清胰Ⅱ號對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺損傷的保護作用及機制探討

趙建鋒，兌丹華，代靜靜，杜杰，周淼，敖宇

(遵義醫學院附屬醫院，貴州遵義563003)

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清胰Ⅱ號對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺損傷的保護作用及機制探討

趙建鋒，兌丹華，代靜靜，杜杰，周淼，敖宇

(遵義醫學院附屬醫院，貴州遵義563003)

摘要：目的觀察清胰Ⅱ號對重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺的保護作用，并探討其機制。方法 將56只SD大鼠隨機分為3組，A、B組各24只采用膽胰管逆行注射5%牛磺膽酸鈉建立SAP模型，C組8只開腹后僅翻動腸管。A組造模清醒后予以清胰Ⅱ號灌胃1次/6 h，共4次。造模后6、12、24 h，采用ELISA法檢測血清高遷移率族蛋白1(HMGB1),光鏡觀察胰腺組織并行病理評分。結果B組各時點血清HMGB1較C組升高(P均<0.01)，胰腺病理評分增加(P均<0.01)。A組與B組同時點相比，血清HMGB1下降(P均<0.05)，胰腺病理評分降低(P均<0.05)。結論 中藥制劑清胰Ⅱ號能夠降低血清HMGB1水平，從而降低胰腺組織損傷。

關鍵詞：重癥急性胰腺炎；胰腺損傷；中藥療法；清胰Ⅱ號；高遷移率蛋白1；白細胞介素

急性胰腺炎是臨床上常見的急腹癥，20%～30%發展為重癥急性胰腺炎(SAP)[1]。SAP病情兇險，常伴有全身炎癥反應綜合征(SIRS)及全身多器官功能不全(MODS)。最近研究發現，高遷移率族蛋白1(HMGB1)作為一種重要的晚期炎性因子，參與了SAP的病理生理過程[2～4]。清胰Ⅱ號為我院自制治療SAP的復方制劑，臨床效果較好，但機制尚不清楚。2014年10月～2015年3月，我們觀察了清胰Ⅱ號對SAP大鼠胰腺的保護作用，并探討其機制。

1材料與方法

1.1材料SD大鼠56只，雌雄不限，鼠齡8～10周，體質量200～250 g，由重慶第三軍醫大學提供；大鼠IL-1、IL-10、HMGB1檢測ELISA試劑盒(康寶生物有限公司)，牛磺膽酸鈉(美國Sigma公司)，清胰Ⅱ號湯劑(遵義醫學院附屬醫院)，-80 ℃低溫冰箱(德國Forma Scientic公司)。

1.2方法

1.2.1動物分組與造模處理將56只大鼠隨機分為3組，A、B組各24只采用膽胰管逆行注射5%牛磺膽酸鈉建立SAP模型，C組8只開腹后僅翻動腸管。A組于造模清醒后予以清胰Ⅱ號10 mL/kg灌胃，1次/6 h，共4次。

1.2.2標本采集與檢測方法原腹部切口入腹，用促凝管經下腔靜脈取血3～5 mL，以3 000 r/min離心15 min。采用ELISA雙抗體法檢測血清HMGB1；取部分胰腺組織，4%甲醛液固定，石蠟包埋，4 μm切片；HE染色，行病理學檢查，參考文獻[5]方法進行胰腺病理評分。

2結果

各組大鼠血清HMGB1及胰腺病理評分比較，詳見表1。

表1　各組大鼠血清HMGB1及胰腺病理評分比較±s)

注：與C組比較，aP<0.01；與B組同時點比較，bP<0.05，cP<0.01；與同組相鄰時點比較，dP<0.05。

3討論

SAP早期由于各種因素引起胰腺腺泡細胞損傷，激活胰酶，引起炎性細胞的活化及浸潤，釋放大量促炎因子，如TNF-α、IL-1、IL-10、HMGB1等[6~8]。這些細胞因子造成機體的高炎癥反應狀態，發生全身炎癥反應綜合征進而造成多器官功能障[9]。因HMGB1的產生明顯晚于TNF-α、IL-1等早期炎性因子, 且持續時間較長, 故被稱為晚期炎癥因子[10]。本研究顯示，B組血清HMGB1水平明顯高于C組，12 h升高達到C組3.8倍，24 h仍然維持在4.5倍以上。與Messmer等[11]的研究基本相符。有研究發現，SAP患者血清HMGB1水平升高，且與疾病嚴重程度一致[12]，采用抗體中和HMGB1可以改善胰腺炎的病情發展和相關的臟器損害[13]，推測HMGB1是在SAP的炎癥反應及臟器功能障礙過程中發揮主要作用的炎性因子。

清胰Ⅱ號由梔子、丹皮、木香、厚樸、元胡、赤芍、大黃、芒硝組成，具有通里攻下、活血化瘀、清熱解毒之功效，是治療急性胰腺炎的特效中藥制劑。研究發現，清胰Ⅱ號能夠保護胰腺細胞，減輕內毒素血癥，抑制促炎細胞因子釋放，改善腎臟和胰腺病理損害的作用[14，15]。本研究結果顯示，A組與B組同時點相比，血清HMGB1下降，胰腺病理評分降低。證明中藥制劑清胰Ⅱ號能夠降低血清HMGB1水平，從而降低胰腺組織損傷，改善SAP病情。

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(收稿日期：2015-10-21)

中圖分類號：R576

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)10-0025-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.10.009

通信作者：兌丹華(E-mail： 2361169015@qq.com)

基金項目：貴州省科學技術基金項目(黔科合J字2008-2200號)；遵義市紅花崗區科技局項目(fcz120131222)。