3種缺血修飾清蛋白試劑盒分析性能的驗證試驗

何　謙，楊銳華，王　琪

(西安交通大學第二附屬醫院檢驗科,陜西西安 710004)

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·論著·

3種缺血修飾清蛋白試劑盒分析性能的驗證試驗

何謙，楊銳華，王琪

(西安交通大學第二附屬醫院檢驗科,陜西西安 710004)

摘要:目的驗證3種缺血修飾清蛋白(IMA)檢測試劑盒的主要分析性能。方法在Olympus AU5800全自動生化分析儀上對上海艾康生物技術有限公司、浙江夸克生物科技有限公司和北京九強生物技術有限公司的比色法IMA試劑(試劑A、B、C)進行性能驗證，參考美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP6-A、EP15-A、EP7-A文件和《WS/T 420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》要求對3種試劑的精密度、線性范圍、正確度、抗干擾能力進行評估。結果試劑A、B、C的批內變異系數(CV)分別為0.59%～0.82%，0.27%～0.54%,0.62%～0.69%，批間CV分別為0.98%～1.74%，0.99%～1.01%,0.71%～0.78%,均小于試劑盒聲明的不精密度；線性范圍分別為11～142 U/mL(相關系數r2=0.993)、10～120 U/mL(r2=0.996)、14～123 U/mL(r2=0.992)，試劑A、B、C的線性范圍均良好。當干擾物維生素C小于或等于10 mg/dL，血紅蛋白小于或等于200 mg/dL，總膽紅素小于或等于40 mg/dL,三酰甘油小于或等于500 mg/dL時，3種IMA試劑檢測結果偏差均不超過±10%，對3種試劑無明顯干擾。結論3種IMA檢測試劑盒均具有較高的精密度，可滿足臨床要求，但抗干擾能力存在一定的差異。

關鍵詞:缺血修飾清蛋白；比色法；自動分析

缺血修飾清蛋白(IMA)是美國食品藥品管理局(FDA)認可的第一個檢測心肌缺血的生化標志物[1-2]，它在心肌缺血早期患者的血液中就有變化，且在一次缺血后24 h內血中的濃度恢復至基礎水平，因此能夠檢測復發性缺血。隨著IMA臨床應用的逐步推廣，已有較多實驗室開展了血清IMA的檢測。本室在Olympus AU5800全自動生化分析儀上對3種清蛋白-鈷結合比色法IMA試劑盒的精密度、線性范圍、正確度、抗干擾能力等性能進行了分析評價，現報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源(1)干擾試驗血清：收集患者混合血清用于干擾試驗。(2)精密度驗證混合血清：將已知IMA濃度的患者血清混合，制備高、低濃度兩份混合血清，各分裝20份于-20 ℃ 凍存，用于精密度試驗。

1.2儀器與試劑(1)儀器：Olympus AU5800全自動生化分析儀。(2)試劑A：上海艾康生物技術有限公司出品的IMA試劑(批號20150204)及其配套校準品；試劑B：浙江夸克生物科技有限公司出品的IMA試劑(批號150317 )及其配套校準品；試劑C：北京九強生物技術有限公司出品的IMA試劑(批號14-0814)及其配套校準品。干擾物維生素C(VitC)由美國Sigma公司提供(批號080M0097V)，血紅蛋白(Hb)由美國Merck公司提供(批號D00121602)，總膽紅素(TBIL)由美國Frontier Scientific公司提供(批號JH12-6936)，三酰甘油(TG)由華瑞制藥提供(批號80GK041)。

1.3方法

1.3.1批內不精密度用3種試劑分別檢測低值、高值兩份新鮮血清樣品，重復20次，計算各試劑兩水平的批內變異，并確認其不精密度范圍是否與廠商標注的不精密度符合。

1.3.2批間不精密度依據美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP15-A文件[3]提供的方案，用3種試劑分別測定高、低兩個水平的混合血清，連續檢測5 d，每天測4次，計算批間變異，并確認其不精密度范圍是否與廠商標注的不精密度符合。

1.3.3線性范圍評價根據NCCSL EP6-A文件[4]選擇接近線性范圍上限值的血清標本2～3份，接近下限值的血清標本2～3份，分別混勻，得到本實驗所需的低值樣品(L)和高值樣品(H)。按照0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H的方法配制混合樣品，每份樣品連續測定3次，并求平均值。判定結果：計算均值與理論值的差異，并將均值曲線與理論曲線進行相關性分析，若相關系數r2>0.95，斜率(b)在0.97～1.03范圍內，則可直接判斷測定方法在實驗所涉及的濃度范圍內成線性。

1.3.4干擾試驗參考NCCSL EP7-A文件[5]提供的方案并進行部分調整后，將干擾物進行配制，在患者混合血清中加入一定體積的干擾物，干擾物濃度梯度1、1/2、0,按照比例在患者血清中加入VitC、Hb、TBIL、TG；用試劑A、B、C分別測定每個濃度混合血清，計算添加干擾物后測量的偏差(Bias)。超過±10%則判為存在干擾。

1.3.5正確度驗證根據《WS/T 420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》[6]這一行業標準，檢測廠家提供的定值IMA質控品，計算偏差。超過±10%則判為存在偏差。

1.4統計學處理采用Excel2003及SPSS16．0統計軟件進行數據處理與統計學分析，相關性分析采用Pearson相關分析，線性回歸采用簡單線性回歸分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1批內不精密度3種試劑的實測精密度均小于各自試劑盒標注的5%～10%，變異較小，可滿足臨床應用。低值與高值血清檢測結果及批內變異系數(CV)，見表1。

表1　　3種試劑的批內不精密度

2.2批間不精密度實測批間精密度均小于各自試劑盒標注的5%～10%，可滿足臨床應用。低值與高值血清檢測結果及批間CV，見表2。

表2　　3種試劑的批間不精密度

2.3線性范圍試劑A、B、C評價的樣品濃度范圍分別為11～142 U/mL、10～120 U/mL、14～123 U/mL，預期值與實測值擬合相關方程Y=bX+a中b分別為0.982、0.993、1.007，r2分別為0.993、0.996、0.992，試劑A、B、C的線性范圍均良好。

2.4干擾試驗VitC≤10 mg/dL，Hb≤200 mg/dL，TBIL≤40 mg/dL，TG≤500 mg/dL時，3種IMA試劑檢測結果偏差均不超過±10%，但抗干擾能力存在一定差異。見表3。

表3　　不同濃度干擾物對IMA檢測結果產生的Bias(%)

2.5正確度檢測各試劑廠家提供的定值質控品，靶值偏差分別為-8.82%、9.30%、-4.49%，均在質控范圍內。

3討論

按照國際標準化組織(ISO)發布的ISO15189要求，臨床實驗室在使用新試劑之前需要對多項重要性能進行驗證。性能驗證實驗需要簡明、可操作性強的實驗方案，使用盡可能少的標本數，并得到能夠代表臨床檢測真實情況的實驗結果。美國臨床實驗室改進修正法案(CLIA′88)明確提出臨床實驗室可只對正確度、精密度和可報告范圍進行驗證。為證實3種IMA定量試劑盒基本性能的可靠性，筆者依據NCCLS發布的EP15-A、EP6-A文件及《WS/T 420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》的要求，對3種試劑盒的上述主要分析性能進行了驗證。結果顯示：3種試劑精密度、線性范圍及正確度等基本檢測性能均可以滿足臨床檢測需求。

本室還參考NCCLS EP7-A文件對3種IMA試劑的抗干擾能力進行了分析評價。本研究采用外源添加VitC、TBIL、Hb及TG 4種常見干擾物的方法對IMA試劑進行了干擾測試，結果顯示：3種試劑的抗干擾能力不一，試劑A抗干擾能力最強，試劑B對VitC的抗干擾能力最弱。

根據《WS/T 420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》要求，采用患者標本與其他檢驗方法的試劑盒進行比較，或者采用參考物質進行正確度驗證試驗。由于目前無法購得其他檢驗方法的試劑盒，且室間質評物質、第三方提供的賦值物質均無法得到，筆者使用了文件推薦的各廠家提供的驗證正確性的質控物質進行正確度驗證實驗，結果均低于廠家聲明的允許Bias范圍(10%)。

綜上所述，3種測定IMA的試劑盒均具有較高的精密度、正確度，線性范圍良好，可滿足臨床要求，但抗干擾能力存在一定的差異。

干擾能力存在一定的差異。

參考文獻

[1]吳定昌，黃曉華，盧新兆．急性冠脈綜合征患者IMA與hs-CRP、cTnT診斷價值[J]．齊齊哈爾醫學院學報，2013，34(9)：1259-1261．

[2]Bar-Or D，Winkler JV，Vanbenthuysen K，et al．Reduced albumin-cobalt binding with transient myocardial ischemia after elective percutaneous transluminal coronary angioplasty:a preliminary comparison to creatine kinase-MB,myoglobin and troponin Ⅰ[J]．Am Heart J，2001，141(6)：985-991．

[3]National Committee for Clinical Laboratory．EP15-A User demonstration of performance for precision and accuracy[J]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2001.

[4]National Committee for Clinical Laboratory．EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach[S]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2003.

[5]National Committee for Clinical Laboratory．EP7-A Interference testing in clinical chemistry[S]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2002.

[6]中華人民共和國衛生部．WS/T 420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證[M]．北京：中國標準出版社，2013．

Performance verification of three ischemia-modified albumin reagents

HeQian，YangRuihua，WangQi

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

Abstract:ObjectiveTo verify the performance of three kinds of ischemia-modified albumin(IMA) reagents.MethodsThe performance of three IMA reagents(labeled as reagent A,B,C) using colorimetric method from Shanghai Aikang Biotechnology Co.,Ltd.,Zhejiang Kuake Bioscience Technology Co.ltd.and Beijing Jiuqiang Biotechnology Co.,Ltd.were assessed by using Olympus AU5800 automatic biochemistry analyzer.According to the National Committee for Clinical Laboratory(NCCLS) EP6-A,EP15-A and EP7-A documents and WS/T 420-2013 verification of analytical performance of quantitative kits by clinical laboratory,the precision,linearity range,accuracy and anti-interference capability were assessed.ResultsThe within-run coefficient of variations(CVs) of reagent A,B and C were 0.59%-0.82%,0.27%-0.54% and 0.62%-0.69% respectively.The between-run CVs of reagent A,B and C were 0.98%-1.74%,0.99%-1.01% and 0.71%-0.78%,respectively,which were lower than declarations of these reagent kits.The linearity range of reagent A,B and C were 11-142 U/mL(r2=0.993),10-120 U/mL(r2=0.996),14-123 U/mL(r2=0.992) respectively,which showed good linearities.About interference tests,no remarkable interferences(all Bias were less than ±10%) of reagent A,B and C were detected when Vitamin C≤10 mg/dL,hemoglobin≤200 mg/dL,bilirubin≤40 mg/dL and triglyceride≤500 mg/dL.ConclusionThe three IMA reagents show high precision,which could meet clinical requirements,nevertheless,differences of anti-interference capabilities are observed in these three reagents.

Key words:ischemia-modified albumin；colorimetric method；autoanalysis

(收稿日期：2016-01-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.011

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)05-0606-03

作者簡介：何謙，女，主任技師，主要從事臨床生物化學與檢驗研究。