微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測TPO-Ab及TG-Ab的實(shí)驗(yàn)室性能驗(yàn)證

耿伏生，張衛(wèi)慶，蘇麗霞，李艷寧

(安陽市燈塔醫(yī)院，河南安陽 455000)

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·臨床研究·

微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測TPO-Ab及TG-Ab的實(shí)驗(yàn)室性能驗(yàn)證

耿伏生，張衛(wèi)慶，蘇麗霞，李艷寧

(安陽市燈塔醫(yī)院，河南安陽 455000)

摘要:目的對(duì)A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)及甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)的性能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)，從而驗(yàn)證該儀器檢測這兩種甲狀腺抗體的可靠性。方法參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)相關(guān)文件的要求，對(duì)儀器檢測TG-Ab及TPO-Ab的參數(shù)進(jìn)行精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染率及線性范圍的評(píng)價(jià)分析。結(jié)果微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測這兩種甲狀腺抗體的精密度、準(zhǔn)確度、樣本攜帶污染率、線性范圍均在允許范圍之內(nèi)。結(jié)論該微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測TG-Ab及TPO-Ab的性能符合質(zhì)量要求，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可對(duì)批量標(biāo)本實(shí)現(xiàn)快速處理，基本上滿足實(shí)驗(yàn)室需要。

關(guān)鍵詞:甲狀腺過氧化物酶抗體；甲狀腺球蛋白抗體；微粒子化學(xué)發(fā)光；性能驗(yàn)證

甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)及甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)是臨床醫(yī)師輔助診斷自身免疫性甲狀腺疾病常用的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道顯示，這兩種抗體聯(lián)合檢測可提高甲狀腺疾病診斷的正確率[1]。由于檢測手段的限制，常采用放射免疫法(RIA)來檢測，近幾年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步和革新，化學(xué)發(fā)光法檢測甲狀腺抗體成為可能，特別是微粒子化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光的應(yīng)用，更加提高了檢測的靈敏度和特異度，并豐富了甲狀腺疾病診斷的新方法[2]。A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀是由鄭州安圖綠科生物有限公司生產(chǎn)的一款完全具備自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的化學(xué)發(fā)光儀，為驗(yàn)證該設(shè)備及其配套試劑檢測TG-Ab及TPO-Ab的可靠性，筆者參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)制訂的方案對(duì)其精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍、攜帶污染率等指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)分析，以驗(yàn)證主要指標(biāo)性能是否滿足實(shí)驗(yàn)室需要。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源高、低值濃度的血清來自2015年1～5月在本院住院的患者。均在基礎(chǔ)狀態(tài)下采集新鮮血液標(biāo)本，2 h內(nèi)送檢，2 500 r/min離心分離血清備用，標(biāo)本要求無溶血、黃疸和脂血。

1.2儀器與試劑鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀及相關(guān)配套試劑(TPO-Ab批號(hào)：20150430；TG-Ab批號(hào)：20150119)，標(biāo)準(zhǔn)品(TPO-Ab批號(hào)：2015040801；TG-Ab批號(hào)：2014121503)，質(zhì)控品(批號(hào)：2015040801)。

1.3方法在儀器狀態(tài)良好的情況下，按照CLSI制訂的驗(yàn)證方案對(duì)TG-Ab及TPO-Ab進(jìn)行性能驗(yàn)證。

1.3.1精密度批內(nèi)不精密度：準(zhǔn)備高值、低值兩個(gè)水平血清樣品分別連續(xù)檢測20次，每次各重復(fù)測定2個(gè)結(jié)果，計(jì)算參數(shù)的批內(nèi)不精密度；批間不精密度：把血清隨機(jī)插入日常標(biāo)本中進(jìn)行測定，重復(fù)測定20 d，計(jì)算參數(shù)的批間不精密度。

1.3.2準(zhǔn)確度分別測定不同于當(dāng)前校準(zhǔn)品批號(hào)的另一種校準(zhǔn)品，稀釋成高、低值濃度，連續(xù)測定5 d，與靶值相比較，并計(jì)算其相對(duì)偏差(Bias)[3]。

1.3.3攜帶污染率試驗(yàn)按照中國行標(biāo)推薦的方法，選擇滿足高低條件的新鮮血清樣品，連續(xù)測定3次高值樣品，結(jié)果記為：H1、H2、H3；立即連續(xù)測定3次低值樣品，結(jié)果記為：L1、L2、L3；分別計(jì)算各項(xiàng)指標(biāo)的攜帶污染率，攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4線性范圍取高值血清樣品進(jìn)行梯度稀釋為10%、20%、40%、60%、80%、100%。然后從低值到高值測定不同稀釋度的樣品，每份重復(fù)測定2次，通過線性回歸方程，得出決定系數(shù)(R2)。

2結(jié)果

2.1精密度

2.1.1批內(nèi)不精密度選擇高、低值兩個(gè)濃度的新鮮樣品進(jìn)行測定，統(tǒng)計(jì)TPO-Ab和TG-Ab的批內(nèi)不精密度，分別分析其CV均在允許范圍內(nèi)(CV≤15.0%)。見表1。

2.1.2批間不精密度隨機(jī)抽取3個(gè)不同批號(hào)的試劑，分別對(duì)濃度為高、低值的樣品進(jìn)行檢測，統(tǒng)計(jì)TPO-Ab和TG-Ab的批間不精密度，分別分析其CV均在允許范圍內(nèi)(CV≤15.0%)。見表2。

表1　　批內(nèi)不精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2　　批間不精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.2準(zhǔn)確度測定不同于當(dāng)前校準(zhǔn)品批號(hào)的另一種校準(zhǔn)品，稀釋成高、低值濃度，分別與靶值相比較，并計(jì)算Bias，檢測高、低值樣品TPO-Ab的Bias分別為7.55%、8.30%，檢測高、低值樣品TG-Ab的Bias分別為-8.95%、6.92%，均在±10%范圍內(nèi)，表明檢測系統(tǒng)準(zhǔn)確度高。見表3。

表3　　準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.3攜帶污染率連續(xù)測定3次高值血清樣品，結(jié)果記為：H1、H2、H3；立即連續(xù)測定3次低值血清樣本，結(jié)果記為：L1、L2、L3；分別計(jì)算樣本攜帶污染率，均符合要求。見表4。

2.4線性范圍線性范圍較好，且濃度與稀釋率具有良好的線性關(guān)系，結(jié)果顯示TG-Ab線性范圍為11.0～1 800.0 IU/mL，TPO-Ab線性范圍為0～380 IU/mL，與廠家注明的線性范圍基本相符。見表5。

表4　　攜帶污染率結(jié)果

表5　　線性范圍測定結(jié)果

3討論

TG-Ab常存在于患有自身免疫甲狀腺疾病的患者體內(nèi)，大約10%的健康人有低水平的TG-Ab；30%的Grave′s患者和85%的Hashimoto′s甲狀腺患者存在較高水平的TG-Ab[4]。然而在這些疾病中，高水平的TPO-Ab比高水平的TG-Ab更為常見[5]。因此，兩種抗體的同時(shí)檢測可提高甲狀腺自身抗體的陽性檢出率。微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測TG-Ab和TPO-Ab采用間接法，用抗原包被磁微粒，辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)，形成抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與抗體水平成正比。

保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性是實(shí)驗(yàn)室工作人員不懈追求的目標(biāo)，本次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中TG-Ab和TPO-Ab的精密度與準(zhǔn)確度都在儀器允許范圍之內(nèi)，樣品攜帶污染率基本符合要求，線性范圍基本能覆蓋臨床標(biāo)本濃度范圍，檢測濃度與稀釋倍數(shù)呈線性相關(guān)。與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫法、RIA法相比較，微粒子化學(xué)發(fā)光法具有可全自動(dòng)化、操作簡便、靈敏度高、線性寬、無放射性污染等優(yōu)點(diǎn)。

通過系統(tǒng)驗(yàn)證A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測TG-Ab和TPO-Ab的基本分析性能的主要性能指標(biāo)，表明A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀及其配套試劑檢測TG-Ab和TPO-Ab的性能良好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可對(duì)批量標(biāo)本實(shí)現(xiàn)快速處理，基本能滿足實(shí)驗(yàn)室需要。

參考文獻(xiàn)

[1]彭鳴亞，徐龍寶，鄧民斌，等．ECLIA法與RRA法檢測血清促甲狀腺激素受體抗體的對(duì)比研究[J]．中國醫(yī)藥指南，2011，9(20)：186-187．

[2]姚韓．血清促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)測定在甲狀腺疾病臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]．吉林醫(yī)學(xué)，2013，34(31)：6513-6514．

[3]張葵．定量檢測系統(tǒng)方法學(xué)性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的基本方法[J]．臨床檢驗(yàn)雜志，2009，27(5)：321-323．

[4]李玉姝，單忠艷，關(guān)海霞，等．甲狀腺過氧化物酶抗體和甲狀腺球蛋白抗體陽性臨界值的確定及其臨床意義[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29(9)：780-783．

[5]仝德勝，許國新，沈國強(qiáng)．時(shí)間分辨熒光免疫法和電化學(xué)發(fā)光法檢測AFP的比較[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28(1)：45-46．

(收稿日期：2015-10-16)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.043

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)05-0674-03