木竹果樹皮化學(xué)成分及其抗炎活性的研究

徐 婧， 崔圓圓， 牛艷芬， 楊光忠， 陳 玉*（.中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430074；.中南民族大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，湖北武漢430074）

?

木竹果樹皮化學(xué)成分及其抗炎活性的研究

徐 婧1， 崔圓圓1， 牛艷芬2， 楊光忠1， 陳 玉2*
（1.中南民族大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430074；2.中南民族大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，湖北武漢430074）

摘要：目的 研究木竹果Garcinia multiflora Champ樹皮的化學(xué)成分及其抗炎活性。方法 木竹果樹皮的乙酸乙酯提取物采用硅膠和HPLC色譜柱進(jìn)行分離純化，波譜技術(shù)鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)，MTT法檢測化合物對IAW264.7細(xì)胞活力的影響，Griess法檢測LPS誘導(dǎo)的IAW264.7細(xì)胞中一氧化氮（NO）水平。結(jié)果 從中分離并鑒定出了9個(gè)化合物，分別為β-胡蘿卜苷（1）、2，6-二甲氧基對苯醌（2）、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸（3）、4-丙酮基-3，5-二甲氧基-1，4-對醌醇（4）、1-羥基-3，6，7-三甲氧基口山酮（5）、1，6-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮（6）、GB1a g1ucoside（7）、vo1kensif1avone（8）、fukugetin（9）。其中，化合物8和9可抑制NO的生成，IC50分別為25.48和44.17 μmo1/L。結(jié)論化合物1～5為首次從該植物中分離得到，而且化合物8和9具有一定的抗炎作用。

關(guān)鍵詞：木竹果；樹皮；化學(xué)成分；抗炎活性

7-dimethoxyxanthone（6），GB1a g1ucoside（7），vo1kensif1avone（8），fukugetin（9）.Among them，compounds8

and 9 cou1d inhibit NO production with the IC50va1ues of25.48 and 44.17 μmo1/L，respective1y.C0NCLUSI0 N Compounds 1-5 are iso1ated from the barks of Garcinia multiflora Champ for the first time.In addition，compounds 8 and 9 show anti-inf1ammatory activities.

KEY W 0 RDS：Garcinia multiflora Champ；barks；chemica1 constituents；anti-inf1ammatory activities

木竹果Garcinia multiflora Champ是藤黃科藤黃屬植物，分布于云南、廣西、臺灣等地，具有消炎止痛，收斂生肌的功效［1］，其主要化學(xué)成分為口山酮［2-3］、二苯甲酮［4］、間苯三酚［5-6］和黃酮類［7］化合物。其中，黃酮類化合物具有抗HIV-1活性，而藤黃雙黃酮對PBM細(xì)胞中病毒復(fù)制的抑制作用尤為顯著，EC50為6.9 μmo1/L［8］；間苯三酚類化合物能抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［9］，具有抗腫瘤作用；二苯甲酮類和間苯三酚類化合物均有一定的抗炎作用［10］。由于木竹果中的化學(xué)成分具有廣泛的藥理活性，為進(jìn)一步從中尋找活性天然產(chǎn)物，本實(shí)驗(yàn)以廣西木竹果樹皮為研究對象，對其進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，結(jié)果分離出9個(gè)化合物（1～9），其中甾體1個(gè)、醌類2個(gè)、口山酮類2個(gè)、簡單芳香酸1個(gè)、雙黃酮3個(gè)。然后，利用MTT法和Griess法對其化學(xué)成分進(jìn)行了抗炎活性篩選，發(fā)現(xiàn)雙黃酮vo1kensif1avone（8）和fukugetin（9）具有一定的抗炎活性，為進(jìn)一步開發(fā)這一藥用植物奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

木竹果樹皮采自廣西，經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究院騰紅麗研究員鑒定為木竹果Garcinia multiflora Champ的樹皮。薄層色譜、柱色譜硅膠（青島海洋化工有限公司）。U1timate 3000 HPLC色譜儀；Waters 5C18-MS-II層析柱（10 mm×250 mm）；Bruker-AM 400核磁共振儀；Tecan Infinite M200酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司）。IAW264.7細(xì)胞（中國典型培養(yǎng)物保藏中心）；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清（美國Hyc1one公司）；脂多糖、地塞米松（美國Sigma公司）；Griess檢測試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。所用試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取分離 取木竹果樹皮1.2 kg，粉碎后用95%乙醇室溫浸泡3次，每次24 h，抽濾，濃縮濾液，得到浸膏108 g。甲醇溶解浸膏，石油醚萃取3次，減壓回收下層甲醇，得到浸膏，用水溶解，再依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯提取物52 g。將該部分進(jìn)行硅膠柱層析，氯仿-丙酮梯度洗脫（9∶1、8∶2、7∶3、1∶1、3∶7、2∶8、0∶1），洗脫液減壓濃縮，TLC檢測合并相同流份，得到9個(gè)組分（Fr.I～Fr.VII）。其中，F(xiàn)r.III～Fr.VI經(jīng)重結(jié)晶、硅膠柱層析及HPLC色譜法，分離得到化合物1（31.9 mg）、2（11.6 mg）、3 （7.0 mg）、4（7.0 mg）、5（5.0 mg）、6（7.0

mg）、7（7.5 mg）、8（7.5 mg）、9（945 mg）。

2.2 抗炎活性測定 先采用MTT法，檢測所得化合物對IAW264.7細(xì)胞活力的影響，其質(zhì)量濃度范圍以細(xì)胞存活率大于80%為限。然后，取對數(shù)生長期的IAW264.7細(xì)胞，用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基制成密度為2×105個(gè)/mL的單細(xì)胞懸液，均勻接種于96孔板中，置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中過夜。將細(xì)胞分為溶劑對照組（不加脂多糖和化合物）、模型組（脂多糖終質(zhì)量濃度為10 μg/mL）、陽性對照組（脂多糖和地塞米松終質(zhì)量濃度為10 μmo1/L）和給藥組，根據(jù)MTT結(jié)果，在細(xì)胞存活率大于80%的范圍內(nèi)設(shè)置4個(gè)質(zhì)量濃度梯度，并且脂多糖的終質(zhì)量濃度也為10 μg/mL。培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞培養(yǎng)液的上清液，Griess法檢測其中NO的含有量。

3 結(jié)果與分析

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，分子式為C35H60O6。1HNMI（400 MHz，DMSO-d6）δ：5.32（1H，s，H-6），4.21（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1＇），3.60（1H，m，H-3），0.95（3H，s，19-CH3），0.88（3H，d，J＝6.0 Hz，21-CH3），0.64（3H，s，18-CH3）。13CNMI（100 MHz，DMSO-d6）δ：38.3（C-1），29.3 （C-2），76.8（C-3），39.3（C-4），140.5（C-5），121.3（C-6），33.4（C-7），31.5（C-8），49.7（C-9），36.3（C-10），20.7（C-11），27.9（C-12），42.0（C-13），56.3（C-14），24.0（C-15），31.5 （C-16），55.5（C-17），11.7（C-18），19.0（C-19），35.6（C-20），19.2（C-21），36.9（C-22），25.4（C-23），45.2（C-24），28.8（C-25），18.7 （C-26），19.8（C-27），22.7（C-28），11.9（C-29），100.8（C-1＇），73.5（C-2＇），77.0（C-3＇），70.1（C-4＇），76.8（C-5＇），61.1（C-6＇）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道的β-胡蘿卜苷一致。

化合物2：橘黃色粉末，分子式為C8H8O4，EI-MS（70 eV）：168（100，M＋），153（9），138 （35），69（39）。1H-NMI（400 MHz，DMSO-d6）δ：5.93（2H，s，H-3，5），3.82（6H，s，2，6-OCH3）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道的2，6-二甲氧基對苯醌一致。

化合物3：白色粉末，分子式為C8H8O4，EIMS（70 eV）：168（100，M＋），153（69），125 （22），97（39）。1H-NMI（400 MHz，CD3OD）δ：7.51（1H，s，H-2），6.75（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5），7.47（1H，d，J＝8.4 Hz，H-6），3.84（3H，s，3-OCH3）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道的4-羥基3-甲氧基苯甲酸一致。

化合物4：白色粉末，分子式為C11H14O5，EIMS（70 eV）：226（41，M＋），211（2），183（13），169（100）。1H-NMI（400 MHz，CD3OD）δ：5.39 （2H，s，H-2，6），3.72（6H，s，3，5-OCH3），3.20 （2H，s，H-1＇），2.05（3H，s，H-3＇）。13C-NMI （100 MHz，CD3OD）δ：190.6（C-1），100.9（C-2，6），174.2（C-3，5），71.2（C-4），50.3（C-1＇），207.1（C-2＇），30.8（C-3＇），57.2（3，5-O CH3）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道的4-丙酮基-3，5-二甲氧基-1，4-對醌醇一致。

化合物5：黃色粉末，分子式為C16H14O6。1HNMI（400 MHz，DMSO-d6）δ：13.5（1H，s，1-OH），7.45（1H，s，H-8），7.20（1H，s，H-5），6.59（1H，d，J＝2.0 Hz，H-4），6.41（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2），3.95（3H，s，3-OCH3），3.88（6H，s，6，7-OCH3）。13C-NMI（100 MHz，DMSO-d6）δ：157.2（C-1），96.9（C-2），165.9（C-3），92.6（C-4），100.2（C-5），156.0（C-6），146.7（C-7），104.0（C-8），179.1（C-9），162.4（C-4a），112.3 （C-8a），102.6（C-9a），152.0（C-10a），55.9，56.1，56.6（3，6，7-OCH3）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道的1-羥基-3，6，7-三甲氧基口山酮一致。

化合物6：淺黃色粉末，分子式為C15H12O6。1H-NMI（400 MHz，DMSO-d6）δ：13.1（1H，s，1-OH），7.39（1H，s，H-8），7.11（1H，s，H-5），6.54（1H，d，J＝2.0 Hz，H-4），6.35（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2），3.94（3H，s，3-OCH3），3.86 （3H，s，7-OCH3）。13C-NMI（100 MHz，DMSO-d6）δ：162.4（C-1），96.7（C-2），165.7（C-3），92.4 （C-4），100.8（C-5），155.3（C-6），144.5（C-7），107.4（C-8），179.2（C-9），157.2（C-4a），112.6 （C-8a），102.6（C-9a），151.0（C-10a），56.4，56.0（3，7-OCH3）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報(bào)道的1，6-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮一致。

化合物7～9均為黃色粉末，1H-NMI和13CNMI圖譜都極其復(fù)雜。經(jīng)推測，這3個(gè)化合物均為雙黃酮類成分。在13C-NMI數(shù)據(jù)中，47～50 ppm處有1個(gè)次甲基信號，100～105 ppm處有1個(gè)季碳信號，說明均為雙黃酮的C-3/C-8"連接方式。另外，三者在196～199 ppm處均出現(xiàn)二氫黃酮的羰基信號，而8和9還在181～185 ppm處出現(xiàn)黃酮的羰基信號，說明7為兩個(gè)二氫黃酮連接在一起的雙黃酮，而8和9為二氫黃酮同黃酮連接在一起的雙黃酮。7和8通過主要構(gòu)象的13C-NMI數(shù)據(jù)，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，而9主要有兩種構(gòu)象，通過1H-NMI、13C-NMI、HMBC和HSQC對其進(jìn)行了歸屬，結(jié)果見表1。

表1 化合物91H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)（CD30 D，Hz）Tab.11H-NMR and13C-NMR data of compound 9 （CD30 D，Hz）

化合物7：黃色粉末，分子式為C36H32O15。13C-NMI（100 MHz，CD3OD）δ： 84.0（C-2），50.0（C-3），198.9（C-4），165.8（C-5），97.4（C-6），168.5（C-7），96.4（C-8），165.0（C-9），103.2（C-10），130.4（C-1＇），130.2（C-2＇，6＇），116.5（C-3＇，5＇），158.9（C-4＇），79.5（C-2"），45.1（C-3"），197.8（C-4"），167.1（C-5"），93.8 （C-6"），168.4（C-7"），105.5（C-8"），162.9（C-9"），102.9（C-10"），131.2（C-1?），129.1（C-2?，6?），115.8（C-3?，5?），158.7（C-4?），97.5，74.6，75.8，71.5，74.8，62.3（葡萄糖的碳信號）。結(jié)合文獻(xiàn)［16］報(bào)道的數(shù)據(jù)，鑒定化合物7為GB1a g1ucoside。

化合物8：黃色粉末，分子式為C30H20O10。13C-NMI（100 MHz，CD3OD）δ：82.8（C-2），50.2 （C-3），198.0（C-4），166.0（C-5），96.9（C-6），168.5（C-7），96.6（C-8），165.1（C-9），103.4 （C-10），130.8（C-1＇），130.0（C-2＇，6＇），117.2 （C-3＇，5＇），159.0（C-4＇），165.0（C-2"），103.6 （C-3"），184.1（C-4"），162.9（C-5"），99.5（C-6"），169.2（C-7"），100.1（C-8"），162.8（C-9"），104.2（C-10"），123.2（C-1?），129.5（C-2?，6?），115.8（C-3?，5?），156.7（C-4?）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］報(bào)道的vo1kensif1avone一致。

化合物9：黃色粉末，分子式為C30H20O11。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］報(bào)道的fukugetin一致。

3.2 抗炎活性 MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，化合物3、8、9可在對細(xì)胞活性無影響的前提下，進(jìn)行NO抑制活性篩選，以地塞米松（DM）為陽性對照，結(jié)果見圖1。由圖可知，3個(gè)化合物均可一定程度上抑制NO的產(chǎn)生，其活性強(qiáng)度依次為8＞9＞3，其中化合物8和9的IC50值分別為25.48和44.17 μmo1/L，而3的IC50值大于50 μmo1/L，陽性藥地塞米松（10 μmo1/L）對NO的抑制率為（0.68± 0.008）%。

圖1 化合物3、8、9對N0釋放的影響Fig.1 Effects of compounds 3，8 and 9 on N0 release

文獻(xiàn)［18-20］報(bào)道，vo1kensif1avone（8）與fukugetin（9）均能有效抑制角叉菜膠所致的小鼠足腫脹和巴豆油所致的小鼠耳腫脹，具有抗炎活性。本實(shí)驗(yàn)采用LPS刺激IAW264.7細(xì)胞來建立細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型，測定細(xì)胞上清液中NO的釋放量，發(fā)現(xiàn)兩者均可有效抑制炎癥細(xì)胞NO的釋放，從而發(fā)揮抗炎作用。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典：上冊［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2001.

［2］ Chiang Y M，Kuo Y H，Oota S，et al.Xanthones and benzophenones from the stems of Garcinia multiflora［J］.JNat Prod，2003，66（8）：1070-1073.

［3］ Jing W Y，Jiang C，Ji F，et al.Chemica1constituents from the stem barks of Garcinia multiflora［J］.J Asian Nat Prod Res，2013，15（11）：1152-1157.

［4］ Chen J J，Ting CW，Hwang T L，et al.Benzophenone derivatives from the fruits of Garcinia multiflora and their antiinflammatory activity［J］. J Nat Prod，2009，72（2）：253-258.

［5］ Chien S C，Chyu CF，Chang，IS，etal.A nove1po1ypreny1ated ph1orog1ucino1，garcinia1one，from the roots of Garciniamultiflora［J］.Tetrahedron Lett，2008，49（36）：5276-5278.

［6］ Ting CW，Hwang T L，Chen IS，etal.Garcimu1tif1orone G，a nove1 benzoy1ph1orog1ucino1 derivative from Garcinia multiflora with inhibitory activity on neutrophi1pro-inf1ammatory responses ［J］.Chem Biodivers，2014，11（5）：819-824.

［7］ Jiang G Q，Du F G，F(xiàn)ang G Z.Two new proanthocyanidins from the 1eavesof Garcinia multiflora［J］.Nat Prod Res，2014，28（7）：449-453.

［8］ Lin YM，Anderson H，F(xiàn)1avin M T，etal.In vitro anti-HIV activity of bif1avonoids iso1ated from Rhussuccedanea and Garcinia multiflora［J］.JNat Prod，1997，60（9）：884-888.

［9］ Liu X，Yu T，Gao X M，et al.Apoptotic effects of po1ypreny-1ated benzoy1ph1orog1ucino1derivatives from the twigsof Garcinia multiflora［J］.JNat Prod，2010，73（8）：1355-1359.

［10］ Ting CW，Hwang T L，Chen IS，et al.A new benzoy1ph1orog1ucino1derivativewith an adamanty1ske1eton and other constituents from Garcinia multiflora：effects on neutrophi1pro-inf1ammatory responses［J］.Chem Biodivers，2012，9（1）：99-105.

［11］ 周大穎，楊小生，楊 波，等.黔產(chǎn)毛子草化學(xué)成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19（5）：807-808.

［12］ 馬寧寧，陳光英，宋小平，等.匍匐濱藜的化學(xué)成分［J］.中成藥，2013，35（5）：982-985.

［13］ Luo JI，Jiang H E，Zhao Y X，etal.Componentsof theheartwood of Populuseuphratica from an ancient tomb［J］.Chem Nat Comp，2008，44（1）：6-9.

［14］ Jefferson A，Scheinmann F.Extractives from Guttiferae.Part 33.Synthesis of the ozono1ysis product from dimethy1mangostin，1-hydroxy-3，6，7-trimethoxy-2，8-bis-（2-oxoethy1）xanthone；Some13C nuc1ear magnetic resonance spectra of xanthones［J］.JChem Soc，1977，19：2158-2162.

［15］ Ikeya Y，Sugama K，Okada M，et al.Two xanthones from Polygala tenuifolia［J］. Phytochemistry，1991，30（6）：2061-2065.

［16］ Compagnone I S，Suarez A C，Leitao S G，et al.F1avonoids，benzophenones and a new euphane derivative from Clusia columnaris Eng1［J］.Rev Bras Farmacogn，2008，18（1）：6-10.

［17］ Masuda T，Yamashita D，Takeda Y，etal.Screening for tyrosinase inhibitors among extracts of seashoe p1ants and identification of inhibitors from Garcinia subelliptica［J］.Biosci Biotechnol Biochem，2005，69（1）：197-201.

［19］ OtukiM F，BernardiG A，Prudente A S，etal.Garcinia gardneriana（P1anchon &Triana）Zappi.（Clusiaceae）as a topica1 anti-inf1ammatory a1ternative for cutaneous inf1ammation［J］. Basic Clin Pharmocol，2011，109（1）：56-62.

［20］ Castardo JC，Prudente A S，F(xiàn)erreira J，etal.Anti-inf1ammatory effects of hydroa1coho1ic extract and two bif1avonoids from Garcinia gardneriana 1eaves in mouse paw oedema［J］.J Ethnopharmacol，2008，118（3）：405-411.

Chem ical constituents and their anti-inflammatory activities of the barks of Garcinia multiflora Cham p

XU Jing1， CUIYuan-yuan1， NIU Yan-fen2， YANG Guang-zhong1， CHEN Yu2*

（I.College of Pharmacy，South-Central University for Nationalities，Wuhan 43OO74，China；2.Collegeof Chemistry and Material Sciences，South Central University for Nationalities，Wuhan 43OO74，China）

ABSTRACT：AIM To study the chemica1constituents and their anti-inf1ammatory activities of the barks of Garcinia multiflora Champ.M ETH 0 DS The ethy1acetate extract of the barks of Garcinia multiflora Champ was iso-1ated and purified by Si1ica and HPLC co1umn，and the structures of obtained compoundswere identified by spectrum techno1ogies.Then the effects of compounds on the pro1iferation of IAW264.7 were determined by MTT assay，and the 1eve1s of NO in LPS-induced IAW264.7 were tested by Griess reagent.RESULTS Nine compounds were iso1ated and identified asβ-daucostero1（1），2，6-dimethoxy benzoquinone（2），4-hydroxy-3-methoxy benzoic acid（3），4-acetony1-3，5-dimethoxy-p-quino1（4），1-hydroxy-3，6，7-trinzethoxyxanthone（5），1，6-dihydroxy-3，

*通信作者：陳 玉（1970—），女，博士，副教授，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。Te1：15337115246，（027）67842752，E-mai1：chenyuwh888@126.com

作者簡介：徐 婧（1982—），女，博士，講師，研究方向?yàn)槊褡逅幓钚猿煞帧e1：18971455927，（027）67841196，E-mai1：xuj@ mai1.sceuc.edu.cn

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31370379）；國家民委科研項(xiàng)目（CMZY13012）

收稿日期：2015-08-15

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.021

中圖分類號：I284.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1001-1528（2016）03-0579-05