高效價Rh系統抗體致新生兒溶血病研究

賀坤華，馬麗瓊，崔會芬，沈　俊，胡映峰

(云南省曲靖市第一人民醫院輸血科，云南曲靖 655000)

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臨床研究·

高效價Rh系統抗體致新生兒溶血病研究

賀坤華，馬麗瓊，崔會芬，沈俊，胡映峰

(云南省曲靖市第一人民醫院輸血科，云南曲靖 655000)

摘要:目的調查Rh系統抗體引起新生兒溶血病(HDN)患兒的抗體特異性和效價，探討直接抗人球蛋白試驗(DAT)陽性在血清學檢測中的重要性。方法對新生兒鑒定母嬰血型，做HDN三項試驗(DAT、游離抗體試驗和放散試驗)和間接抗人球蛋白試驗(IAT)，并檢測母嬰紅細胞放散液中可致敏新生兒紅細胞的血型抗體特異性和效價。結果2例新生兒DAT均呈強陽性；患兒1 IAT陽性、患兒2陰性。2例新生兒均檢出高效價致敏紅細胞的抗體，分別為：患兒1檢出抗-Ce，其中抗-C效價為128，抗-e為64；患兒2檢出抗-D，效價為256。結論DAT陽性對確診新生兒Rh溶血病具有決定性作用，對HDN試驗的后續展開分析具有方向性作用。

關鍵詞:新生兒溶血病；直接抗人球蛋白試驗；Rh系統；抗-Ce；抗-D

新生兒溶血病(HDN)是因母嬰血型不合，母體內免疫球蛋白G(IgG)類血型抗體經胎盤進入胎兒體內引起的免疫性溶血性貧血。Rh系統較ABO系統引起的HDN病情重、進展快，且多見于Rh陰性婦女[1]。在Rh溶血病的發生中，母親為Rh(D)陰性的患兒中Rh(D)陽性者以抗-D引起的最為多見，其他Rh系統抗體的發生頻率由高到低依次為抗-E、抗-c、抗-C和抗-e[2]。為了確診新生兒Rh溶血病，現將工作中發現的2例高效價抗-Ce、抗-D引起的HDN報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料患兒1：患兒母親22歲，孕2產2，孕39+4周足月，無輸血史，第1胎出生后3 d死亡；患兒出生后全身皮膚、鞏膜重度黃染伴有嚴重貧血，經檢測患兒系抗-Ce引起的Rh系統HDN。患兒2：患兒母親20歲，孕2產2，孕40+2周足月，無輸血史；患兒出生后全身皮膚、鞏膜黃染伴有嚴重貧血，排除因葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)缺乏引起，經檢測患兒系抗-D引起的Rh系統HDN。

1.2儀器與試劑A、B、O 標準紅細胞，篩檢細胞，譜紅細胞(批號：20141021)及2-巰基乙醇均為上海市血液生物醫藥有限公司生產；ABO、Rh 血型鑒定卡，不規則抗體篩檢卡，HDN不完全抗體檢測卡均為長春博訊生物有限公司生產；KA-2200型臺式離心機為日本久保田公司生產；TD-3A型血型血清學用離心機、FYQ型免疫微柱孵育器均為長春博研科學儀器有限責任公司生產。

1.3方法(1)血型鑒定、抗體篩選及鑒定均按文獻[3]方法進行鑒定。(2)血清中不規則抗體鑒定：抗體篩查提示有不規則抗體者，將血清經2-Me處理與譜細胞反應，其中細胞譜中有C和e抗原的細胞均呈陽性反應，進一步對患兒紅細胞進行吸收放散試驗。吸收放散試驗：用(O，CCDEE)、(O，ccDee)紅細胞分別吸收產婦血清，吸收后的血清及乙醚放散液分別再與(O，CCDEE)及(O,ccDee)2種細胞進行反應。

2結果

2.1患兒及其父母紅細胞血型見表1。

表1　　患兒及其父母紅細胞血型

表2　　患兒及產婦抗體篩查試驗

S：篩選細胞；+：陽性；-：陰性。

2.2患兒及產婦抗體篩查試驗患兒1、產婦1、產婦2血清和紅細胞放散液與S1、S2、S3篩選細胞反應均呈陽性，提示有不規則抗體存在；患兒2血清抗體篩查試驗陰性，但直接抗人球蛋白試驗(DAT)強陽性，不能排除不規則抗體的存在，患兒2紅細胞乙醚放散液抗篩陽性，進一步檢測證實為抗-D，考慮為患兒血清中的抗-D已完全致敏紅細胞，因此患兒血清抗篩陰性，而放散液抗篩陽性。見表2。

2.3患兒DAT、游離抗體試驗和放散試驗見表3。

表3　　患兒DAT、游離抗體試驗和放散試驗結果

+：陽性；-：陰性。

2.4患兒及產婦血清中不規則抗體鑒定患兒1及產婦抗體篩查提示有不規則抗體，將患兒1及產婦血清經2-Me處理與譜細胞反應，其中細胞譜中有C和e抗原的細胞均呈陽性反應，進一步對患兒紅細胞進行吸收放散試驗。在患兒1及產婦血清和紅細胞放散液中均檢出抗-Ce；在患兒2紅細胞乙醚放散液中和產婦血清中均檢出抗-D。見表4。

表4　　產婦及患兒紅細胞乙醚放散液與譜細胞反應結果

①：患兒1血清；②：患兒1紅細胞乙醚放散液；③：產婦1血清；④：患兒2紅細胞乙醚放散液；⑤：產婦2血清；/：無數據；+：陽性。

2.5吸收放散試驗為進一步確證抗-Ce為獨立抗體抗-C或抗-e還是聯合抗體抗-Ce，對產婦1血清進行吸收放散試驗，經試驗證實只有聯合抗體抗-Ce，無獨立的抗-C和抗-e抗體。結果證明患者細胞被抗-Ce聯合抗體所致敏。見表5。

2.6抗體效價測定抗人球法：產婦1抗-C為256，抗-e為128；患兒1抗-C為128，抗-e為64；產婦2抗-D為512；患兒2抗-D為256；產婦抗體效價高于患兒。

2.7輸注紅細胞制品選擇患兒1應選擇表型為ccDEE的O型紅細胞輸注；患兒2應選擇O型Rh陰性的紅細胞輸注。

表5　　產婦1血清與(O，CCDEE)及(O，ccDee)紅細胞

+：陽性；-：陰性。

3討論

HDN是新生兒黃疸中常見的一種疾病，黃疸常發生于新生兒出生后24 h內，且進展快，伴有貧血、肝脾腫大，重者可伴有水腫和心力衰竭。在國內以ABO-HDN 為主，其次為 Rh-HDN。引起該病的血型抗體主要為ABO、Rh血型系統抗體，亦可見于其他血型系統抗體[4]。抗體主要由輸血或妊娠免疫刺激產生。

新生兒Rh溶血病很少發生在第1胎。分析原因為：(1)第1胎所產生抗-D抗體效價較低，一般對胎兒無明顯影響；(2)自然界中少有與人類紅細胞上Rh血型抗原相同或相似的抗原存在,以至孕婦血清中Rh血型系統抗體很少存在天然抗體或免疫性抗體[5]。RhD陰性孕婦妊娠次數的增加會導致抗-D的產生概率明顯增加[6]，且妊娠胎次越多，溶血越嚴重。因此，對曾有過生產史、流產史或輸血史的孕婦，應高度重視Rh血型系統及其他血型系統引起的HDN。

本研究結果顯示，2例患兒均系母嬰Rh血型不合，無ABO血型不合，可以排除合并ABO-HDN。2例患兒DAT均呈強陽性，值得注意的是患兒1間接抗人球蛋白試驗(IAT)陽性、患兒2陰性，曾一度懷疑是否有繼續試驗的價值。繼續試驗患兒2紅細胞乙醚放散液IAT陽性，為后續試驗的展開分析提供了幫助，2例患兒均檢出高效價致敏紅細胞的抗體。駱宏等[7]報道過1例IgG抗-D合并IgG抗-B引起的HDN。因此，在做溶血試驗時，O型Rh陽性的HDN患兒不能以血型排除溶血病的可能，單一IAT陰性并不能排除患兒有不規則抗體，單一血型抗體或多系統血型抗體合并均會導致HDN。

由于新生兒的A(B)抗原密度較成人低，被結合的抗體也很少，因此許多ABO-HDN直抗通常為陰性或弱陽性。而Rh-HDN的直抗都相當強，一般大于或等于2+，因此新生兒直抗強弱是區別ABO-HDN和Rh-HDN的重要標志[8]。并可依據直抗強弱決定放散方法，直抗大于或等于2+時常用乙醚放散，反之則常用熱放散。患兒經血清學檢測鑒定了抗體的特異性，檢測排除其他診斷，綜合所有試驗結果分析，2例患兒均系高效價Rh系統抗體引起的HDN。立即聯系臨床醫生，制訂患兒的輸血策略，為患兒進行了換血療法和綜合治療，黃疸逐漸消退，貧血糾正，病愈出院。

綜上所述，DAT陽性時要警惕Rh血型系統和其他血型系統引發的溶血病， DAT陽性對HDN試驗的后續展開分析具有方向性作用。為了確診新生兒Rh溶血病，應結合HDN三項試驗和IAT試驗結果進行綜合分析，避免漏檢影響診療效果。

參考文獻

[1]陳蕤，穆士杰，張獻清，等．抗-cE聯合抗體致新生兒溶血病1例[J]．臨床血液學雜志:輸血與檢驗版，2011，24(1)：119-120．

[2]張欽輝，高峰，朱永明．臨床輸血學[M]．上海：上海科學技術出版社，2000：97-102．

[3]劉達莊．免疫血液學[M]．上海：上海科學技術出版社，2002：128-144．

[4]寇麗筠，陳宏礎，叢玉隆，等．臨床基礎檢驗學[M]．北京：人民衛生出版社，1999：79．

[5]朱碎永，朱燕英，林甲進．新生兒Rh溶血病的檢查分析及預防[J]．中國優生與遺傳雜志，2007，15(3)：68-69．

[6]徐華，葉世輝，邵超鵬，等．Rh陰性孕婦血型D抗原同種免疫反應研究[J]．中國輸血雜志，2010，23(4)：276-279．

[7]駱宏，汪傳喜，羅廣平，等．IgG抗-D合并IgG抗-B所致新生兒溶血病的試驗診斷[J]．中國輸血雜志，2009，22(10)：799-801．

[8]高峰．臨床輸血與檢驗[M]．2版．北京：人民衛生出版社，2007：114．

(收稿日期：2015-11-29)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.032

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)05-0654-03