Survivin與Smac聯(lián)合檢測在甲狀腺腫瘤中的表達及診斷意義

王保衛(wèi)

【摘要】 目的 探討抗凋亡因子Survivin與促凋亡蛋白Smac聯(lián)合檢測在甲狀腺腫瘤中的表達及臨床診斷意義。方法 80例甲狀腺腫瘤患者（患者組）及80例健康志愿者（對照組）為研究對象， 采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測技術(shù)， 對兩組甲狀腺細胞中Survivin與Smac的mRNA的表達率進行統(tǒng)計分析研究。結(jié)果 患者組的Survivin及Smac陽性率分別為65.00%及78.75%， 高于對照組的8.75%及25.00%， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）。結(jié)論 Survivin在惡性腫瘤患者腫瘤細胞中表達劇烈， 而Smac表達率則隨之下降， Survivin及Smac表達率與甲狀腺腫瘤患者腫瘤惡化、好轉(zhuǎn)、良性、惡性腫瘤區(qū)分等密切相關(guān)， 聯(lián)合檢測在診斷甲狀腺腫瘤方面具有很好的臨床應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】 甲狀腺腫瘤；Survivin；Smac；聯(lián)合檢測；診斷意義

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.10.025

甲狀腺腫瘤是臨床最為常見的內(nèi)分泌腫瘤之一， 隨著現(xiàn)代環(huán)境的惡化、人們生活節(jié)奏的加快加之不健康的生活作息、飲食習(xí)慣， 該疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢[1]， 尤其對女性的生命健康更是嚴重的威脅[2]。Survivin和Smac是一組重要的且功能相互拮抗的凋亡調(diào)控蛋白， 通過實時熒光定量RT-PCR檢測技術(shù)能夠精確的測量其在甲狀腺腫瘤患者腫瘤細胞中的表達效率與正常人體內(nèi)表達效率之間的差異， 從而確定Survivin與Smac聯(lián)合檢測在甲狀腺腫瘤中的表達及臨床診斷意義。本次實驗通過患者與健康志愿者的對照試驗展開探討， 現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2011年3月～2014年9月接收治療的80例甲狀腺腫瘤患者（患者組）及80例健康志愿者（對照組）為研究對象。患者組中男12例， 女68例；年齡16～71歲；病程1～4年。對照組中男11例， 女69例， 年齡15～73歲。兩組研究對象性別、年齡等一般資料比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 首先取患者甲狀腺腫瘤細胞以及志愿者甲狀腺細胞備用， 配置PCR反應(yīng)體系應(yīng)用SYBR Green Ⅰ熒光染料技術(shù)擴增待測基因及內(nèi)參基因， 然后按說明書應(yīng)用Survivin， Smac以及內(nèi)參引物逆轉(zhuǎn)錄成的cDNA。反應(yīng)體系總體積20 μl， 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變10 s， 分別以95及60℃進行5及34 s循環(huán)， 共計循環(huán)40次， 最后進行溶解曲線分析。設(shè)計陰性對照參考， 計算機分析Ct值， 即每個反應(yīng)管內(nèi)熒光強度達到系統(tǒng)認為的有效DNA合成時的循環(huán)數(shù)， 用以評定各因子mRNA的實時定量相對表達水平。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

患者組的Survivin及Smac陽性率分別為65.00%（52例）及78.75%（63例）， 顯著高于對照組的8.75%及25.00%， 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）。見表1。

3 討論

細胞凋亡是機體新陳代謝或自我調(diào)節(jié)的一種重要方式， 一旦人體原癌基因激活， 細胞正常生命周期就會紊亂， 通過非正常基因的表達， 抑制細胞凋亡蛋白正常功能， 導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[3]。現(xiàn)代臨床研究表明， 甲狀腺腫瘤的發(fā)生與性別、遺傳、體質(zhì)、生活環(huán)境、輻射等因素密切相關(guān)， 女性發(fā)病率顯著高于男性。甲狀腺腫瘤的好轉(zhuǎn)、惡化、轉(zhuǎn)移等可以根據(jù)體內(nèi)Survivin以及Smac的mRNA表達率來顯示， 其中Survivin陽性率與甲狀腺腫瘤惡化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移幾率呈正相關(guān)， 惡性腫瘤患者癌細胞中Survivin陽性率高達80%以上；Smac陽性率與甲狀腺腫瘤的好轉(zhuǎn)、抑制效果呈正相關(guān)， 良性腫瘤患者體內(nèi)Smac陽性率顯著優(yōu)于惡性腫瘤患者， 即Survivin以及Smac在癌癥患者體內(nèi)的表達呈負相關(guān)[4]。

Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的IAPs家族中的成員， 其病理機制在于對凋亡信號下游半光天冬酶-3（Caspase-3）和半光天冬酶-7（Caspase-7）產(chǎn)生抑制作用， 進而抑制細胞的凋亡， 從而使癌細胞無限增值分裂。該基因在正常細胞中的表達率很低， 幾乎不表達， 癌細胞中陽性率很高[5]， 這與本次研究結(jié)果一致。Smac是一種存在于線粒體并且調(diào)節(jié)細胞凋亡的蛋白質(zhì)。一方面 Smac通過抑制IAPs（包括Survivin）激活Caspase-9和Caspase-3而促進細胞凋亡；另一方面， Survivin能與Smac結(jié)合， 解除Smac對其他IAP成員的抑制作用[6]。本實驗研究結(jié)果顯示， Survivin以及Smac在甲狀腺細胞中的表達與甲狀腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)， 兩者之間通過互相調(diào)節(jié)， 共同參與甲狀腺癌變過程。

綜上所述， Survivin和Smac的檢測對甲狀腺腫瘤的生物學(xué)行為評估和判斷預(yù)后具有重要意義， 根據(jù)Survivin和Smac的mRNA在甲狀腺細胞中的表達率可以準確的診斷甲狀腺腫瘤， 達到早發(fā)現(xiàn)、早治療以及及時檢測病情變化的目的， 對于提高甲狀腺腫瘤臨床治療效率具有很好的臨床推廣前景。

參考文獻

[1] 黃堃， 龔衛(wèi)東， 王南鵬， 等. galectin-3、HBME-1、CK19及RET在甲狀腺腫瘤中的表達情況及其臨床價值. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2013， 20 （2）：156-160.

[2] 鄭榮壽， 張思維， 吳良有， 等.中國腫瘤登記地區(qū)2008年惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析.中國腫瘤， 2012， 21（1）：1-12.

[3] 陳輝， 王云云， 劉艷.復(fù)合熒光RT-PCR技術(shù)檢測TBX2和p53在甲狀腺癌表達及臨床診斷意義.中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué)， 2013， 22 （9）：777-779.

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[6] 李世森， 秦思達， 王希方， 等.食管鱗狀細胞癌中Survivin與Smac蛋白的表達及臨床意義.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)， 2013， 21（1）：75-78.

[收稿日期：2015-11-09]