應用秩和比法綜合評價幾種促透劑的效果

惲昊，肖海容，鄧春燕，王愛娟，王暉

(廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006)

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藥理學

應用秩和比法綜合評價幾種促透劑的效果

惲昊，肖海容，鄧春燕，王愛娟，王暉

(廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州 510006)

摘要:目的 探討基于秩和比(RSR)值的秩和比法在透皮吸收促進劑促透效果綜合評價中的應用。方法 研究1%冰片、1%氮酮、1%薄荷醇、1%冰片+1%氮酮、1%薄荷醇+1%氮酮和1%冰片+1%氮酮+1%薄荷醇對模型藥物雙氯芬酸鈉在雌性SD大鼠的離體背部皮膚進行透皮實驗，計算滯后時間、滲透系數、穩態流量和增滲倍數，利用秩和比法的RSR值綜合評價促透效果。結果 1%冰片+1%氮酮+1%薄荷醇和1%薄荷醇+1%氮酮組對雙氯芬酸鈉的促透效果最好，1%冰片+1%氮酮、1%薄荷醇和1%氮酮次之，1%冰片最差。結論 基于RSR值的秩和比法可作為促透劑科學、客觀評價的一種新方法。

關鍵詞:秩和比法； 促透劑； 促透效果

目前考察促透劑促透效果評價的指標主要有單一指標評價和多指標綜合評價法。單一指標評價主要有穩態透皮速率(Js)、滲透系數(Kp)、增滲倍數(ER)、累積透過量(Q)、穩態流量(Jss)和滯后時間(Tlag)等[1]；綜合評價法有：熵權系數法[2]、主成分分析法[3]、Topsis[4]等。但單指標評價由于評價標準是界限明顯的量化標準，將遺漏一些有用的信息,往往存在不合理，難以做出確切的評價。多指標綜合評價方法是把描述評價對象不同方面的多個指標的信息綜合起來,并得到一個綜合指標，由此對評價對象作一個整體上的評判，是目前比較受關注的一種評價方法。目前處于不成熟的狀態，有待進一步研究。

秩和比法是一種多指標評價法，集參數統計與非參數統計于一體，以秩和比為統計分析結果的評價模型，是一種理論簡單、客觀實際、易于解釋的方法。本研究用秩和比法對不同類型促透劑的多個指標進行綜合評價，為合理使用促透劑提供實驗依據。

1材料

1.1動物

SPF級SD大鼠，雌性，廣州中醫藥大學實驗動物中心提供,體質量180～220 g，生產許可證號：SCXK(粵)2008-0020。

1.2主要儀器

UV-2450紫外可見分光光度計(日本，島津)；雙室透皮擴散裝置(自制)；KYC 100B恒溫氣浴(上海福瑪實驗設備有限公司)；電子天平(福州富日衡之寶電子有限公司)。

1.3藥品與試劑

雙氯芬酸鈉(中國藥品生物制品鑒定所，批號：H00328-200502)；氮酮(新鄉高金藥業有限公司，批號：20110710)；冰片(廣州化工廠)；薄荷醇(上海品純試劑有限公司，批號：201008268)；其余所用試劑均為分析純。

2方法

2.1透皮吸收實驗

2.1.1方法學考察波長范圍內掃描，選取其最大吸收波長275 nm作為檢測波長。精密檢測后得回歸方程為：y=0.002 05x+0.001 4(R2=1.000 0)，y為吸光度值，x為濃度值，線性范圍為：2.50～50.00 μg/mL。見圖1。

1.21.00.80.60.40.20A1020304050600y=0.0205x+0.0014R2=1.0000ρ/(μg?L-1)

圖1雙氯芬酸鈉的標準曲線圖

Figure 1Standard curve of diclofenac sodium

實驗測得日內精密度RSD為：0.41%、0.42%、0.39%,日間精密度RSD為：1.65%、1.23%、0.99%，精密度良好。取5.00、10.00、25.00 μg/mL 3個濃度雙氯芬酸鈉溶液2.00 mL，每個濃度取3個樣品，分別加入10.21 μg/mL 溶液2.00 mL，測定其吸光度值，以測得量與加入量的比值計算回收率。回收率分別為102.99%、102.44%、101.27%，RSD分別為0.083%、0.079%、0.036%，回收率合格。并且鼠皮浸出物對雙氯芬酸鈉在275 nm 附近沒有干擾峰出現，說明此實驗方法符合檢測要求。

2.1.2離體皮膚的制備將大鼠脫臼處死后，用剃毛器小心剃去大鼠背部的毛，剪下背部皮膚，去除皮下脂肪組織，用生理鹽水反復沖洗，直至無混濁為止。然后放在4 ℃冰箱中保存，1周內使用。

2.1.3釋放液和接收液的制備根據各促透劑的常見用量，用75%(φ)乙醇作為溶媒，制成以下各組質量分數(%)的釋放液: 1組，空白組，不含促透劑；2組，含1%冰片；3組，含1%氮酮；4組，含1%薄荷醇；5組，含1%冰片+1%氮酮；6組，含1%薄荷醇+1%氮酮；7組，含1%冰片+1%氮酮+1%薄荷醇。各組中雙氯芬酸鈉的質量分數均為1%,接受液為生理鹽水。

2.1.4透皮實驗在雙室透皮擴散裝置上[5],以離體大鼠背部的皮為滲透屏障進行體外透皮吸收實驗。釋放液用量為0.1 mL,接收液5 mL,實驗溫度(32.0 ±1.0) ℃,振速為120次/min，擴散面積0.502 cm2,在2、4、8、12、24 h時間點分別取4 mL,同時補加等量接收液，測定吸光度，代入回歸方程求得濃度C，算出不同時間的累積滲透量Q。

2.1.5透皮實驗結果的數據處理[4]按下式計算透皮累積滲透量Q(μg·cm-2)：

(1)

式中Q為n時間點的累積滲透量；A為擴散滲透面積(cm2),Cn為第n個取樣點的藥物濃度(μg/mL)，Ci為第i個取樣點的藥物濃度,V1為接收液體積，V2為取樣量。

以Q對時間(t)進行線性回歸擬合，所得方程的直線斜率即為穩態流量Jss(μg·cm-2·h-1)； 滯后時間(Tlag，h)和穩態流量Jss(μg·cm-2·h-1)的計算按下式進行:

Q=Jss×t-Jss×Tlag

(2)

藥物的滲透系數(Kp)按下式計算：

Kp=Jss/c

(3)

式中C為樣品池的藥物濃度。

增滲倍數(ER)按下式計算：

ER=Kp/Kpo

(4)

式中Kp為加促透劑后藥物的滲透系，Kpo為藥物固有的滲透系數，即本實驗中未加促透劑(空白)的滲透系數。

2.2秩和比法綜合評價促透劑的效果[6]

2.2.1評價指標的分類將不同評價指標按實際意義區分類型，一般分為3類：高優指標、低優指標和適度指標。對于低優指標和適度指標先高優化，再按高優指標處理。一般情況下，對于低優指標，通常取原低優指標的倒數就可得到正向指標Y，即

(5)

對于適度指標Xi，應先確定一個最優適度值X0，再按下述公式轉化為高優指標：

(6)

2.2.2編秩在秩和比(RSR)法中，每一個具體指標按其值大小進行排序得到秩次R，用秩次R代替原來指標值，即在n個評價對象中，高優指標的編秩方法是對最大觀測值編秩次n，次最大觀測值編秩次n-1，次小的觀測值編秩次2，最小的觀測值編秩1。如遇同一指標觀測值相等時，則編秩平均秩次，如甲、乙兩個評價對象的某個指標實際值相等，本應它們之間排除第6位和第7位，這時均應取為第6.5位。則排序得到的秩次為：

R11,R12……R1n

R21,R22……R1n

Rn1，Rn2……Rnn

式中：Ri(i=1,2,……,m)是按照排序的各列秩次，m為指標數，n為被評價對象數。

2.2.3計算RSR值計算各行秩和比值：

(7)

2.2.4確定Y值，計算回歸方程將RSR值從小到大排列，計算向下累積頻率，并據此查《百分數與概率單位對照表》，求其所對應概率單位Y值。通過相關和回歸分析，要求R2至少大于等于0.9，以說明RSR與Y具有高度的線性相關關系。以RSR為因變量，概率單位Y為自變量，計算線性回歸方程：

RSR=A+B×Y

(8)

并進行方差分析，要求所求線性回歸方程有統計學意義(P<0.01)。

2.2.5對被評價對象最佳分檔評價對象進行分檔的原則是：每檔至少2個個體，各檔方差一致，各檔之間差異有統計學意義，即應用Bartlett檢驗方差一致，進而進行方差分析，要求各檔差異具有統計學意義。A取0.01，用SNK法兩兩比較，要求各檔間的差異均有統計學意義(P<0.01)。

3結果

3.1幾種促透劑對雙氯芬酸鈉透皮吸收的影響

計算Jss、Tlag、Kp和ER，見表1。考慮到實驗中雙氯芬酸鈉使用的促透劑較多，本研究提出理想促透劑這一指標，建立基于秩和比的評價體系。將滲透系數、穩態流量、增滲倍數和滯后時間4個指標按照以下原則進行排序編秩。高優指標最大值編以最高秩次，最小值編以1。編秩RSR法中，按各評價指標分別對被評價單位進行編秩，情況越好，秩次應編得越高，當有相同值存在時，應使用平均秩次，對于評價指標，從評價方向來說，分為高、低指標，前者是取值越大越好，后者反之。

表1　不同促透劑對雙氯芬酸鈉透皮吸收的影響

注：括號內數字為編秩的秩次，情況越好秩次越高。

3.2各種促透劑促透效果RSR的分布情況

根據RSR的分布，計算回歸方程將各種促透劑促透效果的RSR值由小到大排列起來，計算頻率及向下累計頻率，通過查《百分數與概率單位對照表》，求出其對應的概率單位值Y，見表2。

表2各種促透劑促透效果RSR的分布情況統計

Table 2RSRdistribution of the promoting effect of different transdermal enhancers

RSRff累加RRR/n×100%Y0.179111114.33.9330.429122228.64.4350.571243～43.550.05.0000.607155571.45.5650.750166685.76.0700.893177798.0*7.054

*按1-(7/50n)校正。

運用相關和回歸分析，RSR與Y具有較高的線性相關關系(R2=0.939 2)，它們之間的線性回歸方程為RSR=0.213 0Y-0.566 5，方差分析結果顯示：F=61.81，P=0.001<0.01,說明所求線性回歸方程非常顯著。

3.3各促透劑使用RSR分檔表情況

根據促透劑促透效果RSR值，擬分差、中、好3檔，見表3。方差分析:F比較大，P<0.01，說明分檔相差非常顯著，兩兩比較，各檔間差異有統計學意義。根據RSR由大到小大小排序分檔，得到對雙氯芬酸鈉的促透效果從優到劣順序為1%薄荷醇+1%氮酮+1%冰片和1%氮酮+1%薄荷醇兩組最好，1%薄荷醇、1%氮酮、1%氮酮+1%冰片3組的促透效果次之，1%冰片最差。結果表明：1%薄荷醇、1%氮酮、1%冰片均有促透作用，其中作用效果最好的是三者聯用，最差的是1%冰片。

表3各促透劑使用RSR分檔表情況統計

Table 3Statistics of penetration enhancers usingRSRfile table

分檔差中好Y<5.05.0

4討論

由單一指標如穩態流量、滯后時間、滲透系數、增滲倍數簡單評價不能全面、客觀的評價反映促透劑的促透效果。秩和比法是利用穩態流量、滯后時間、滲透系數、增滲倍數4個指標，提出理想促透效果指標對藥物的促透效果進行綜合評價。秩和比法是基于秩和比這一綜合指標來概括多個指標綜合水平的統計學方法，利用RSR值的大小來反映促透劑的促透效果。秩和比法為反映藥物經皮吸收情況提供了一種新方法。

秩和比法利用RSR值進行統計分析，基本思想是：首先將各指標編秩獲得無量綱統計量RSR值，在此基礎上，運用參數統計分析的概念和方法，確定RSR分布，最后對RSR分析結果進行科學闡釋．算得的RSR值越大越好，根據促透劑的促透效果，對不同指標合理編秩進行科學的評估，并用于指導促透劑的分配使用。

本次透皮吸收實驗的數據處理利用秩和比法綜合4個指標，評價1%薄荷醇、1%氮酮、1%冰片或者其相互聯用對雙氯芬酸鈉的促透作用。其中促透作用最好的是1%薄荷醇+1%氮酮+1%冰片。氮酮、薄荷醇和冰片3種促透劑已經被廣泛應用于藥物透皮吸收[7-8]。薄荷醇屬于中藥促進劑，毒副作用比人工合成促透劑低，而且本身具有一定的藥理作用，兼具治療和促透兩種作用。氮酮對皮膚的毒性、刺激性都很低，冰片的促透作用可能存在多種方式，進入血腦屏障可能是作用機制之一[9]。冰片近年的研究表明，在臨床實踐應用中，冰片能促進藥物吸收，增強血管壁通透性，促進血腦屏障開放，提高藥物治療效果。氮酮對皮膚的毒性、刺激性都很低。1%氮酮是良好的促滲劑[10]，是目前廣泛應用的透皮吸收促進劑。但三者的聯用效果有待科學的深入研究。實驗結果表明三者聯用促透效果最好，氮酮與薄荷醇聯用效果都是最好，而冰片單用效果最差。原因可能是冰片對本實驗采用的藥物雙氯酚酸鈉的促透效果不明顯，因此三者聯用和氮酮與薄荷醇兩者聯用效果同樣是最好。

本實驗所用的秩和比法是一組統計信息分析方法，具有簡單實用、且將非參數統計和參數統計相互融通，集描述性和推斷性為一身的特點。將其用于評價促透劑的促透效果合理應用上，可以消除不同指標的影響，反映多個指標的綜合分配情況，避免了單一指標評價的片面性，因此，秩和比法可以作為評價促透劑促透效果的新方法。

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(責任編輯：幸建華)

Evaluation of promoting effect of several transdermal enhancers withRSR

YUN Hao,XIAO Hairong,DENG Chunyan,WANG Aijuan,WANG Hui

(SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To investigate the application of RSR in evaluating the promoting effect of transdermal enhancers. Methods Diclofenac sodium was used as drug mode. 1% borneolum,1% azone,1% menthol,1% borneolum+1% azone,1% menthol+1% azone and 1% borneolum+1% azone+1% menthol were used as transdermal enhancers. Transdermal absorption experiment of diclofenac sodium was detected on the device of penetrating skins of rat in vitro and lag time,penetrating rates,steady fluxes and enhancement ratio were calculated to evaluate the promoting effect of transdermal enhancers with RSR. Results The promoting effect on diclofenac sodium showed that 1% borneolum+1% azone+1% menthol and 1% menthol+1% azone were the best. The function drops slightly with 1% azone+1% borneolum,1% menthol and 1% azone ranked behind. The worst was 1% borneolum. Conclusion The promoting effect of transdermal enhancers could be objectively evaluated by RSR.

Key words:RSR; transdermal enhancers; promoting effects of transdermal enhancers

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015102303

中圖分類號:R283

文獻標志碼:A

文章編號:1006-8783(2016)01-0061-05

作者簡介：惲昊，男，2013級碩士研究生,主要從事中藥皮膚藥理學的研究，Email：xikuangyh@163.com；通信作者：王暉(1964—)，男，碩士，教授，主要從事皮膚藥理學研究，Email:gdwanghui2006@126.com。

基金項目：廣東省人才培養模式創新實驗區([粵教高函[2014]97號])資助項目

收稿日期：2015-10-23

網絡出版時間：2016-01-12 11:44網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160112.1144.005.html