Axl在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義①

張　燕，付　紅，單海鷗，孫瀅瀅，蘇明家

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154003；2.佳木斯婦嬰醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154003)

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Axl在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義①

張燕1，付紅2，單海鷗2，孫瀅瀅2，蘇明家2

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154003；2.佳木斯婦嬰醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154003)

摘要：目的: 研究在宮頸癌組織中受體酪氨酸激酶Axl的表達(dá)情況,并探討Axl與宮頸癌進(jìn)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。方法:采用免疫組織化學(xué)的方法分別檢測 11例正常宮頸的患者，15例CINⅡ-Ⅲ的患者，36例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌的患者,17例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌的患者組織中Axl的表達(dá)情況并比較各組間的差異性。結(jié)果: Axl在宮頸癌組織中的表達(dá)水平明顯高于CINⅡ-Ⅲ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05) ，宮頸癌組中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者組織中Axl的表達(dá)水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05) ，Axl在CINⅡ~Ⅲ組織中的表達(dá)水平與正常宮頸組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);Axl在宮頸癌浸潤深度>1/2組織中的表達(dá)水平相對浸潤深度≤1/2組織中增高，差異有顯著意義(P<0.05)。結(jié)論: Axl在宮頸癌組織中表達(dá)增高與宮頸癌的惡性程度及其腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞:宮頸癌; Axl

宮頸癌在全球女性惡性腫瘤中居第二位[1]，已經(jīng)成為發(fā)展中國家惡性腫瘤相關(guān)死因的主要原因之一。近些年，隨著社會環(huán)境的變化，性生活過早及性關(guān)系紊亂，宮頸癌的患病率和死亡率不斷上升，且逐漸年輕化。宮頸癌浸潤與轉(zhuǎn)移是造成宮頸癌患者死亡的主要原因，研究表明，早期發(fā)現(xiàn)癌前病變和宮頸癌，早期治療能夠極大地降低了宮頸癌的患病率及死亡率,因此關(guān)于宮頸癌的淋巴結(jié)早期轉(zhuǎn)移已經(jīng)成為近幾年的研究熱點。Axl屬于受體酪氨酸激酶家族中的一員，參與細(xì)胞增殖，黏附，抑制細(xì)胞凋亡等作用，隨著對Axl的研究越來越多，研究發(fā)現(xiàn)，Axl參與腫瘤血管的生成，與腫瘤的侵襲性有著密切的關(guān)系，Axl是腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵性調(diào)控因子。目前，國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)Axl在乳腺癌，胃癌，卵巢癌，子宮內(nèi)膜癌等中均有高表達(dá)，但未見Axl在宮頸癌中的有關(guān)研究報道。本實驗通過免疫組化方法研究宮頸癌患者組織中Axl的表達(dá)情況，并分析其臨床意義，為宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)，診斷，治療，評估預(yù)后提供新的臨床思維。

1資料及方法

1.1病例資料

收集正常宮頸組織 11 例，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織(CINⅡ~Ⅲ)15例、宮頸癌組織共53例，其中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36 例、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17 例，宮頸癌腫瘤直徑>4cm 35例，≤4cm 18例，無脈管轉(zhuǎn)移者37例，有脈管轉(zhuǎn)移者16例。取其術(shù)后組織，組織的病理診斷以術(shù)后石蠟切片結(jié)果為準(zhǔn)。患者年齡30~69歲，平均47歲，所有患者術(shù)前均未輸血或行放化療等治療，所有宮頸癌均為鱗癌。

1.2主要試劑

兔抗人Axl多克隆抗體購于Abcam 公司, 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔抗體購于上海生工有限公司, SABC免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB顯色試劑盒均購于武漢博士德生物制劑。

1.3免疫組化染色及結(jié)果判定

石蠟切片脫蠟、水化，PBS沖洗，過氧化物酶阻斷溶液室溫孵育，PBS沖洗，高壓抗原修復(fù)，冷卻至室溫，PBS沖洗。滴加Axl抗體，4℃冰箱過夜，PBS沖洗，再滴加二抗，孵育，PBS沖洗，DAB顯色，復(fù)染，脫水，封片，顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.4結(jié)果判定

Axl在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，為棕黃色或是棕褐色顆粒。(1)按陽性細(xì)胞所占百分比及著色的強(qiáng)度來結(jié)果判定: (2) 按著色強(qiáng)度評分:無著色計為0分，淺黃色計1分，黃色計2分，棕黃色計3分; (3) 按陽性細(xì)胞所占的百分率評分:無陽性細(xì)胞為 0分，≤25﹪為1分，26﹪~50﹪為2分，51﹪~75﹪為3分，>76﹪為4分，將兩項積分相加，0~1分為陰性(-)，2~3分為弱陽性(+)，4~5分為中強(qiáng)陽性()，6~7分為強(qiáng)陽性()。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用 SPSS17.0 統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。統(tǒng)計結(jié)果P<0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

Axl主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，為棕黃色或是棕褐色顆粒，Axl在不同組織中的表達(dá)情況如表1所示。宮頸癌中的Axl表達(dá)水平顯著高于正常宮頸及CINⅡ-Ⅲ中的Axl表達(dá)水平(P<0．05)。宮頸癌有淋巴轉(zhuǎn)移組中的Axl的表達(dá)高于淋巴轉(zhuǎn)移組(P<0．05)。CINⅡ~Ⅲ組于正常宮頸組相比差異。

表1　 各組組織中Axl的表達(dá)水平比較

表2　 宮頸癌組織中Axl與浸潤深度的關(guān)系

無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)。如表2所示，Axl的表達(dá)量在宮頸癌浸潤深度>1/2組織中較浸潤深度≤1/2組織中高，差異有顯著意義(P<0.05)。

3討論

在正常人體中，Axl在多種組織中表達(dá)，Axl在心臟和骨骼肌中表達(dá)最高，骨髓基質(zhì)細(xì)胞中也有較高的表達(dá)，Axl在正常淋巴系中表達(dá)很低，在外周的血細(xì)胞中基本上不表達(dá)。Axl是Tyro3受體酪氨酸激酶家族中的一員，它的配體為Gas6，與配體結(jié)合后激活本身的酪氨酸激酶活性,并且能激活下游的信號傳導(dǎo)途徑, 參與細(xì)胞粘附與識別、抗凋亡、增殖及細(xì)胞轉(zhuǎn)化。近些年來，隨著對Axl的研究越來越深入，發(fā)現(xiàn)Axl在多種惡性腫瘤中都有較高的表達(dá)，并通過參與新生血管的形成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡等機(jī)制與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。Axl在國外的研究相對較多，發(fā)現(xiàn)Axl在很多種惡性腫瘤組織中的表達(dá)增高，Sun等[3]研究發(fā)現(xiàn)Axl在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)增高，且高于正常子宮內(nèi)膜, LoweAW 等[4]的研究發(fā)現(xiàn)在胰島細(xì)胞瘤中的Axl基因表達(dá)明顯增高。Sainaghi PP等[5]對人前列腺癌細(xì)胞系研究，證實在原發(fā)性前列腺癌中, Axl呈高表達(dá)。Holland SJ等[6]應(yīng)用人MDA - MB - 231異種移植模型, 用RNA 干擾技術(shù)來介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中Axl基因沉默, 結(jié)果抑制了腫瘤的生長。Xu WD等[ 7]同樣利用RNA干擾技術(shù)介導(dǎo)Axl基因的沉默,其研究也證實了Axl表達(dá)與惡性腫瘤的生長有著直接的關(guān)系。Vajkoczy P等[ 8]在腦膠質(zhì)瘤中, 研究發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中, Axl呈過度表達(dá)，而且, 惡性程度越高Axl的表達(dá)就越高。Shieh Y - S 等[9]通過對肺腺癌細(xì)胞系中Axl的研究中, 發(fā)現(xiàn)Ax l表達(dá)的高低與腫瘤侵襲能力大小密切相關(guān)，Axl在高侵襲能力組中的表達(dá)明顯高于低侵襲能力組。另外, 在甲狀腺癌、胃癌、直腸癌、卵巢癌等許多人類惡性腫瘤, Axl基因都有較高的表達(dá)。因此, Ax l與腫瘤發(fā)生，發(fā)展有著密切的關(guān)聯(lián)。可能作為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的早期的標(biāo)志物之一。本實驗研究顯示，宮頸癌組織中Axl的表達(dá)明顯高于正常組與CINⅡ~Ⅲ組。宮頸癌組中有淋巴轉(zhuǎn)移者中Axl的表達(dá)高于無淋巴轉(zhuǎn)移者，且浸潤深度較深組Axl的表達(dá)水平也相對的增高，提示Axl與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，對早期的宮頸癌可能有一定的臨床檢測價值，發(fā)現(xiàn)早期宮頸癌，及早的治療，從而極大的降低了宮頸癌的死亡率，而且可能對評估預(yù)后有一定的參考價值。

參考文獻(xiàn):

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[6]Holland SJ, Powell MJ, Friera AM, et al.Multiple roles for the receptor tyrosine kinase Axl in tumor formation [J] . Cancer Res,2005,65: 9294-9303

[7]Xu WD, Powell MJ, Friera AM, et al. Requirement for the tyrosine kinase Axl in angiogenesis and tumor growth [J] . Proc Amer AssocCancer Res, 2005, 46: 8

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The expression and clinical significance of Axl in cervical cancer

ZHANGYan1，F(xiàn)UHong2，SHANHai-ou2，SUNYing-ying2，SUMing-jia2

(1.The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 2.Jiamusi Penetration in the Hospital, Jiamusi 154003, China)

Abstract:Objective: To explore the expression of Axl in cervical cancer tissue and its relationship with cervical cancer progression and lymph node metastasis. Methods: Immune histochemical method was used to detect the expressions of Axl in 11 cases with normal cervical, 15 cases with CIN Ⅱ - Ⅲ, 36 cases without lymph node metastasis of cervical cancer, 17 patients with lymph node metastasis of cervical cancer. The differences of the expression of Axl were compared among different groups. Results: The positive expression of Axl was higher in cervical cancer tissue than that in CINII-III (P<0.05). The expression of Axl in cervical cancer group with lymph node metastasis was significantly higher than that in cervical cancer group without lymph node metastasis(P<0.05). Between CINII-III group and normal cervical tissues group, there was no significant difference in the expression of Axl. The expression of the Axl in cervical cancer group with depth of myometrium invasion ≤1/2 was significantly lower than that in cervical cancer group with depth of myometrium invasion >1/2.(P < 0.05). Conclusion: The high expression of Axl in cervical cancer tissue is closely related to cervical malignant degree and tumor metastasis.

Key words:cervical cancer; Axl

(收稿日期：2015-03-28)

中圖分類號：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1008-0104(2016)01-0092-02

作者簡介:張燕(1973～) 女，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。通訊作者:付紅(1981～) 女，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生，主治醫(yī)師。E-mail:1243377151@qq.com。