腫瘤壞死因子超家族成員15與潰瘍性結腸炎相關性的研究

[摘要] 目的 研究腫瘤壞死因子超家族成員15與潰瘍性結腸炎相關性。方法 方便選取2013年1月—2015年12月福建醫科大學附屬泉州市第一醫院收治的103例UC患者作為病例組，抽取同期103名健康體檢者做為對照組。應用χ2檢驗或Fisher確切概率法檢驗兩組基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，分析兩組間SNPs基因型頻率與等位基因頻率的差異，并檢驗腫瘤壞死因子超家族成員15（TNFSF15）基因單核苷酸多態性與UC臨床特征的相關性。 結果 TNFSF15基因中rs3810936、rs6478108、rs6478109、rs7848647和rs7869487等5個SNPs基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P>0.05）；兩組5個SNPs位點基因型頻率和等位基因頻率差異無統計學意義（P>0.05）（基因型頻率比較，P=0.685，0.903，0.750，0.808，0.988；等位基因頻率比較，P=0.612，0.764，0.620，0.622， 1.000）。結論 TNFSF15基因與中國漢族人群UC的遺傳易感性無明顯相關性。

[關鍵詞] 潰瘍性結腸炎（UC）；遺傳易感性；TNFSF15基因；單核苷酸多態性

[中圖分類號] R4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）11（c）-0021-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the Tumor necrosis factor superfamily member 15 and UC.Methods Convenient selection 103 cases of Han Chinese patients with UC in the One Hospital of Qian Zhou of FuJian Medical University from January 2013 to December 2015 were selected as the case group，during the same time 103 case of healthy check-ups were selected as the control group. χ2 tests or Fisher’ exact test were used to test whether the genotype frequencies of the two groups conform the in Hardy-Weinberg law of genetic equilibrium. the difference of SNPs genotypes and allele frequencies in two groups were analyzed ，the relevance of Tumor necrosis factor superfamily member 15 （TNFSF15） gene single nucleotide polymorphism and clinical features of UC were test. Results In TNFSF15，rs3810936、rs6478108、rs6478109、rs7848647 and rs7869487 SNPs genotype frequencies conform Hardy-Weinberg equilibrium（P>0.05）.5 SNPs genotypes and allele frequencies in two groups has no significant difference the difference.（P>0.05）（P=0.685， 0.903，0.750，0.808，0.988 in genotype frequencies；P=0.612，0.764，0.620，0.622，1.000 in allele frequencies）. Conclusion The SNPs of TNFSF15 about Chinese Han people has no significant relations to UC genetic susceptibility.

[Key words] Ulcerative colitis； Predisposition ；TNFSF15；Single nucleotide polymorphisms；Genetic

潰瘍性結腸炎（Ulcerative colitis UC）是一種慢性非特異性炎癥性疾病，主要累及直腸和結腸，其與克羅恩（CD）統稱為炎癥性腸病（IBD）。至今為止，關于潰瘍性結腸炎的病因尚無明確結論，研究認為，UC是遺傳、感染、環境和免疫等多因素共同作用的結果，其發病機制可以概括為：遺傳易感者在環境因素的作用下及腸道茵群的參與下，啟動了腸道免疫機制及非免疫機制，從而導致腸道發生反應。近年來，關于UC的發病與遺傳因素的相關性的研究成為臨床熱點。多項研究提出，UC的發病與ICAM-1、HLA [1]及TNFSF15等多個基因密切相關，已有研究表明，TNFSF15基因是CD的易感基因之一[2-3]，但鮮有TNFSF15基因與UC相關性的研究。該試驗以2013年1月—2015年12月該院就診的103例UC患者為研究對象，選取TNFSF15基因的5個位點，即探討TNFSF15基因是否為中國漢族人群中潰瘍性結腸炎的易感基因之一，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該院該次研究經醫院倫理委員會批準，告知患者研究的目的以及方法，獲得患者知情同意。研究開展時間為2013年1月—2015年12月，隨機抽取該院就診的103例UC患者為研究對象，均符合“2012年于廣州我國炎癥性腸病診斷及治療共識意見”中制訂的潰瘍性結腸炎診斷標準[4]，排除：①細菌性痢疾、腸結核等感染性結腸炎及結腸CD、缺血性結腸炎、放射性結腸炎等疾病患者；②未定型經腸炎及無法耐受腸鏡檢查者；③合并大腸腫瘤及其他部位腫瘤者；④合并其他自身免疫性疾病、嚴重感染以及多臟器功能衰竭者；⑤合并糖尿病、高血壓、高脂血癥等致動脈粥樣硬化的危險因素者；⑥麻風病人、妊娠期及哺乳期婦女、智力障礙及精神類疾病患者。其中男57例，女46例，患者年齡22～64歲，平均年齡為（42.8±6.5）歲。抽取103名同期該院體檢中心及門診的健康者作為對照組，排除IBD史、IBD家族史以及無自身免疫性疾病史患者，其中男51名，女52名，年齡21～68歲，平均年齡為（43.1±6.8）歲。對兩組研究對象的一般資料錄入至統計學軟件中處理，結果顯示差異無統計學意義（P>0.05），基本均衡可比。

1.2 實驗儀器與試劑

實驗儀器及主要試劑由生物生工（上海）股份公司提供

1.3 測序 PCR產物純化回收試劑盒（生工SK1141）測序

測序圖譜（.abl）使用說明：峰圖文件（.abl）可用Chromas軟件或SeqMan軟件打開。序列比對可用SeqMan軟件。

1.4 分型數據

TYPER軟件分析實驗結果，獲得分型數據。

1.5 統計方法

采用SPSS 21.0統計學軟件分析試驗數據。數據中率的比較以χ2檢驗。年齡采用（x±s）表示， 組間比較采用獨立樣本t檢驗，確認兩組SNPs位點基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，對樣本的群體代表性進行分析，分析兩組間5個SNPs位點基因型和等位基因頻率的差異，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

UC組5個SNPs等位基因1、2的頻數（頻率）分別為124、82，119、87，117、89，106、100，124、82；對照組等位基因1、2的頻數（頻率）分別為130、76，123、83，111、95，112、94，12。用χ2檢驗兩組間等位基因頻率，P值分別為0.612，0.764，0.620，0.622，1.00，P>0.05，表明兩組5個SNPs等位基因頻率間差異無統計學意義，見表1。

兩組基因型頻數：UC組5個SNPs基因型11、12、22的頻率依次為34.0%、52.4%、13.6%，15.5%、53.4%、31.1%，28.2%、57.3%，14.6%，29.1%，44.7%，26.2%，35.9%、48.5%、15.5%；對照組基因型頻率依次為35.9%、54.4%、9.7%，14.6%、51.5%、34.0%，26.2%、55.3%、18.4%，31.1%，46.6%，22.3%，35.0%、49.5%、15.5%。兩者對比，P值分別為0.685， 0.903， 0.750， 0.808，0.988，P>0.05，表明兩組5個SNPs基因型頻率間差異無統計學意義，見表2。

3 討論

潰瘍性結腸炎病變部位主要局限于大腸粘膜和粘膜下層，患者臨床表現為腹痛、腹瀉、粘液膿血便等，伴有發熱、貧血、消瘦等癥狀。相關調查顯示，近年來，我國UC發病率有逐漸上升的趨勢，成為我國社會衛生關注的問題。TNFSF15基因位于第9號染色體上（9q32），具有23908個堿基，含4個外顯子和3個內含子。其蛋白產物腫瘤壞死因子樣配體1A（TL1A）可抑制腫瘤細胞生長、誘導細胞凋亡，與特異性受體死亡受體3（DR3）結合后具有活化T細胞、促進炎癥因子的分泌等作用，在免疫調節及炎癥性疾病發病中發揮著重要作用。UC的發病具有明顯家族遺傳現象，可能與基因類型及基因突變有關，多項研究表明[5]，TNFSF15基因的單核苷酸多態性與IBD有關，特別是CD有明顯相關性。已有研究表明，TNFSF15基因與非猶太高加索人種的UC具有相關性，但與猶太高加索人種UC無顯著相關性。相關學者研究報道，TNFSF15基因rs3810936與日本人的UC具有顯著相關性[6]。但在朝鮮人群中，TNFSF15基因中8個單核苷酸多態性（SNPs）（rs4574921、 rs10114470 、rs 3810936、rs6478108、rs4979462、 rs7865494、 rs7848647和rs1322057）與UC無顯著相關性[7]。王強等[8]研究中，對TNFSF15基因多態性與浙江地區漢族人克羅恩病遺傳易感性的相關性進行檢測。分別設置克羅恩病組（克羅恩病患者）、對照組 （健康者），設計3個單核苷酸多態性 （rs3810936，rs6478109， rs7848647）目的基因特異性引物，擴增樣本中的目的基因測序。結果顯示，兩組rs3810936，rs6478109，rs7848647 3個位點等位基因的攜帶頻率及基因型頻率無明顯差異。經多因素Logistic回歸分析，TNFSF15的單核苷酸多態性與克羅恩病的臨床亞型無顯著相關性，但rs3810936與rs6478109有相關性（r=0.802，P<0.05），rs3810936與rs7848647有顯著相關性（r=0.793，P<0.05），rs6478109與rs7848647有相關性（r=0.948， P<0.05）。因而認為，TNFSF15的三個單核苷酸多態性（rs3810936，rs6478109，rs7848647）與浙江地區漢族人克羅恩病遺傳易感性、臨床亞型無顯著相關性。綜上可說明，UC的遺傳易感性具有種族遺傳和地區差異。目前，有關于中國北方人群小樣該研究顯示TNFSF15基因并非UC的易感基因之一。而該研究中選取TNFSF15基因的5個位點，隨機抽取該院就診的103例UC患者為研究對象，另抽取同期體檢者作對照，結果顯示UC組5個SNPs等位基因1、2的頻數（頻率）分別為124、82，119、87， 117、89，106、100，124、82；對照組等位基因1、2的頻數（頻率）分別為130、76，123、83，111、95，112、94，12。經χ2檢驗，兩組間等位基因頻率，P>0.05，差異無統計學意義。其中UC組5個SNPs基因型11、12、22的頻率依次為34.0%、52.4%、13.6%，15.5%、53.4%、31.1%，28.2%、57.3%，14.6%，29.1%，44.7%，26.2%，35.9%、48.5%、15.5%；對照組基因型頻率依次為35.9%、54.4%、9.7%，14.6%、51.5%、34.0%，26.2%、55.3%、18.4%，31.1%，46.6%，22.3%，35.0%、49.5%、15.5%。兩者對比，P>0.05，差異無統計學意義。因而該組研究可證實TNFSF15基因與UC無顯著相關性（P=0.74）。

綜上所述，結合其他省市醫院的相關研究可以證實，TNFSF15基因并非中國漢族人群的易感基因之一，但該組研究未將種族遺傳、地域差異作為影響因素納入分析，且該研究樣本量少時間較短，因而存在一定的局限性，還需進一步行全國大范圍研究及擴大樣本量，進一步探尋UC的易感基因，為臨床上更好地、有針對性治療UC提供依據。

[參考文獻]

[1] 韓現紅，戴新娟.潰瘍性結腸炎患者對疾病相關飲食知識、態度、行為及需求調查分析[J].中國實用護理雜志，2015，31（4）：300-303.

[2] Qi， J.-W.，Qin， T.-T.，Xu， L.-X， et al.TNFSF15 inhibits vasculogenesis by regulating relative levels of membrane-bound and soluble isoforms of VEGF receptor 1[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2013，110（34）：13863-13868.

[3] 黃艷，竇傳字，劉慧榮，等.表觀遺傳修飾與潰瘍性結腸炎[J].