獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清制備的影響因素及解決辦法

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獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清制備的影響因素及解決辦法

從室外畜禽采血到室內(nèi)血清分離，通過(guò)對(duì)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清制備各環(huán)節(jié)的分析，找出影響血清制備效果的因素，并探討提出控制或解決影響因素的辦法。

血清是血清學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)必備的材料，足量、合格的血清是保證血清學(xué)檢測(cè)成功的重要條件。血清的制備受多種條件的影響，對(duì)各種影響因素探討如下：

1 采血環(huán)節(jié)影響

1.1 采血部位（1）豬采血部位可選擇前腔靜脈和耳靜脈。但作重大動(dòng)物疫病免疫效果監(jiān)督檢測(cè)需大批量采血時(shí)宜選擇前腔靜脈，因?yàn)榍扒混o脈出血量大，出血連續(xù)，不易污染，血清易析出，而且對(duì)豬保定簡(jiǎn)單，采血效率高。（2）禽采血部位可選擇翅內(nèi)側(cè)腋靜脈和心臟。一般選擇翅內(nèi)側(cè)腋靜脈采血。在對(duì)淘汰禽檢測(cè)或技能競(jìng)賽時(shí)多選擇心臟采血法。（3）牛采血部位可選擇頸靜脈和尾根靜脈。牛尾根靜脈較粗且位置淺，尾神經(jīng)敏感性不強(qiáng)，對(duì)牛的應(yīng)激小，采血對(duì)牛保定要求低，所以對(duì)奶牛等宜選用尾根靜脈采血。（4）羊采血部位在頸側(cè)靜脈。

1.2 采血針頭（1）豬前腔靜脈采血。豬大小不一樣，前腔靜脈的深淺和粗細(xì)也不一樣，因此對(duì)針頭選擇差異較大。體重≦10kg的乳豬宜用9*20mm針頭，10kg＜體重≦30kg的保育豬宜用9*25mm針頭，體重＞30kg的育肥豬宜用12*38mm針頭，對(duì)種公母豬采血宜用16*50mm針頭。（2）豬耳靜脈采血宜用7號(hào)針頭。（3）其他家畜家禽宜用7號(hào)針頭。

1.3 采血時(shí)間 畜禽禁食8h（空腹）后進(jìn)行采血，日常多選擇在早上或午后采血。

1.4 血樣編號(hào) 對(duì)采血樣品編號(hào)時(shí)多用阿拉伯?dāng)?shù)字編寫，為了避免不同環(huán)節(jié)實(shí)驗(yàn)人員誤讀，可在編號(hào)下統(tǒng)一劃?rùn)M線，如16，若反過(guò)來(lái)讀作91，加橫線后為16，則不易混淆。

1.5 采血程序（1）采血后用一次性注射器存送樣，先在一次性注射器上給樣品編號(hào)，采血后把注射器活塞往后拉至少為采血量2倍長(zhǎng)度，再加針頭帽，最后針頭朝上與地面成30～45。斜放，在室溫下靜置2～4h（避免暴曬），待血清自然析出。（2）采血后轉(zhuǎn)注離心管送樣，先在離心管上給樣品編號(hào)，然后把注射器針頭取下，沿離心管壁將全血緩慢注入，最后蓋緊離心管管帽。

1.6 采血量 全血不少于5ml。析出血清量，畜不少于1ml，禽不少于0.5～1ml。

2 送樣環(huán)節(jié)影響

2.1 全血運(yùn)輸 運(yùn)送全血樣品時(shí)一定要輕拿輕放，不要?jiǎng)×艺饎?dòng)。使用血液樣品專用運(yùn)輸箱運(yùn)送更好.

2.2 運(yùn)輸時(shí)間 能在6h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室的，作冷藏處理運(yùn)輸；不能在6h內(nèi)送達(dá)的，作冷凍處理后冷藏運(yùn)輸。

3 實(shí)驗(yàn)室環(huán)節(jié)影響

3.1 血清析出良好 接收的樣品若血清析出良好，可直接將血清轉(zhuǎn)入離心管，按實(shí)驗(yàn)室規(guī)定程序編號(hào)檢測(cè)。

3.2 血清析出較差 接收的樣品若血清析出較差或室外氣溫過(guò)低，可放入37℃恒溫箱中1h或25～37℃水浴鍋中1h作預(yù)處理，再用離心機(jī)1500～2000r/min作5min離心。

3.3 實(shí)驗(yàn)室適宜環(huán)境 實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)在23℃±2℃，相對(duì)濕度40%～70%。

3.4 不同材質(zhì)容器影響 玻璃試管血清析出效果優(yōu)于塑料離心管。

3.5 血清在實(shí)驗(yàn)室的保存（1）短時(shí)間保存，若4℃冷藏保存，時(shí)間最多不能超過(guò)1個(gè)月。（2）長(zhǎng)時(shí)間保存，若-20℃冷凍保存，忌反復(fù)凍融。

4 異常情況分析

4.1 異常情況 血清有析出，但呈膠凍樣；血清有析出，但伴隨溶血現(xiàn)象；無(wú)血清析出；血清中有沉淀。

4.2 異常情況分析（1）血清呈膠凍樣的原因：畜禽在剛采食后不久進(jìn)行采血所致；采血后靜置時(shí)間很短即用離心機(jī)離心；所采血?jiǎng)游锉烨榱己茫瑺I(yíng)養(yǎng)過(guò)剩，形成脂血。（2）出現(xiàn)溶血的原因：采血后未經(jīng)靜置即運(yùn)送；采血后送檢時(shí)樣品發(fā)生劇烈震動(dòng)；采血后由注射器轉(zhuǎn)入離心管時(shí)，未取下針頭即快速轉(zhuǎn)移血液，致紅細(xì)胞受擠壓破裂出現(xiàn)溶血；采血用注射器未干燥，內(nèi)壁濕潤(rùn)。（3）無(wú)血清析出的原因：全血量過(guò)少；血液在一次性注射器中靜置時(shí)，注射器活塞沒(méi)有往后拉留出空間致血清無(wú)法析出；采血時(shí)出血不連續(xù)，出現(xiàn)空泡。（4）血清中有沉淀原因分析：血清置37℃下時(shí)間太長(zhǎng)，易出現(xiàn)渾濁或沉淀；血清由室溫轉(zhuǎn)入-20℃冷凍保存或由-20℃冷凍保存狀態(tài)轉(zhuǎn)入室溫時(shí)未經(jīng)過(guò)冷藏并經(jīng)搖勻處理，易出現(xiàn)沉淀；血清在高于60℃環(huán)境下時(shí)，球蛋白和白蛋白出現(xiàn)凝結(jié)沉淀。

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：王榮華（河南省博愛縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 454450） 中圖分類號(hào)：S851.4C

文章編號(hào)：1007-1733（2016）04-0032-01

收稿日期：（2016–01–22）