青霉素對尿蛋白定性檢測的影響

摘要：目的 探討青霉素對尿蛋白定性檢測的影響，以做好尿液檢測質控為臨床醫生提供可靠的檢驗報告。方法 用干化學法、磺基水楊酸法和加熱乙酸法檢測一定濃度青霉素的蛋白尿。結果 尿蛋白濃度0.5g/L，青霉素濃度2.0萬U/ml時干化學法尿蛋白檢測出現陽性減弱；青霉素濃度2.0萬U/ml時，磺基水楊酸法尿蛋白檢測出現假陽性；青霉素對加熱乙酸法無干擾。結論 青霉素會導致干化學法蛋白檢測產生假陰性；磺基水楊酸法產生假陽性，對加熱乙酸法無干擾。

關鍵詞：尿蛋白；干化學法；磺基水楊酸法；加熱乙酸法；青霉素

The Effect of Penicillin on the Qualitative Detection of Urinary Protein

XU Yuan

（Department of Clinical Laboratory，Dazhou District Hospital of Traditional Chinese Medicine，Dazhou 635000，Sichuan，China）

Abstract：Objective In order to perfect the general quality control of urine detection and provide reliable results；we designed an experiment to find the influence of urine protein detection on the dosage of penicillin.Methods We used three ways to make the urine detection，including dry chemistry method，urine protein，sulfosalicylic acid method and heat and acetic acid method.Results False negative result appears when urine protein concentration is 0.5 g/L；penicillin is 20000 units per milliliter with dry chemistry method，and with sulfosalicylic acid method，1 positive result appears when the penicillin concentration is 20000 units per milliliter.No impact is made on heat and acetic acid method.Conclusion On some dosage of penicillin，1 positive result will be made with sulfosalicylic acid method and 1 negative result with dry chemistry method.Heat and acetic acid method can rule out 1 results.

Key words：Urine protein；Dry chemistry method；Sulfosalicylic acid method；Heat and acetic acid method；Penicillin

尿液蛋白質檢測是腎臟疾病診斷和治療的重要指標之一。當腎臟出現腎小球，腎小管疾病時，尿蛋白常呈異常增高。故尿蛋白的檢測對某些疾病的診斷，特別是泌尿系統疾病的診治具有重要意義。臨床上主要有三種方法對尿蛋白進行定性檢測，包括pH指示劑蛋白質誤差法（干化學法）、磺基水楊酸法（Sulfosalicylic Acid，SSA）以及加熱乙酸法。

青霉素為臨床常用的抗生素，其腎毒性較小，注射后幾乎全部以原型的形式從尿中排出。叢玉隆等報道[1-3]大劑量的青霉素對尿蛋白的定性檢測有干擾作用，但同時對3種蛋白定性方法進行研究的較少。本實驗將探討青霉素對臨床上常用的三種尿蛋白定性檢測方法的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 試劑：清蛋白2.0 g（Albumin Bovine V，Amresco 0332）、注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號：J3076102）、200 g/L磺基水楊酸、5%乙酸溶液、選取健康學生尿液標本1000 ml。

1.2器材 優利特-200A尿液分析儀（桂林市醫療電子儀器廠），11聯試紙條（桂林優利特醫療電子有限公司，批號：56150638）

1.3方法 配置蛋白尿，見表1。1～5號蛋白尿分別設置A-F共6支平行試管，加入溶解的青霉素鈉，形成青霉素終濃度分別為0、0.5萬U/ml、1萬U/ml、2萬U/ml、5萬U/ml、10萬U/ml。用干化學法檢測每個標本，對導致干化學法出現假陰性結果的尿液采用磺基水楊酸和加熱乙酸法進行檢測。

2 結果

2.1青霉素對干化學法尿蛋白定性檢測的影響，見表2。尿蛋白濃度為0.5 g/L，青霉素濃度為2萬U/ml時尿蛋白檢測開始出現陽性程度減弱；尿蛋白濃度為1 g/L和2 g/L，青霉素濃度為5萬U/ml時尿蛋白檢測出現假陰性；而尿蛋白濃度為5 g/L，青霉素濃度為5萬U/ml時尿蛋白開始出現陽性程度減弱；所有濃度的蛋白尿在青霉素濃度為10萬U/ml時，干化學結果都為假陰性。

2.2青霉素對SSA尿蛋白定性檢測的影響 蛋白濃度為0g/L，青霉素濃度為2萬U/ml時，SSA法檢測出現假陽性。

2.3青霉素對加熱乙酸法尿蛋白定性檢測的影響 不同劑量的青霉素對加熱乙酸法尿蛋白定性檢測均無影響。

3 討論

尿液蛋白質檢測是腎臟疾病診斷和治療的重要指標之一。正常情況下，由于腎小球濾過膜的孔徑屏障和電荷屏障的作用，以及腎小管的重吸收作用，終尿中的蛋白質含量很少，尿蛋白定性試驗陰性。而當腎臟出現腎小球，腎小管疾病時，尿蛋白常呈異常增高。故尿蛋白的檢測對某些疾病的診斷，特別是泌尿系統疾病的診治具有重要意義。目前臨床上檢測尿蛋白的定性方法有干化學法、SSA法和加熱乙酸法。由于干化學法檢測方便、快速，且可進行大批次的檢測，臨床上應用極為廣泛；但檢驗人員常常忽視干化學法干擾因素多，易產生假性結果等缺點，導致出現實驗結果與臨床不符合時，不能正確解釋和處理。

根據實驗結果提示：①所用干化學試紙條對清蛋白檢測的靈敏度和精密度比SSA法差，如1.0 g/L的蛋白尿，SSA檢測為+，而干化學法為±；且后者對1.0 g/L和2.0 g/L的蛋白尿檢測結果皆為++；這與《臨床檢驗基礎（第五版）》[4]描述相同。②青霉素對干化學法尿蛋白定性檢測能造成假陰性結果，且蛋白濃度越低，干擾越大，這與鄭杰等[4]研究結果吻合。③青霉素對SSA法造成假陽性的結果，這與多位研究者看法一 致[1，5]；④加熱乙酸法不受到青霉素的干擾。我們從尿蛋白定性檢測的原理來分析上述實驗結果：①干化學法檢測尿蛋白采用pH指示劑蛋白質誤差法，是指在pH 3.2的條件下，酸堿指示劑四溴酚藍產生的陰離子與帶陽離子的蛋白質結合生成復合物，引起指示劑進一步電離，當超越緩沖范圍時，指示劑發生顏色改變，顏色的深淺與蛋白質含量成正比；而青霉素有與蛋白質相似的結構，亦可與指示劑四溴酚藍結合，且反應速度快、親和力強，競爭性抑制白蛋白與四溴酚藍的結合，使試劑模塊顏色變淡或呈無色，從而造成假陰性。②SSA法檢測原理為在略低于蛋白質等電點的酸性環境下，磺基水楊酸根離子與蛋白質氨基酸陽離子結合，形成不溶性蛋白鹽而沉淀，沉淀量或溶液反應后的渾濁程度，可反應蛋白質的含量；而青霉素存在與蛋白質氨基相似的苯乙酰氨基結構[5]，因此可以與磺酸根離子發生相似沉淀反應，造成假陽性。③加熱乙酸法通過加熱使蛋白質變性，加稀乙酸使尿液pH接近蛋白質等電點（pH 4.7），并使得變性凝固的蛋白質進一步沉淀；因此青霉素對其的影響很小。

檢驗人員應了解各檢測方法的適用情況，注重臨床工作中方法的選擇目的出發，進一步明確青霉素對三種尿蛋白定性試驗的影響，尿蛋白過篩實驗的首選試驗是SSA法，確證實驗是加熱乙酸法；另一方面若患者服用大劑量青霉素等藥物，臨床醫生應向檢驗人員說明服用劑量及時間，或者讓患者幾小時后再采集尿液標本進行尿液檢測，以提高結果準確性和可靠性。

臨床工作中，隨著抗生素的研制與發展，現多使用二代、三代頭孢菌素類抗生素取代青霉素類為主要的抗菌藥，頭孢菌素類抗生素對尿蛋白等尿液常規檢查項目是否有影響，后期可以設計相關實驗進行研究探索；另一方面也應該注意尿蛋白的種類在不同腎臟疾病及不同階段是有所變化的，如腎小球疾病早期以清蛋白為主，隨著病情的發展會出現大分子球蛋白，甚至出現小分子蛋白質，而干化學法對白蛋白靈敏，對球蛋白靈敏度僅為白蛋白的1/100～1/50[4]，因此明確不同方法對不同蛋白質的靈敏度也是進一步研究應該考慮的問題。檢驗人員只有對所用方法的原理和影響因素有深刻的理解才能在工作中正確使用并合理解釋結果，從而幫助臨床醫生進行正確的診斷和治療相關疾病。

參考文獻：

[1]叢玉隆，楊建良.大劑量青霉素對尿蛋白定性結果影響的探討[J].中華醫學檢驗雜志，1994，17（3）：167-168.

[2]李惠敏，楊紅英，鮮玉萍.干化學試紙法做尿蛋白定性的影響因素[J].成都醫藥，1999，25（2）：98.

[3]鄭杰，趙亞妮，安蓉.青霉素對干化學法檢測尿蛋白的影響[J].實用醫技雜志，2005，12（7）：1867-1868.

[4]劉成玉，羅春麗.臨床檢驗基礎[M].5版.北京：人民衛生出版社，2013：144-145.

[5]楊寶峰.藥理學[M].7版.北京：人民衛生出版社，2012：385.

編輯/羅茗柯