輔酶Q10注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的研究

◎ 鄧 斌

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶 401120）

輔酶Q10是一種良好的生化藥物，具有多種生物學(xué)功能，能輔助治療充血性心力衰竭、冠心病、高血壓、心律失常、繼發(fā)性醛固酮增多癥、頸部外傷后遺癥、腦血管障礙、失血性休克及肝炎等多種疾病[1，2]。鱟試劑法檢查輔酶Q10注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素尚未見(jiàn)報(bào)道，筆者依照中國(guó)藥典2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法等[3，4]，對(duì)輔酶Q10注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

鱟試劑（TAL）：批號(hào)20120108，規(guī)格0.1 mL/支，標(biāo)示靈敏度0.25 EU/mL，湛江海洋生物制品廠；批號(hào)1201022，規(guī)格0.1 mL/支，標(biāo)示靈敏度0.25 EU/mL，湛江安慶斯生物有限公司。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：批號(hào)20121206，效價(jià)10 EU/支，湛江海洋生物制品廠。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水）：批號(hào)20121004，2 mL/支，湛江海洋生物制品廠。輔酶Q10注射液：批號(hào)13080001、13080002和13080006，規(guī)格5 mg/瓶，國(guó)內(nèi)某企業(yè)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 TAL靈敏度復(fù)核

按照中國(guó)藥典2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用BET水配成2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ 4個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行TAL的標(biāo)示靈敏度復(fù)核，結(jié)果見(jiàn)表1。復(fù)核的靈敏度λC均在0.5λ～2λ范圍內(nèi)，符合要求。

表1 TAL靈敏度復(fù)核結(jié)果表

2.2 輔酶Q10注射液細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定

細(xì)菌內(nèi)毒素限值L=K/M，K為按規(guī)定的給藥途徑，人用1 kg體重1 h最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑K=5 EU/（kg·h）；M為人用1 kg體重1 h最大劑量（人均體重按60 kg計(jì)算），參考本品臨床用法用量，M為500 mL/60 kg；可計(jì)算出本品L=K/M=5.0/（500/60）=0.6 EU/mL。考慮到用藥安全性，確定本品細(xì)菌內(nèi)毒素限值L為0.5 EU/mL。

2.3 輔酶Q10注射液最大有效稀釋倍數(shù)

根據(jù)公式MVD=c·L/λ計(jì)算。L為本品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，λ為TAL靈敏度，c為本品濃度。當(dāng)L=0.5 EU/mL，c=1 mL/mL，λ=0.25 EU/mL時(shí)，MVD=1×0.5/0.25=2倍。

2.4 輔酶Q10注射液干擾預(yù)試驗(yàn)

選用20120108批TAL進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)，λ為0.25 EU/mL。取13080001批樣品，用BET水將樣品稀釋1、2倍，獲得1∶1和1∶2樣品稀釋液，以樣品原液和稀釋液為樣品管，用樣品原液和稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成2.0λ細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣品陽(yáng)性管，同時(shí)以不加細(xì)菌內(nèi)毒素的BET水為陰性對(duì)照管，以2.0λBET水為陽(yáng)性對(duì)照管，進(jìn)行預(yù)干擾試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 輔酶Q10注射液干擾預(yù)試驗(yàn)表

表2結(jié)果表明，用0.25 EU/mL TAL進(jìn)行試驗(yàn)，樣品原液、1和2倍稀釋液均無(wú)干擾，即樣品原液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素與TAL的反應(yīng)無(wú)干擾作用。

2.5 樣品干擾試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)13080001），將樣品溶液加到TAL管中，同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)和樣品陰性試驗(yàn)，以確定樣品原液對(duì)干擾試驗(yàn)的影響，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 輔酶Q10注射液干擾試驗(yàn)表

表3結(jié)果表明，2個(gè)批號(hào)TAL的Es分別為0.125 EU/mL和0.250 EU/mL，均在0.5λ～2λ范圍內(nèi)，且Et均為0.125 EU/mL，在0.5Es～2Es范圍內(nèi)，確認(rèn)樣品原液無(wú)干擾。

2.6 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

按照中國(guó)藥典2005年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求進(jìn)行試驗(yàn)，取13080001、13080002和13080006批樣品，分別用2個(gè)廠家的TAL進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果表

表4結(jié)果表明，陽(yáng)性對(duì)照管與樣品陽(yáng)性對(duì)照管均為陽(yáng)性，陰性對(duì)照管與樣品管均為陰性，說(shuō)明3批樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本品原液對(duì)標(biāo)示靈敏度為0.25 EU/mL的2批不同廠家生產(chǎn)的TAL均無(wú)干擾作用，說(shuō)明所選靈敏度TAL可用于樣品細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。

在干擾試驗(yàn)前進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)，其目的在于確定本品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)不產(chǎn)生干擾的最小稀釋倍數(shù)，如果本品的最大有效稀釋倍數(shù)下均無(wú)法排除干擾，則應(yīng)考慮使用更高靈敏度的TAL進(jìn)行試驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊立軍.輔酶Q10的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2008，20（12）：135-137.

[2]劉 麗.輔酶Q10治療心血管疾病的應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2007，2（25）：71.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].2部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄85-88.

[4]彭 艷，張 菡.注射用鹽酸甲氯酚酯的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法.中國(guó)藥業(yè)，2009，18（1）：20-21.