哈蟆油發酵乳中蛋白質及氨基酸含量分析

劉同帥,邱智東,翁麗麗,郝　潔,翁　硯

(1.長春中醫藥大學,長春 130117；2.白求恩醫科大學制藥廠,長春 130012)

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哈蟆油發酵乳中蛋白質及氨基酸含量分析

劉同帥1,邱智東1,翁麗麗1,郝潔1,翁硯2*

(1.長春中醫藥大學,長春 130117；2.白求恩醫科大學制藥廠,長春 130012)

摘要：目的建立哈蟆油發酵乳中蛋白質及氨基酸含量分析方法。方法運用考馬斯亮藍法測定哈蟆油發酵乳中蛋白質含量，運用氨基酸自動分析儀測定哈蟆油發酵乳中氨基酸的含量。結果3批哈蟆油發酵乳蛋白含量分別為8.050 1、8.093 0、7.758 2 mg/mL。平均總氨基酸的含量為15.320 5 mg/mL。結論哈蟆油發酵乳中含有合成人體所需蛋白質及豐富的氨基酸。

關鍵詞：蛤蟆油發酵乳；考馬斯亮藍法；蛋白質；氨基酸

哈蟆油具有補腎益精，養陰潤肺的功效。哈蟆油發酵乳由現代生物技術制得，將哈蟆油中大分子蛋白類轉化為小分子物質，更利于人體吸收利用。

1材料

1.1樣品哈蟆油發酵乳，由長春中醫藥大學中藥藥劑實驗室提供。

1.2試劑BSA標準品(5 mg/mL)；考馬斯亮藍G-250；混合氨基酸標準溶液；95%的乙醇；85%的磷酸；HCl溶液(北京化工廠)。

1.3儀器旋渦混合器、紫外分光光度計、氨基酸自動分析儀。

2方法與結果

2.1蛋白質含量測定[1-4]

2.1.1對照品溶液的制備精密移取1 mL BSA標準品(5 mg/mL)，置于5 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度線，搖勻，得1 mg/mL的對照品溶液。

2.1.2供試品溶液的制備精密量取哈蟆油發酵乳2 mL，置于10 mL的容量瓶中，用去離子水定容至刻度線。

2.1.3顯色劑的配制考馬斯亮藍G-250染料試劑：稱取100 mg考馬斯亮藍G-250，溶于50 mL乙醇中，再加入85%的磷酸100 mL，用水稀釋至1 000 mL。

2.1.4線性關系考察分別精密加入BSA對照品溶液0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mL置于10 mL的具塞試管中，用去離子水補充至0.1 mL。再加入5 mL的考馬斯亮藍溶液，至于旋渦混合器上混勻。以去離子水作為空白，測定其在596 nm波長下的吸光度值，結果見表1。

表1　線性關系考察結果

以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程：A=0.485 38C+0.010 12，r=0.999 5。結果表明BSA對照品在0.2～1.0 mg/mL范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

2.1.5精密度考察精密量取BSA對照品溶液0.1 mL，依法連續測定6次，分別記錄其吸光度A值，計算RSD%。結果RSD值為0.10%，說明儀器的精密度良好，其測定結果真實可信。

2.1.6穩定性考察分別精密吸取BSA對照品溶液0.1 mL，供試品溶液0.04 mL，依法測定，分別記錄時間為0、4、8、12、16、20 min時對照品溶液和供試品溶液的吸光度值，并分別計算RSD%。結果對照品溶液的RSD值為0.19%，供試品溶液的RSD值為1.07%，二者在20 min之內的穩定性均良好。

2.1.7重現性考察取同一批號樣品，按供試品溶液的制備方法處理，平行處理6份，依法測定吸光度值，并計算RSD%。結果樣品的蛋白質含量平均值為8.422 4 mg/mL，RSD值為1.52%，表明此方法的重現性良好。

2.1.8加樣回收率考察精密吸取0.02 mL已知含量(8.422 4 mg/mL)的供試品溶液，共稱取6份，置于10 mL具塞試管中，以蛋白質和BSA對照品含量比例1∶1加入，依法測定吸光度值，計算加樣回收率。結果平均回收率為100.74%，RSD值為2.01%，說明此方法穩定可行。

2.2哈蟆油發酵乳蛋白質含量測定取3批哈蟆油發酵乳，按供試品溶液的制備方法處理，依法測定吸光度值，并計算其蛋白質含量。結果平均含量為7.967 1 mg/mL。

2.3氨基酸含量測定

2.3.1對照品溶液的制備準確吸取一定量的混合氨基酸基準液，稀釋到一定濃度，測定氨基酸標準溶液。

2.3.2供試品溶液的制備精密稱取樣品0.4 g置于水解管內，加入6 mol/L HCl溶液10 mL，用氮氣將水解管內的空氣排凈，置于110 ℃恒溫培養箱內水解22 h。水解完成后，常溫放置冷卻，將水解液轉移至50 mL容量瓶中，用去離子水反復沖洗水解管，并將洗液移入容量瓶中，加去離子水定容至刻度線，搖勻，過濾，準確稱取濾液0.5 mL，用氮氣吹干，0.02 mol/L HCl溶液1 mL溶解，微孔濾膜過濾，即得。

2.3.3測定法準確吸取20 μL混合氨基酸標準溶液及供試品溶液，用氨基酸自動分析儀進行測定。

2.4哈蟆油發酵乳中氨基酸含量測定取3批哈蟆油發酵乳，按供試品溶液的制備方法處理，按測定法進行測定，并計算其氨基酸的含量。結果見表2。

表2　氨基酸測定結果　mg/mL

3小結

哈蟆油中含有多種化學成分,其中主要成分是蛋白質[5-13],將哈蟆油利用現代生物發酵技術，制成新型保健品哈蟆油發酵乳，測得的其中蛋白質平均含量為7.967 1 mg/mL, 平均總氨基酸含量15.320 5 mg/mL。

哈蟆油發酵乳不僅改變了哈蟆油原有的口感，而且含有大量人體所需的蛋白質及氨基酸，能夠增強人體的免疫力,緩解體力疲勞,作為營養保健品，具有廣闊的發展前景。

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Analysis of protein and amino acid content of Oviductus Ranae in fermented milk

LIU Tongshuai1,QIU Zhidong1,WENG Lili1,HAO Jie1,WENG Yan2*

(1.Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China;2.The Pharmaceutical Factory,Norman Bethune Medical University,Changchun 130012,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for analysis of protein and amino acidcontent of Ranae Oviductus fermented milk.MethodsUsing Coomassie bright blue for determination of Ranae Oviductus fermented milk protein content,determination of the content of amino acids by automatic amino acid analyzer.ResultsThe three batch of Ranae Oviductus fermented milk protein content were 8.050 1,8.093 0,7.758 2 mg/mL.The average total amino acid content was 15.320 5 mg/mL.ConclusionRanae Oviductus in fermented milk containing synthetic human body needs protein rich amino acids.

Keywords：Ranae Oviductus fermented milk;Kaumas Bradford method;protein;amino acid

(收稿日期:2015-11-30)

文章編號：2095-6258(2016)02-0261-03

中圖分類號：R284.1

文獻標志碼：A

*通信作者：翁硯，女，工程師，電話-17804315162，電子信箱-weng1969@sohu.com

作者簡介：劉同帥(1991-)，女，碩士研究生，主要從事中藥學研究。

基金項目：吉林省科技發展計劃項目(20120912)。

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2016.02.014