蛋白質(zhì)非酶糖基化終產(chǎn)物對足細(xì)胞自噬與凋亡的影響

陳結(jié)慧 祝勝郎 葉 玲 朱恒梅 蔣 瑩 李就鴻

(深圳市第六人民醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東 深圳 5108052)

·論著·

蛋白質(zhì)非酶糖基化終產(chǎn)物對足細(xì)胞自噬與凋亡的影響

陳結(jié)慧 祝勝郎*葉 玲 朱恒梅 蔣 瑩 李就鴻

(深圳市第六人民醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東 深圳 5108052)

目的:探討蛋白質(zhì)非酶糖基化終產(chǎn)物(AGEs)作用下人足細(xì)胞自噬和凋亡發(fā)生情況及可能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。方法:體外培養(yǎng)永生化人足細(xì)胞，以AGEs 100 mg/L分別不同時間(0、4、8、12、24 h)刺激足細(xì)胞。Western blotting檢測足細(xì)胞自噬標(biāo)記性蛋白微管相關(guān)蛋白1B輕鏈3 -II/I(LC3- II/I)、自噬相關(guān)基因Atg5、哺乳動物雷帕霉素靶點(diǎn)受體(mTOR)信號通路相關(guān)蛋白p70 S6 激酶1(p-p70 S6 Kinase，p70 S6 Kinase)表達(dá)水平；熒光顯微鏡觀察自噬溶酶體形成標(biāo)志蛋白溶酶體膜蛋白(LAMP2a)；AnnexinⅤ/7-AAD雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測足細(xì)胞早期和晚期凋亡。結(jié)果: ①與0 h相比，100 mg/L AGEs刺激后足細(xì)胞LC3B- II/I表達(dá)水平在4、8、12、24 h均明顯下降(P<0.05)；Atg5蛋白表達(dá)水平在8、12、24 h均明顯下降(P<0.05)，在12 h下降達(dá)到最高峰；p-p70 S6 Kinase水平在4、8、12 h升高(P<0.05)，在12 h達(dá)峰，在24 h再次下降；②免疫熒光染色結(jié)果顯示，與0 h相比，100 mg/L AGEs刺激足細(xì)胞12 h LAMP2a表達(dá)明顯減少；③與0 h相比，100 mg/L AGEs刺激后足細(xì)胞發(fā)生早期凋亡+晚期凋亡比例在4、8、12、24 h逐漸增加(P<0.05)，在12 h達(dá)峰(14.07%)。結(jié)論: AGEs刺激下人足細(xì)胞自噬減少，凋亡增加，伴隨著mTOR/p70 S6 Kinase信號通路激活。AGEs可能通過mTOR/p70 S6 Kinase信號通路途徑調(diào)節(jié)足細(xì)胞自噬與凋亡，從而導(dǎo)致足細(xì)胞損傷。

足細(xì)胞；自噬；凋亡；糖尿病腎病

足細(xì)胞的損傷和丟失是糖尿病腎病(DN)的主要病理改變之一。自噬和凋亡是調(diào)節(jié)細(xì)胞存活和死亡的兩種不同方式，在體內(nèi)呈一個動態(tài)平衡的過程，共同決定細(xì)胞的命運(yùn)。已有研究表明，自噬在腎臟損傷中起保護(hù)作用[1]。在糖尿病腎病動物模型中，觀察到腎臟固有細(xì)胞自噬的減少，凋亡的增加，提示自噬異常參與了糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制[2-3]。然而，進(jìn)一步的體外研究及相關(guān)信號通路的研究鮮有報道。蛋白質(zhì)非酶糖基化形成的晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)在介導(dǎo)慢性高血糖致DN 的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。本研究擬通過體外培養(yǎng)人腎臟足細(xì)胞，探討AGEs刺激下人足細(xì)胞自噬和凋亡發(fā)生的情況及可能的作用通路,為進(jìn)一步明確糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。……