0.05)，與腦梗死體積均呈正相關(r分別為0.402、0.437、0.411、0.398，P均<0.05)。觀察組發病后第7、28天血清HSP70水平與BI評分呈負相關(r分別為-0.349、-0.621，P均<0.05)。采用ROC曲線分析觀察組發病后第1～3天血清HSP70水平發現，以6.33 ng/mL為界值，血清HSP70診斷急性腦梗死的靈敏度為73.3%，特異度為96.7%,ROC曲線下面積為0.9433(P<0.000 1)。

表1　兩組發病后血清HSP70水平比較

注：與對照組相比，*P<0.01。

3討論

HSP70的分子量約為70 kDa，主要由兩個結構域構成：一個結構域是富含碳的肽鏈的結合位點，另外一個結構域是ATP的結合位點，這個位點可以同時控制ATP的結合過程。在正常情況下，HSP70主要位于細胞質內，HSP70在應激和細胞外刺激等作用下迅速進入細胞核內并且包圍核仁，當細胞應激消除后，HSP70從細胞核內返回到細胞質[6]。分子伴侶功能是HSP70在細胞中執行的最基本的生理功能，主要通過與新生、未折疊、聚集或者錯誤折疊的蛋白質相結合，減少不溶性聚集物的產生，促進正確的肽鏈折疊，促進某些變性蛋白的降解和清除。此外，HSP70還可以發揮抗凋亡作用，主要與調節凋亡相關蛋白和抗凋亡蛋白的表達有關。HSP70可以提高細胞對應激原的耐受性[7]。HSP70在損傷的中樞神經系統組織內表達量顯著升高，使用外源性的藥物進一步誘導HSP70的表達，可以在氧化應激、創傷等導致的急性中樞神經系統損傷性疾病中發揮顯著的神經保護作用，缺失HSP70蛋白則加重腦損傷的程度[8,9]，在急性腦梗死動物模型中使用HSP70的誘導劑可以發揮顯著的神經保護作用[9～11]，可見，HSP70在中樞神經系統急性損傷性疾病中可以發揮顯著的神經保護作用。此外，HSP70不僅在損傷的神經組織內表達，其在腦外傷患者的血清中也存在高表達，并與患者病情的嚴重程度呈正相關，表明早期檢測HSP70的表達對于判斷中樞神經系統的病情輕重具有重要的意義。

以往對于腦卒中患者血清中HSP70的表達尚缺乏相關研究。本研究結果表明，急性腦梗死患者血清HSP70水平在發病后第1～3天的表達水平顯著高于對照組，之后呈現下降趨勢，這與急性腦梗死后腦組織內HSP70的表達現象具有一致性[12]，提示HSP70可能首先由神經細胞合成，然后通過破壞的血-腦屏障釋放入血。此外，本研究還發現急性腦梗死患者血清HSP70的表達水平亦與腦梗死體積存在正相關，提示早期檢測血清HSP70水平對于判斷急性腦梗死患者的病情嚴重程度具有一定的意義；血清HSP70水平與患者的神經功能預后同樣存在顯著相關性，提示早期檢測血清HSP70水平可能有助于判斷急性腦梗死患者的預后。ROC曲線分析結果表明HSP70對急性腦梗死患者的早期診斷具有一定指導意義。

綜上所述，急性腦梗死患者血清HSP70水平升高，血清HSP70水平有助于判斷急性腦梗死病情嚴重程度和預后。然而，由于本研究樣本量有限，且是單中心的研究，血清HSP70水平能否作為急性腦梗死損傷嚴重程度和預后判斷的指標，還需要以后大樣本、多中心的研究進一步去證實。

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(收稿日期：2015-09-20)

中圖分類號：R743.33

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)11-0065-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.11.025

基金項目：四川省衛生廳科研課題(130443，130446)。