鼻咽癌患者血漿EBV DNA和VCA—IgA聯(lián)合檢測及臨床意義

摘要：目的 探討血漿EBV DNA 和VCA-IgA聯(lián)合檢測在監(jiān)測鼻咽癌患者放療后復發(fā)和轉移中的臨床價值。方法 分別采用熒光定量PCR法和常規(guī)免疫酶法檢測放療前后各組鼻咽癌患者血漿EBV DNA含量與血漿VCA-IgA滴度，并進行比較分析。結果 放療前組（初診）患者血漿EBV DNA和VCA-IgA陽性率顯著高于放療后緩解組（P<0.01），與復發(fā)或轉移組比較無顯著性差異（P>0.05）；復發(fā)或轉移組與放療后緩解組比較有顯著性差異（P<0.01）。結論 血漿EBV DNA和VCA-IgA的聯(lián)合檢測是監(jiān)測鼻咽癌患者放療后復發(fā)和轉移的有效標記物。

關鍵詞：鼻咽癌；EB病毒DNA；EB病毒殼抗原IgA

Clinical Significance of Plasma EBV DNA and VCA-IgA for Nasopharyngeal Carcinoma

SUN Qi ， DENG Zhan-feng， SHI Shun-chang， SUN Jian-guang

（Affilicated Hospital of Shaoyang Medical College， Shaoyang 422000，Hunan，China）

Abstract：Objective To evaluate the clinical significance of quantitative analysis of EBV DNA and VCA-IgA in plasma of nasopharyngeal carcinoma patients after curative radiotherapy. Methods Using the method of PCR to test plasma EBV DNA and the method of immunoenzyme to test VCA-IgA. Results The positive rates of XRT Preoperative radiotherapy groups was significantly higher than clinical remission groups （P<0.01）， and there is no statistical significance between clinical remission and recurrent groups（P>0.05）. However， There were significant difference in recurrent or metastasis groups and clinical remission（P<0.01） . Conclusion The detection of Plasma EBV DNA and VCA-IgA is useful for surveillance of nasopharynged carcinoma patients following radiotherapy. The simultaneous combination tests can rise advantage to each other.

Key words：Nasopharyngeal Carcinoma；EBV DNA ； VCA-IgA

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我國常見的惡性腫瘤，其病因是多方面的，現已證實EB病毒（Epstein Barr Virus，EBV）與鼻咽癌密切相關。在鼻咽癌的發(fā)展過程中，EBV感染和多體細胞遺傳和表觀遺傳變化協(xié)同地破壞正常細胞的功能，引起鼻咽癌的發(fā)生[1]。目前已公認，放療是治療鼻咽癌的主要手段。雖然隨著醫(yī)療水平的提高和放療設備及技術的更新，鼻咽癌的療效有了明顯提高，但放療后緩解的患者仍有約30%～40%因復發(fā)或轉移導致治療失敗[2]。因此，探求一種能有效監(jiān)測鼻咽癌患者放療后復發(fā)和遠處轉移的方法，對提高鼻咽癌患者的生存率有重要意義。本研究通過血漿EBV DNA和VCA-IgA兩種腫瘤標記物的聯(lián)合檢測來探討其在監(jiān)測鼻咽癌患者復發(fā)和轉移中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年1月～2015年1月，初診在我院耳鼻咽喉科病理確診后接受根治性放療的鼻咽癌患者68例，其中男47例，女性21例，年齡21～78歲，中位年齡48歲。放療結束后每3個月隨訪1次，截止時間為2016年1月。隨訪時對患者進行常規(guī)體檢及間接鼻咽鏡、鼻咽CT、胸片、腹部B超檢查，對可疑局部復發(fā)者則行纖維鼻咽鏡活檢，可疑遠處轉移者加用其他檢查手段。在隨訪過程中，經臨床檢查證實放療后緩解42例，局部復發(fā)10例，遠處轉移16例。分別采取放療前組（初診）、放療后緩解組和放療后復發(fā)或轉移組患者清晨空腹肘靜脈血5 ml，放入EDTA抗凝管中，離心分離得血漿，置于-20℃凍存待測。

1.2方法 樣本DNA抽提與熒光定量PCR反應。凍存的血漿置于4℃解凍，每例標本取50ul血漿，用QIAamp血液DNA提取試劑盒（德國Qiagen公司）抽提DNA。抽提方法按試劑盒說明書進行。熒光定量PCR反應測定血漿EBV DNA水平。EB病毒核酸擴增熒光檢測試劑盒購買自中山大學達安基因股份有限公司，包括DNA提取液、臨界陽性質控品、強陽性質控品、陽性標準品、陰性質控品以及PCR反應管等。用上海楓林FTC-2000實時熒光定量PCR儀進行檢測，檢測步驟、結果判斷以及質量控制方法按廠家說明。血漿EBV DNA>0 copies/ml為陽性。

1.3免疫酶法檢測血清VCA-IgA滴度 用常規(guī)的免疫酶法檢測血清VCA-IgA滴度。血漿VCA-IgA滴度≥1∶10為陽性。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，數據用中位數表示，樣本比較用u檢驗。

2 結果

2.1放療前組患者血漿EBV DNA含量和VCA-IgA滴度。68例初診鼻咽癌患者血漿EBV DNA陽性率為95.59%（65/68），假陰性率為4.41%（3/68），中位拷貝數為93×104 copies/ml（0-248×108 copies/ml）；血漿VCA-IgA陽性率為88.24%（60/68），假陰性率為11.76%（8/68），其中滴度（<1∶10）8例，低滴度（1∶10-1∶20）11例，中滴度（1∶40-1∶160）38例，高滴度（>1∶160）11例。

2.2放療后緩解組患者血漿EBV DNA含量和VCA-IgA滴度。42例放療后緩解的鼻咽癌患者血漿EBV DNA陽性率為16.67%（7/42），中位拷貝數為0 copies/ml（0～236×103 copies/ml）；血漿VCA-IgA陽性率為54.76%（23/42），其中滴度（<1：10）19例，低滴度（1∶10-1∶20）19例，中滴度（1∶40-1∶160）3例，高滴度（>1∶160）1例。在7例EBV DNA陽性的患者中，有4例處于高拷貝狀態(tài)，其VCA-IgA滴度亦處于中高滴度，后在隨訪過程中確診為局部復發(fā)或轉移，另外3例無復發(fā)或轉移的臨床證據。

2.3放療后復發(fā)或轉移組患者血漿EBV DNA含量和VCA-IgA滴度。26例放療后復發(fā)或轉移組患者血漿EBV DNA陽性檢出率92.31%（24/26），中位拷貝數為69×105 copies/ml（0-256×108 copies/ml），26例患者中2例血漿EBV DNA檢測陰性，假陰性率為7.69%（2/26），余25例大多數處于高拷貝狀態(tài)。血漿VCA-IgA陽性率為88.46%（23/26），假陰性3例，假陰性率為7.69%（3/26），余23例多處于中高滴度狀態(tài)，其中血漿EBV DNA檢測為陰性的2例鼻咽癌患者VCA-IgA處于高滴度狀態(tài)。

2.4各組血漿EBV DNA陽性檢出率和濃度比較，見表1。

放療前組EBV DNA 陽性率顯著高于放療后緩解組（u=8.46，P<0.01），與復發(fā)或轉移組比較無顯著性差異（u=0.63，P>0.05）；復發(fā)或轉移組與放療后緩解組比較差異顯著（u=6.10，P<0.01）。

2.5各組血漿VCA-IgA陽性檢出率和滴度比較， 見表2，表3。

放療前組VCA-IgA陽性率顯著高于放療后緩解組（u=3.96，P<0.01），與復發(fā)或轉移組比較無差異（u=0.03，P>0.05）；復發(fā)或轉移組與放療后緩解組比較有顯著性差異（u=2.89，P<0.01）。

3 討論

鼻咽癌是我國最為常見的頭頸部惡性腫瘤之一，具有明顯地域性和種族性差異[3]，我國華南地區(qū)為高發(fā)區(qū)。雖然病因尚不十分明確，但目前已證實EB病毒是鼻咽癌重要的致病因子，肯定參與鼻咽癌的多階段、多因素發(fā)生過程，被EB病毒感染的細胞具有EBV的基因組，并可產生各種抗原及相應的抗體，對EB病毒各種抗原抗體及EBV-DNA的檢測，已作為鼻咽癌篩查及輔助診斷的手段廣泛用于臨床[4]。鼻咽癌具有包括對放療異常敏感、容易出現腫瘤殘存、局部復發(fā)和遠處轉移等特殊的臨床病理特征。復發(fā)和轉移是鼻咽癌患者死亡的主要原因[5]，也是制約患者療效和預后的主要因素。目前鼻咽癌患者療效的監(jiān)測、局部復發(fā)或遠處轉移的診斷，主要依靠鼻咽鏡和影像學檢查。這些檢查不僅因費用貴、耗時長而致患者難以接受，還且因為影像學檢查為一種局部顯像技術，不可能檢測到每一個可能發(fā)生轉移的部位，也不能及時發(fā)現疾病的進展，其敏感性和特異性也較差，特別在診斷較小的轉移灶、放療后腫瘤侵潤與纖維化的鑒別、以及殘存腫瘤性質的判斷方面具有一定的局限性[2]。因此，找到能有效監(jiān)測鼻咽癌患者放療后復發(fā)或轉移的腫瘤標記物可彌補這些缺陷。

本研究應用熒光定量PCR技術和免疫酶法分別檢測了放療前、放療后緩解及放療后復發(fā)或轉移的鼻咽癌患者血漿中EBV DNA含量和VCA-IgA滴度，結果顯示放療后復發(fā)或轉移組血漿EBV DNA含量和VCA-IgA滴度顯著高于放療后緩解組，且大多數患者血漿EBV DNA處于高拷貝狀態(tài)、VCA-IgA處于中高滴度狀態(tài)，而處于緩解期的血漿EBV DNA一直很低或檢測不到，說明檢測血漿EBV DNA和VCA-IgA含量對監(jiān)測鼻咽癌患者放療后的復發(fā)和轉移有重要的臨床意義。另外，在復發(fā)或轉移組中有2例EBV DNA陰性而VCA-IgA檢測為陽性，3例VCA-IgA陰性而EBV DNA檢測為陽性，說明血漿EBV DNA和VCA-IgA的聯(lián)合檢測有互補作用。

本研究結果還顯示，放療前組血漿EBV DNA陽性檢出率和中位拷貝數顯著高于放療后緩解組，而放療后緩解組大部分患者EBV DNA水平已檢測不到，提示鼻咽癌患者血漿EBV DNA水平隨放療前后腫瘤消長而變化，與腫瘤負荷呈正相關，即血漿EBV DNA可反映放療后殘余腫瘤的載量，此與相關報道相似[6-7]。另外，本研究還發(fā)現鼻咽癌患者緩解組血漿VCA-IgA陽性檢出率雖然較高，但隨放療后時間的增長呈下降趨勢，說明EB病毒抗體在體內會保持一定時間，即使體內EBV被清除，在血漿中較長時間仍可檢出該抗體，與曹素梅等[8]報道相近。

綜上所述，血漿EBV DNA和VCA-IgA兩種腫瘤標記物的聯(lián)合檢測，是監(jiān)測鼻咽癌患者復發(fā)和轉移的有效方法，且因費用低、省時方便而使患者易于接受，適合基層醫(yī)院推廣應用。但上述指標的檢測均存在一定的假陰性，所以在臨床工作中尚需結合必要的臨床和影像學檢查資料，以便對放療后鼻咽癌患者復發(fā)與轉移的監(jiān)測做出更準確的判斷。

參考文獻：

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[8]曹素梅，閔慶華，高勁松，等.血漿EB病毒游離DNA檢測對鼻咽癌患者預后的意義[J].癌癥，2003，22（3）：302-306. 編輯/羅茗柯