血清學(xué)技術(shù)在布魯氏菌病診斷上的應(yīng)用研究現(xiàn)狀及評(píng)價(jià)

摘 要：布魯氏菌病（以下簡(jiǎn)稱“布病”）是布魯氏菌屬細(xì)菌引起的能在人和動(dòng)物之間相互傳染的疾病，這種疾病病程較長(zhǎng)，病情反復(fù)，廣泛分布于世界各個(gè)場(chǎng)所。家畜染上布病不僅會(huì)對(duì)畜牧業(yè)帶來一定的危害，而且嚴(yán)重威脅人類的健康。目前醫(yī)學(xué)上對(duì)此病的診斷主要依靠血清學(xué)技術(shù)。本文將對(duì)血清學(xué)技術(shù)在布病診斷上的應(yīng)用研究現(xiàn)狀及評(píng)價(jià)進(jìn)行研究。

關(guān)鍵詞：布魯氏菌病；血清學(xué)技術(shù)；現(xiàn)狀

中圖分類號(hào)：R516.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

1.凝集實(shí)驗(yàn)

（1）試管凝集實(shí)驗(yàn)（SAT）。試管凝集實(shí)驗(yàn)可以在早期對(duì)發(fā)生在人類和動(dòng)物身上的布病進(jìn)行診斷，并且可以檢測(cè)出人類和動(dòng)物感染布病獲得免疫后身體出現(xiàn)的血清抗體。SAT具有穩(wěn)定性和特異性，主要檢測(cè)人和動(dòng)物體內(nèi)的IgG2和IgM型抗體，其中檢測(cè)IgM的敏感程度大于IgG2。如果單一使用，會(huì)造成結(jié)果的假陽性或假陰性。

（2）平板凝集實(shí)驗(yàn)（PAT）。PAT也是布病常規(guī)的血清學(xué)診斷方式，可以對(duì)布病進(jìn)行普查，實(shí)驗(yàn)過程簡(jiǎn)易方便，敏感程度高于SAT，但有的情況下會(huì)發(fā)生非特異性凝集。

（3）虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)（RBPT）。RBPT可抑制非特異性反應(yīng)的IgM與IgG的活化，實(shí)驗(yàn)成本不高，適用布病的大范圍檢疫；不足之處是不能鑒定布病的發(fā)生是人工免疫還是自然感染的結(jié)果。

（4）乳膠凝集實(shí)驗(yàn)（LAT）。采用改良后的LAT診斷布病存在95%的陽性率，和SAT與PAT比較，符合程度較高，適合在基層應(yīng)用和推廣。

（5）間接血凝反應(yīng)（IHAT）。在用凝集反應(yīng)、補(bǔ)體參與反應(yīng)和沉淀反應(yīng)不能檢測(cè)出布氏菌抗體的情況下，IHAT可以檢測(cè)出微量的布氏菌抗體，從而診斷出布病。不足的是IHAT抗原的制備比較復(fù)雜。

（6）抗球蛋白實(shí)驗(yàn)（AGT）。AGT可檢測(cè)人和動(dòng)物體內(nèi)的IgG、IgM和IgA型抗體，可應(yīng)用于布病的初期診斷，對(duì)慢性期布病的診斷價(jià)值更明顯。

2.沉淀實(shí)驗(yàn)

應(yīng)用于診斷布病的沉淀實(shí)驗(yàn)有環(huán)狀沉淀實(shí)驗(yàn)（RPT）、絮狀沉淀實(shí)驗(yàn) （FPT）和瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)（GDT），其中GDT應(yīng)用比較廣泛。這種實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單快捷，有較強(qiáng)特異性，但因?qū)嶒?yàn)敏感程度較低而影響了其應(yīng)用價(jià)值。

建立在沉淀反應(yīng)原理之上的免疫電泳技術(shù)有對(duì)流免疫電泳、比較免疫電泳、定量免疫電泳等，其中對(duì)流免疫電泳技術(shù)大大提高了診斷布病的敏感程度和速度；不足之處在于這種診斷方法受較多因素影響，并且需要電泳設(shè)備，所以不能大范圍地進(jìn)行推廣。

3.補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT）

補(bǔ)體可以和任何抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，但是不可以同單獨(dú)的抗原或者抗體相結(jié)合，這就是CFT實(shí)驗(yàn)的原理。相關(guān)研究表明，CFT實(shí)驗(yàn)需要大量的不同試劑和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)程序比較多，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也受人的主觀意識(shí)影響。與此同時(shí)，CFT要求的實(shí)驗(yàn)條件比較苛刻，因此不具備在基層推廣和現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的條件。

4.標(biāo)記抗體技術(shù)

（1）熒光抗體技術(shù)（FAT）。在布病爆發(fā)性流行時(shí)期，特別是被取樣的標(biāo)本受到嚴(yán)重污染的時(shí)候，F(xiàn)AT就具有一定的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)镕AT在檢查布魯氏菌和布魯氏菌抗原上具有很強(qiáng)的敏感性和特異性，檢查速度也較快。不足之處在于需要熒光顯微鏡，實(shí)驗(yàn)步驟和試劑的制備具有復(fù)雜性。

（2）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。ELISA技術(shù)具有相當(dāng)于放射免疫分析的靈敏度，同時(shí)具有免疫熒光和放射免疫的優(yōu)勢(shì)，彌補(bǔ)了這兩種血清學(xué)技術(shù)的不足之處。ELISA可以鑒別牛布魯氏菌為自然感染還是疫苗免疫接種所致，具有自動(dòng)化和診斷快捷等眾多優(yōu)勢(shì)，可應(yīng)用于布病普查和診斷方面的實(shí)踐。

（3）抗氧化酶技術(shù)（PAP）。Meader

和Forster等研究表明，應(yīng)用PAP技術(shù)對(duì)布病常規(guī)受檢標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，能夠快速和特異地給出診斷依據(jù)，其相關(guān)優(yōu)勢(shì)逐步受到人們的重視。

（4）斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Dot-ELISA）。以SAT為對(duì)照，應(yīng)用這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)對(duì)豬布病抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，在硝酸纖維素膜上進(jìn)行的Dot-PPA-ELISA的操作時(shí)間在2小時(shí)之內(nèi)，不需要特殊的實(shí)驗(yàn)條件，試劑用量少，反應(yīng)膜片還可以長(zhǎng)時(shí)間保存，人的肉眼可以判斷，而且靈敏度不低于SAT。

總而言之，目前對(duì)布病的診斷大多是應(yīng)用血清學(xué)實(shí)驗(yàn)和變態(tài)反應(yīng)的方式。診斷布病的血清學(xué)檢測(cè)方式比較多，且都存在相對(duì)的優(yōu)勢(shì)和不足。但可聯(lián)合應(yīng)用多種實(shí)驗(yàn)方法來提高實(shí)驗(yàn)的特異性和靈敏程度。

參考文獻(xiàn)：

[1]馮元璋.血清學(xué)技術(shù)在布病診斷上的應(yīng)用研究現(xiàn)狀及評(píng)價(jià)[J].仲愷農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，（1）： 79-87.

[2]王 佳，徐衛(wèi)民.布魯氏菌病血清學(xué)診斷研究進(jìn)展[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2008，（2）：149-152.