貴州省漢族原發性高血壓CYP17A1基因的多態性*

周啟保， 刁曉艷*， 張　穎， 張旺德， 趙孝梅， 官志忠

(1.貴州醫科大學附院 心血管內科， 貴州 貴陽　550004； 2.貴州醫科大學 分子生物學重點實驗室， 貴州 貴陽　550004)

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·專題研究·

貴州省漢族原發性高血壓CYP17A1基因的多態性*

周啟保1**， 刁曉艷1***， 張穎1， 張旺德2， 趙孝梅2， 官志忠2

(1.貴州醫科大學附院 心血管內科， 貴州 貴陽550004； 2.貴州醫科大學 分子生物學重點實驗室， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 探討貴州省漢族原發性高血壓(EH)人群CYP17A1基因rs11191548位點多態性。方法： 選取貴州漢族人群的EH患者198例(EH組)和健康體檢者199例(對照組)，應用TaqMan探針方法觀察兩組被檢者CYP17A1基因rs11191548位點的基因型及等位基因頻率分布。結果： 在EH組和對照組均檢測出CYP17A1基因rs11191548位點3種基因型，兩組間基因型分布及等位基因頻率差異有統計學意義(P<0.05)。結論： CYP17A1基因rs11191548多態性與貴州省漢族人群EH可能相關。

[關鍵詞]高血壓； CYP17A1； 基因多態性； 等位基因； 基因型； 漢族； 貴州

原發性高血壓(essential hypertension，EH)是一種高發病率的疾病，是導致心腦血管疾病的主要危險因素[1]。EH的發病與遺傳因素和環境因素的共同作用有關[2]。已知的相關基因不下200 種,CYP17A1基因為候選基因之一。CYP17A1基因編碼細胞色素p450c17alpha蛋白，在類固醇生成途徑的調控中起重要作用。目前研究發現CYP17A1在不同地區、不同民族中存在差異[3-8],本研究探討CYP17A1基因的rs11191548位點基因多態性與貴州省漢族人群EH是否相關。

1對象與方法

1.1研究對象

選擇2014年03月～2015年03月心內科門診及住院的高血壓患者198例作為EH組，EH診斷按2010年中國高血壓防治指南標準；排除繼發性高血壓、瓣膜疾病、心肌病及肝、腎衰竭，孕婦、哺乳期婦女以及精神疾病史或濫用藥物患者，其中男89例，女109例，平均(54.95±11.06)歲。選擇無高血壓家族史，無各類心血管、腦血管、腎、內分泌等方面疾病的健康體檢者199例為對照組，其中男性87例，女性112例，平均(58.94±11.58)歲。兩組被檢者在性別分布差異無統計學意義，年齡分布差異有統計學意義。兩組均為貴州籍漢族人，且互相均無血緣關系。

1.2方法

1.2.1血壓測定采用校正的水銀柱式血壓計(刻度以2 mmHg為單位)，于上午10∶00～12∶00 測定，測血壓前30 min 內禁止吸煙和飲咖啡，避免勞累、緊張和興奮，靜坐5 min，裸露右側上臂，肱動脈置于和心臟同一水平線位置，每次重復測量3 次，測量相隔5 min/次，取3 次測量的平均值，由專人使用相同血壓計測量。

1.2.2基因分型按經典常規法(酚-氯仿法)抽提白細胞DNA，溶于TE；紫外吸收法定量后標化為30 g/L，-40 ℃備用。應用TaqMan實時熒光定量PCR技術對CYP17A1基因rs11191548位點進行基因分型。PCR反應為10 μL體系：DNA(濃度為30 g/L)1.5 μL，通用TaqManPCR Master Mix 5 μL，雙蒸水3.25 μL，20×基因分型探針及引物0.25 μL。其中TaqManPCR Master Mix、基因分型探針及引物均購自美國ABI公司，探針分別用FAM、VIC染料標記。反應條件為：60 ℃ 30 s，95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共55個循環，60 ℃ 30 s，采用美國ABI公司生產的Step one Plus PCR儀，讀取FAM/VIC熒光判斷基因分析結果。FAM熒光探針識別T等位基因，VIC熒光探針識別C等位基因。每塊96孔板設3孔陰性對照，并隨機抽取5%樣本復測，一致性為100%。

1.3觀察指標

對CYP17A1基因rs11191548位點基因型分布進行H-W平衡檢驗。比較EH組和對照組CYP17A1基因rs11191548位點基因型和等位基因頻率。

1.4統計學處理

2結果

2.1CYP17A1基因rs11191548位點基因型分布的H-W平衡檢驗

注：A、B、C分別為純合子CC基因型、雜合子CT基因型、純合子TT基因型圖1　CYP17A1基因rs11191548位點基因型實時熒光定量擴增曲線Fig.1　Real-time fluorescence quantitative PCR amplification curves of rs11191548 locus genotype in CYP17A1 gene

EH組和對照組人群CYP17A1基因rs11191548位點均檢測出有CC、CT、TT三種基因型。見圖1。經χ2檢驗兩組的基因型頻率均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P>0.05)。

2.2基因型和等位基因頻率分布

經χ2檢驗兩組間基因型分布差異有統計學意義(χ2=9.812，P<0.05)，兩組間等位基因頻率分布差異有統計學意義(χ2=10.849，P<0.05)，而兩組被檢者中不同性別人群比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　EH組和對照組CYP17A1基因rs11191548位點的多態性

3討論

10q24.3區域的CYP17A1基因內的rs11191548位點編碼細胞色素P450c17alpha蛋白，介導類固醇17alpha-羥化酶和17,20 裂解酶活性，參與膽固醇前體向雄激素或孕激素以及鹽皮質激素或糖皮質激素的轉化。CYP17A1基因的突變可損害腎上腺和性腺中類固醇激素的合成,導致17alpha-羥化酶/17,20 裂解酶缺陷癥。17alpha-羥化酶缺乏可使孕酮不能轉化為17alpha-羥孕酮，以致皮質醇合成不足，促腎上腺皮質激素分泌增加，促使雙側腎上腺增生，同時孕酮、11-去氧皮質酮、皮質酮分泌增加。去氧皮質酮對鹽代謝的影響則表現為水鈉潴留，血容量增加出現高血壓、低血鉀等表現[9]。

目前對CYP17A1基因rs11191548多態性與EH關系的研究結果尚不統一。有研究認為不僅在歐美人群，而且在部分非歐美遺傳背景的人群中CYP17A1基因的rs11191548多態性與收縮壓(SBP)相關[3]。對朝鮮人的研究發現，攜帶CYP17A1基因C最小等位基因能顯著降低SBP、舒張壓(DBP)及高血壓的患病風險[4]。現國內對該基因的研究結論也不統一，有研究認為該基因rs11191548位點多態性與畬族人群高血壓無顯著相關[6]。而另一研究認為該基因rs11191548位點與漢族人群高血壓的關系密切[8]。

但目前國內對CYP17A1基因rs11191548位點的研究仍很局限，在不同地區、不同民族中缺乏統一認識。因此本研究在貴州省漢族EH人群中對CYP17A1基因附近rs11191548位點單核苷酸多態性進行研究。結果顯示，EH組和對照組CYP17A1基因rs11191548位點基因型構成比和等位基因頻率之間差異有統計學意義(P<0.05)。與Hong[4]研究結果一致，提示貴州省漢族EH的發病可能與該基因多態性有關。

總之，本研究證實CYP17A1基因rs11191548多態性可能與EH相關。當然還需要大樣本量的研究進一步證實上述結果，并從基因方面進一步闡述CYP17A1基因與EH相關性。

4參考文獻

[1] Kearnev PM,Whelton M,Revnolds K,et al.Global burden of hypertension:analysis of worldwide data[J].Lancet, 2005(9455):217-223.

[2] Feinleib M, Garrison RJ, Fabsitz R,et al.The NHLBI twin study of cardiovascular disease risk factors: Methodology and summary of results[J].Am J Epidemiol, 1977 (4): 284-285.

[3] Newton-Cheh C，Johnson T，Gateva V，et al．Genome-wide association study identifies eight loci associated with blood pressure[J]．Nat Genet， 2009(6)：666-676．

[4] Hong KW，Jin HS，Lim JE，et al. Recapitulation of two genome-wide association studies on blood pressure and essential hypertension in the Korean population[J]．J Hum Genet， 2010(6)：336-341．

[5] Liu C，Li HX，Qi QB，et al．Common variants in or near FGF5,CYPl7A1 and MTHFR gene are associated with blood pressure and hypertension in Chinese Hans[J]．J Hypertension， 2011 (1)：70-75．

[6] Lin YH,Lai XL,Chen B,et al.Genetic variations in CYPl7Al,CACNB2 and PLEKHA7 are associated with blood pressure and/or hypertension in She ethnic minority of china[J]．Atherosclerosis， 2011 (2)：709-714．

[7] Wu L, Xi B, Zhang M,et al.A sex-specific effect of the CYP17A1 SNP rs11191548 on blood pressure in Chinese children[J].Journal of Human Hypertension, 2012(26):731-736.

[8] Li XM, Ling Y.Common polymorphism rs11191548 near theCYP17A1 gene is associated with hypertension and systolic blood pressure in the han chinese population[J].American Journal of Hypertension, 2013(4):465-472.

[9] 許睿瑋,嚴衛麗.原發性高血壓全基因組關聯研究進展[J]. 遺傳, 2012(7):793-809.

(2015-10-23收稿，2015-12-10修回)

中文編輯： 周凌； 英文編輯： 趙毅

Interrelation betweenCYP17A1 Gene Polymorphisms and Essential Hypertension in Han Nationality of Guizhou Province

ZHOU Qibao1, DIAO Xiaoyan1, ZHANG Ying1, ZHANG Wangde2, ZHAO Xiaomei2， GUAN Zhizhong2

(1.DepartmentofInternalMedicine-Cardiovascular,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China； 2.TheKeyLaboratoryofMolecularBiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the relationship between rs11191548 loci polymorphisms in CYP17A1 gene with essential hypertension in Han inhabitants of Guizhou province. Methods: TaqMan probe method was utilized to analyze the genotype of rs11191548 polymorphism in CYP17A1 gene, which was performed on 198 selected EH inhabitants as EH group and 199 normal inhabitants as control group. Results: Three genotypes of rs11191548 loci in CYP17A1 gene was detected in both groups. The genotype distribution and allele frequency distribution in two group has statistical difference (P<0.05). Conclusions: The rs11191548 loci gene polymorphism of CYP17A1 may be associated with EH in Han inhabitants of Guizhou province.

[Key words]hypertension; CYP17A1; gene polymorphism; alleles; genotype; Han nationality; Guizhou

[中圖分類號]R342; R544.11

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)01-0005-03

*[基金項目]國家科技支撐計劃項目(2013BAI05B03)；貴州省“2011協同創新中心”[黔教合協同創新中心(2014)06號]

**貴州醫科大學2013級碩士研究生

***通信作者 E-mail:dxylly@sina.com網絡出版時間：2016-01-07

網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160107.2018.034.html